蔡春芳
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类多药耐药mdr1基因启动子的克隆及其转录活性的研究
- 2005年
- 目的克隆编码多药耐药基因(mdr1)的启动子片段并探讨其在上皮性卵巢癌中的转录活性。方法2002年9月至2003年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院以人类基因组为模板扩增人类mdr1基因的启动子片断,并将启动子分别插入到pGEMT载体和荧光素酶报告基因载体中。将重组荧光素酶报告基因系统分别转染紫杉醇耐药(A2780/Taxol)和紫杉醇敏感细胞(A2780),比较启动子在两种细胞中的活性;同时将转染后的A2780/Taxol用曲古霉素A(TSA)处理,观察TSA对启动子转录活性的影响。结果mdr1启动子在耐药细胞A2780/Taxol中表现出比A2780强的启动子活性,这种活性在TSA诱导后能够提高。结论成功克隆了mdr1启动子片段,在A2780/Taxol细胞中mdr1启动子的功能活性的研究为下一步对多耐药性卵巢癌进行靶向基因治疗提供了重要依据。
- 蔡春芳蔡俐琼李敏卢实王泽华
- 关键词：转录活性克隆A2780MDR1基因靶向基因治疗敏感细胞
- 含mdr1启动子的荧光素酶报告基因质粒的构建
- 2005年
- 目的克隆编码mdr1基因的启动子并插入荧光素酶报告基因载体。方法用PCR技术扩增出人类mdr1基因启动子片段,通过亚克隆将启动子分别插入到pGEMT载体和荧光素酶报告基因pGL3enhancer载体中,并确定扩增DNA的序列。结果测序结果显示扩增mdr1启动子序列正确。结论成功克隆了mdr1启动子,为下一步对多耐药性卵巢癌进行靶向基因治疗提供了重要基础。
- 蔡春芳蔡俐琼王泽华
- 关键词：多药耐药基因-1启动子荧光素酶报告基因
- MDR1启动子调控CD∷尿嘧啶磷酸核糖转移酶重组腺病毒载体的构建及表达被引量：5
- 2005年
- 目的构建由人MDR1启动子调控CD∷upp融合基因表达的重组腺病毒,为对耐药肿瘤体内外靶向基因治疗奠定基础。方法自行设计一对含XhoⅠ和HindⅢ酶切位点的MDR1引物,从外周血中提取人类基因组DNA,通过PCR扩增MDR1启动子并插入PGL3-enhancer载体上,获得PGL3-MDR1质粒。从PORF-CD∷upp质粒中切下CD∷upp基因,插入PGL3-MDR1中MDR1启动子下游,并从中切下目的基因MDR1-CD∷upp,克隆到腺病毒穿梭质粒中,将带目的基因的穿梭质粒pAdTrack-MDR1-CD∷upp。与含有pAdeasy-1的BJ5183菌电转化,筛选提取>30 kb的阳性克隆,经线性化后转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增出重组腺病毒中的目的基因MDR1、CD∷upp等方法加以鉴定。结果成功构建了含MDR1-CD∷upp靶向自杀基因的重组腺病毒载体Ad-MDR1-CD∷upp,病毒滴度为3.0×1010pfu/ml。结论该重组腺病毒的构建为下一步研究其对MDR1耐药细胞系的特异性杀伤作用和对耐药肿瘤模型的靶向基因治疗提供基础。
- 卢实黄畦蔡春芳陈大瑜王泽华
- 关键词：胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶磷酸核糖转移酶腺病毒重组腺病毒载体启动子CD靶向基因治疗
