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转基因骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠造血和免疫功能重建的研究: 探讨可诱导表达细胞因子基因的骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠造血和免疫功能重建的效果.结论：应用含有外源基因的可调探表达逆转录病毒感染骨髓基质细胞系后，成功建立了Dox可诱导细胞因子基因表达的工程化骨髓基质细胞系，对造...; 蒋激扬; 关键词：基因治疗异基因骨髓移植造血重建免疫重建

高效液相色谱法测定血清中多西环素被引量：29: 2002年; 目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定血清中多西环素的方法。方法:美国Spectra-Physics高效液相色谱系统,色谱柱为Inertsil ODS-3。流动相为乙腈-水（50:50,v/v,含0.15％三氟乙酸）,流速为1.0mL·min-1,柱温为室温,紫外检测波长为350nm。血清中加入内标土霉素,经C18固相萃取小柱提取后进样测定。结果:多西环素的线性范围为0.125～5.0mg·L-1,最低检出浓度为10μg·L-1。样本回收率为90.6％～104.3％。日内精密度<4.51％,日间精密度<5.30％。结论:本方法较为简便,结果准确可靠,适用于多西环素的药代动力学研究。; 王旗蒋激扬谢蜀生; 关键词：血药浓度高效液相色谱法血清多西环素

转IL-3基因的骨髓基质细胞体外对造血功能的促进作用被引量：4: 2001年; 目的探讨用逆转录病毒载体转入 m IL - 3基因的基质细胞系 QXMSC1对骨髓造血细胞前体的影响。方法用含鼠 IL - 3基因的逆转录病毒载体感染骨髓基质细胞系 QXMSC1,获得 IL - 3高表达细胞系 QXMSC1IL - 3用于实验。观察QXMSC1IL - 3细胞上清对骨髓前体细胞 CFU- GM、CFU - E、CFU - GEMM的影响 ,QXMSC1IL - 3基质细胞对长期培养起始细胞的影响。结果 QXMSC1IL- 3培养上清对骨髓前体细胞、CFU- GM、CFU- E、CFU- GEMM有明显促进作用。QXMSC1IL- 3能明显增加有核细胞数和长期培养起始细胞数 ,诱导分化形成 CFU- GM增多。阻断基质细胞与造血细胞相互接触 ,QXMSC1IL- 3促造血细胞增殖作用有所减弱。结论基质细胞 QXMSC1IL- 3可能作为有效的基因载体进一步促进骨髓移植后或辐射损伤后的造血和免疫功能重建。; 蒋激扬郝洁谢蜀生; 关键词：骨髓基质细胞系造血功能 IL-3 骨髓移植

可调控表达IL-2基因骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建被引量：1: 2003年; 目的　探讨可调控表达IL 2基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的促进作用。方法　构建四环素诱导的表达小鼠IL 2基因的逆转录病毒载体 ,转染包装细胞PT6 7,感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建可诱导表达IL 2基因的工程化骨髓基质细胞系QXM SC1tet on IL 2。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB c(H 2 d)骨髓细胞1× 10 7 只 (去除T细胞 ) ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on IL 2 5× 10 5 只。灌服多西环素 (Dox)诱导IL 2表达。于骨髓移植 (BMT)后 30d、6 0d检测小鼠脾细胞对ConA的反应强度 ,空斑形成细胞(PFC)数和迟发型超敏反应 (DTH) ,脾细胞中T辅助细胞前体频数 (HTLp)及移植后小鼠脾脏T细胞亚群CD4 + CD8+ 的比值 ,评价BMT后免疫功能的恢复情况。结果　成功建立四环素诱导IL 2基因表达的基因工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on IL 2。异基因BMT、联合输注QXMSC1tet on IL 2能显著提高BMT小鼠脾细胞对ConA的反应 ,增加脾脏淋巴细胞HTLp及PFC数目 ,并使DTH反应增强 ,改善小鼠脾脏T细胞亚群CD4 + CD8+ 的比值。结论　共输注可调控表达IL 2基因的骨髓基质细胞可促进异基因移植小鼠免疫功能重建。; 蒋激扬李爱玲刘翠青王光明马建波谢蜀生; 关键词：异基因骨髓移植白细胞介素-2 免疫重建骨髓基质细胞

转染IL-6基因骨髓基质细胞系对骨髓移植后免疫功能重建的促进作用被引量：3: 2002年; 目的　探讨转染IL 6基因的骨髓基质细胞系对同基因骨髓移植 (BMT)后小鼠免疫功能重建的促进作用。方法　将IL 6cDNA片段连接到pcDNA3真核表达载体上。用脂质体将pcD NA3IL 6转入骨髓基质细胞系QXMSC1,ELISA法测定转染IL 6基因骨髓基质细胞QXMSC1IL 6培养上清中IL 6的含量 ,有限稀释挑选多个细胞克隆 ,选择表达量最高的转基因细胞系QXMSC1IL 6用于动物实验。BABL c小鼠经γ射线致死量照射后 ,输入同基因骨髓细胞 (10 7 只 )同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 6 (5× 10 5 只 )。在骨髓移植后 30d、6 0d检测BMT小鼠淋巴细胞对LPS ,ConA增殖反应 ,T辅助细胞前体 (helpTlymphocyteprecursor,HTLp) ,杀伤性T细胞前体 (cytotoxicTlymphocyteprecursor,CTLp) ,迟发型超敏反应 (delayed typehypersensitivity ,DTH)及空斑形成细胞数 (plaqueformingcell,PFC) ,反映骨髓移植后小鼠免疫功能。结果　成功构建pcDNA3IL 6重组体。该细胞体外培养 2 4h分泌IL 6的含量为 11.15 (± 2 .4 1) μg 10 6 。QXMSC1IL 6细胞系能明显增强BMT后淋巴细胞对LPS、ConA反应性 ,小鼠对异基因小鼠脾细胞DTH反应增强 ,脾脏中HTLp ,CTLp及PFC数明显增加。转入外源IL 6cDNA基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 6在体内能明显促进BMT后小鼠T、B淋巴?; 秦凤华蒋激扬金永柱郝洁谢蜀生; 关键词：骨髓移植骨髓基质细胞免疫重建

多西环素诱导表达下IL-3基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血被引量：5: 2003年; 本研究探讨用多西环素调控IL 3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL 3基因逆转录病毒载体系统 ,转染小鼠骨髓基质细胞系 ,获得QXMSC1Tet on IL 3;体外加入多西环素诱导IL 3基因表达并检测IL 3表达活性 ;观察细胞培养条件上清液对造血祖细胞集落形成单位的作用及QXMSC1Tet on IL 3与骨髓细胞共培养对造血干细胞增殖分化的影响。结果表明 :多西环素提高了QXMSC1Tet on IL 3细胞系IL 3的表达 ,促进骨髓造血祖细胞克隆形成数 ;与骨髓细胞共培养可促进造血干细胞的增殖分化。结论 :应用多西环素诱导外源基因转染的骨髓基质细胞IL 3的表达。; 蒋激扬李爱玲谢蜀生; 关键词：多西环素 IL-3 骨髓基质细胞基因转染

转染IL-3基因的骨髓基质细胞促进骨髓移植小鼠造血功能重建被引量：7: 2003年; 为了探讨可调控表达IL 3基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠造血功能重建的促进作用 ,建立了可诱导表达IL 3基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,加入多西环素 (Dox)诱导骨髓基质细胞系表达IL 3并检测其活性。C5 7BL/ 6 (H 2 b)小鼠经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB/C(H 2 d)小鼠去除T细胞的骨髓细胞 1× 10 7/只 ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on +IL 35× 10 5/只 ,并灌服多西环素诱导IL 3表达。在第 30天 ,6 0天检测骨髓移植小鼠外周血红细胞 ,白细胞数 ,骨髓有核细胞数 ,骨髓CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果表明 :成功建立可诱导表达IL 3基因的骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,异基因骨髓移植共输注基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3可使异基因骨髓移植小鼠外周血红细胞、血小板、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E ,CFU GMEE明显增加。结论 :输注基因工程化基质细胞 ,并诱导细胞因子IL; 蒋激扬李爱玲王光明马建波郝洁关志强谢蜀生; 关键词：骨髓基质细胞骨髓移植造血功能小鼠细胞数

转IL-3基因骨髓基质细胞对异基因骨髓移植后小鼠造血重建的促进作用被引量：4: 2002年; 目的　探讨转IL 3基因的小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (allo BMT)小鼠造血功能的促进作用。方法　用重组逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA)感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3,挑选表达量最高的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3用于以后实验。供体小鼠BALB c(H 2 d)骨髓用抗T细胞单抗anti Thy1.2加补体去除骨髓中T细胞。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入供体骨髓细胞 (1× 10 7 只 )的同时输入QXMSC1IL 3(5× 10 6 只 )细胞。在骨髓移植后第 2 0 ,4 0天 ,分别检测受体小鼠外周血红细胞、白细胞、骨髓有核细胞数 ,CFU S、CFU GM、CFU E和CFU GEMM数以反映骨髓移植后受体小鼠的造血功能。结果　QXMSC1IL 3细胞系可稳定分泌IL 3。allo BMT同时输入QXMSC1IL 3细胞可使allo BMT小鼠外周血红细胞、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数、CFU S、CFU GM、CFU E、CFU GEMM明显增加。结论　基质细胞QXMSC1可作为有效的基因载体进一步促进allo BMT小鼠造血功能重建。; 蒋激扬张敬妹郝洁谢蜀生; 关键词：骨髓基质细胞异基因骨髓移植小鼠造血重建白细胞介素-3

IL-3、IL-6联合转基因的基质细胞促进异基因小鼠骨髓移植后的免疫重建: 2002年; 探讨转染IL 3和IL 6基因的骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (BMT )小鼠免疫功能重建的促进作用。用逆转录病毒载体将小鼠IL 3和IL 6基因转染到骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,分别建立基质细胞系QXMSC1IL 3、QXMSC1IL 6及QXMSC1IL 3/IL 6 ,供体BALB/c(H 2 d)小鼠骨髓去除T细胞 ,致死量照射 (9 0Gy)受体小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)后 ,输入供体骨髓细胞 (1× 10 5/只 )的同时输入基质细胞QXMSC1IL 3/IL 6 (5× 10 5/只 )。在骨髓移植后 30d、 6 0d ,检测BMT小鼠脾细胞对LPS、ConA的反应强度、脾细胞中辅助性T淋巴细胞前体频数 (HTLp )、杀伤性T淋巴细胞前体频数 (CTLp )、抗体生成细胞 (PFC )的能力及对迟发型超敏反应 (DTH )的能力来评价BMT后免疫功能的恢复情况。异基因BMT并输入基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6可明显增强BMT后淋巴细胞对LPS、ConA反应强度 ,小鼠对异基因小鼠脾细胞DTH反应增强 ,脾淋巴细胞HTLp、CTLp及PFC数明显增加。基质细胞QXMSC1可作为有效的基因载体明显促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建。联合转入IL 3和IL; 蒋激扬金永柱郝洁张庆殷谢蜀生; 关键词：骨髓基质细胞

供体骨髓细胞促进大鼠心脏移植耐受及机制的研究: 2002年; 经门静脉给予受体LEW大鼠3×108个DA大鼠供体脾细胞,2 d后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺,第4天由舌静脉输注1×108骨髓细胞.2周后实施心脏移植手术.观察、记录移植物的存活时间,通过过继性转移实验,MLR、CTL活性测定及嵌合体分析,探讨耐受机制.结果表明,异基因心脏移植物的存活时间进一步延长;该耐受状态可被过继性转移;MLR、CTL活性表明,受体大鼠的免疫应答被特异性抑制;嵌合体水平提高.结论:异基因骨髓细胞输注可加深由脾细胞和环磷酰胺诱导的大鼠心脏移植耐受,该耐受与嵌合体水平、抑制细胞的存在有关.输注骨髓细胞对于改善、维持耐受状态,延长大鼠心脏移植物存活时间是一有效的方法.; 张庆殷郝洁蒋激扬张海滨谢蜀生; 关键词：移植耐受骨髓细胞脾细胞心脏移植

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