胡克平
- 作品数：14 被引量：44H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Cas12f1突变体及其应用
- 本发明提供一种Cas12f1突变体及其应用，主要包括四种点突变蛋白，分别为在野生型Cas12f1蛋白上发生K173A、K186A、K196A、K198A氨基酸位点突变，本发明中的CRISPR‑Cas12f1系统(含有突变...
- 吴青胡克平
- 一种新的延胡索酸水合酶抗体的制备及功能研究
- 2013年
- 延胡索酸水合酶(fumarate hydratase,FH)是三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA)中的一个关键性酶。FH的基因突变将导致延胡索酸合酶缺乏症、遗传性平滑肌瘤和肾细胞癌(hereditary leiomyomatosis and renal cell carcinoma,HLRCC)等疾病。FH缺失导致HLRCC分子的确切生物学机制尚不明确。作者将FH基因片段克隆到原核表达载体上,在大肠杆菌中表达GST-FH(400-510)融合蛋白。该融合蛋白为抗原免疫小鼠获得抗体,通过免疫印迹实验证明了该抗体的特异性并发现FH在心脏和肝脏中的含量较高。通过免疫共沉淀实验发现,在大鼠肝脏组织中FH可能与多个蛋白形成蛋白复合物。
- 付美红乐亮成钟谢勇高海钱火连李海涛胡克平
- 关键词：多克隆抗体免疫印迹免疫共沉淀
- CRISPR-Cas13a系统在DNA检测中的应用
- 本发明涉及CRISPR‑Cas13a系统在DNA检测中的新应用，发明人通过研究发现，CRISPR‑Cas13a系统可以将DNA作为直接检测靶标，激发其非特异性的反式RNase活性，并能显著性提高CRISPR‑Cas13a...
- 吴青胡克平
- 杜仲雄花在制备调节生物昼夜节律产品中的用途
- 本发明涉及中药技术领域，公开了杜仲雄花在制备调节生物昼夜节律产品中的用途。本发明提供了杜仲雄花在制备调节生物昼夜节律产品中的用途，为生物昼夜节律的调节，特别是生物昼夜节律相关信号通路基因表达水平的调节，提供了一种新的方法...
- 胡克平李彩虹付慧吴青高海王晓英王栋许旭东张卫东
- 基于噬菌体展示技术和新型冠状病毒的抗体检测方法构建及验证
- 2022年
- 目的构建基于噬菌体展示技术和新型冠状病毒的抗体检测方法,并验证其应用效果。方法制备含有新型冠状病毒受体结合域(RBD)及E484K、N501Y突变RBD片段的重组噬菌体,采用Western blotting法验证重组噬菌体展示效果。使用高吸附ELISA板包被RBD抗体及包被液作为实验组及对照组,分别加入RBD、突变RBD重组噬菌体以结合抗体,qPCR法扩增噬菌体的基因片段以间接地反映抗体与重组噬菌体的特异性结合情况。使用高吸附ELISA板包被经RBD免疫后分离的羊驼血清,加入含RBD片段的重组噬菌体及不含重组片段的噬菌体,qPCR法观察重组噬菌体在生物样本中与RBD抗体的特异性结合情况。使用高吸附ELISA板包被RBD抗体,加入含RBD及含突变RBD的重组噬菌体,qPCR法观察点突变对RBD与抗体结合能力的影响。结果通过Western blotting可以检测到清晰且符合预期大小的重组噬菌体条带。包被RBD抗体的实验组扩增噬菌体基因片段拷贝数均高于对照组(P均<0.01);加入含RBD片段重组噬菌体的羊驼血清扩增片段拷贝数高于加入无外源片段噬菌体的扩增片段拷贝数(P<0.01);加入含RBD片段重组噬菌体的RBD抗体扩增片段拷贝数高于加入含突变RBD片段重组噬菌体的扩增片段拷贝数(P<0.01)。结论成功构建基于噬菌体展示技术的抗体检测方法,该方法展示新型冠状病毒RBD片段的效果良好,并且在研究由病原突变导致的免疫逃逸方面具有潜在价值。
- 李申陈汉祎余卓营胡克平王建勋
- 关键词：噬菌体展示技术新型冠状病毒抗体检测基因突变免疫逃逸
- Rett综合征相关基因MeCP2敲除大鼠模型的构建及分析被引量：3
- 2016年
- MeCP2(Methyl CpG binding protein 2)基因突变可导致Rett综合征(Rett syndrome,RTT)。目前已报道的MeCP2敲除小鼠表型与RTT病人症状存在显著差异。为探索MeCP2在脑发育中的作用及其导致RTT的机制,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了MeCP2基因敲除大鼠模型。通过构建靶向敲除MeCP2基因的载体,体外将Cas9 mRNA和sgRNA显微注射到SD大鼠受精卵中,在MeCP2基因exon2中造成移码突变,从而获得MeCP2基因敲除大鼠。利用测序和Westernblotting方法鉴定MeCP2敲除大鼠,并对其表型和行为学特征进行分析,发现MeCP2敲除大鼠体重降低,存在焦虑倾向和认知缺陷。本研究成功构建了MeCP2基因敲除大鼠模型,其表型类似人类RTT患者的症状,为后续MeCP2功能研究提供了更好的动物模型。
- 翟伟胡宏秀乐亮庄峰峰王克柱赵英王凯刘新民孙迪安王晓英匡世焕胡克平
- 关键词：MECP2SD大鼠模型RETT综合征
- 人源酪蛋白激酶Ⅱ催化亚基的构建及表达纯化被引量：1
- 2020年
- 目的:构建人源CK2催化亚基pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2重组质粒,并进行原核表达纯化得到高纯度融合蛋白,为进一步开展CK2生理病理机制研究以及CK2作为肿瘤抑制靶点相关抑制剂的筛选和评价提供实验基础。方法:利用合成的人源csnk2a1和csnk2a2目的基因片段,将酶切连接得到的重组质粒经测序验证后,进行大肠杆菌感受态BL21 (DE3)/Transetta (DE3)转化。使用合适浓度IPTG诱导融合蛋白的表达以得到可溶性的融合蛋白,并应用AKTA avant蛋白纯化仪和Ni2+-NTA预装柱进行纯化,蛋白纯度最后经SDS-PAGE胶分离后考马斯亮蓝染色和Western Blot检测鉴定。结果:测序结果表明pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒均成功被构建;经转化诱导表达后,成功纯化得到相对分子量为42KD的his-hcsnk2a1和38KD的his-hcsnk2a2目的融合蛋白。结论:首次成功构建得到pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒;并表达纯化得到高浓度和高纯度的his-hcsnk2a1和his-hcsnk2a2融合蛋白,为后期的蛋白功能研究和抑制剂筛选评价提供了基础。
- 柏学李彩虹佟红娜胡克平高海
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 中药蛋白质组学研究策略被引量：20
- 2016年
- 蛋白质组学在中药研究中的应用已十分广泛,有许多较为成功的实例。作者回顾了前人应用蛋白质组学技术对中药复杂体系的研究工作,并提出建立一门专门针对中药研究的蛋白组学,即中药蛋白质组学。该文对中药蛋白质组学的研究策略及未来的研究方向进行了综述和思考,希望为从事中药蛋白质组学研究者提供一点思路。
- 乐亮姜保平徐江胡克平陈士林
- 关键词：生物信息学蛋白质相互作用
- 紫铆因通过抑制p53信号通路对抗丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡被引量：4
- 2018年
- 目的探讨紫铆因对丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用不同剂量的紫铆因预处理1 h后,1.5 mmol·L^(-1)丙酮醛诱导PC12细胞凋亡,MTT及LDH比色法分析细胞存活率及细胞毒性;PI及Hoechst 33342双染法分析细胞凋亡及坏死;逆转录PCR检测促凋亡基因p53、caspase-9和抗氧化基因SOD2的表达;免疫印迹法检测p53、caspase-9的蛋白表达。结果不同剂量的紫铆因预处理PC12细胞1 h后,可明显对抗丙酮醛引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,减少细胞核固缩、碎裂,抑制促凋亡基因p53、caspase-9的过表达,提高抗氧化基因SOD2的表达。结论紫铆因能明显对抗丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡,作用机制与其抗氧化活性,降低促凋亡基因p53、caspase-9的表达有关。
- 乐亮徐江徐江姜保平许利嘉胡克平陈士林
- 关键词：丙酮醛PC12细胞凋亡P53CASPASE-9
- 黄连及含小檗碱类生物碱的中草药被引量：16
- 2016年
- 黄连是一种常用中药,富含小檗碱类生物碱。最近研究表明,小檗碱具有多种药理活性,特别是对慢性退行性疾患有良好防治作用,重新受到广泛关注。本文对含小檗碱类生物碱的中草药进行了整理。黄连、黄柏在《神农本草经》中均为上品。黄连,黄柏、关黄柏、黄藤、功劳术、金果榄、三颗针等七种物品收载在《中国人民共和同药典》中,此类中草药集中分布于毛茛科、小檗科、防己科、芸香科等药用植物类群中,组成生物、化学、药理上的多样性,值得我们进一步重视、研究与开发。
- 肖培根肖伟许利嘉何春年彭勇姜保平胡克平
- 关键词：黄连小檗碱慢性退行性疾病
