耿昭
- 作品数：40 被引量：124H指数：7
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- 肝内胆管癌hTR反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建
- 2002年
- 用反转录PCR法 ,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因 ,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列 ,将其构建入真核表达载体pTriEx 4内。根据hTRcDNA序列设计引物 ,经RT PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因 ,根据其测序结果 ,合成反义RNA基因及核酶基因 ,与经相应酶切的真核表达载体连接 ,酶切鉴定重组体的正确性。经RT PCR从细胞内调出 68bp序列 ,与hTRcDNA比较 ,与模板区域碱基序列一致 ,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。肝内胆管癌细胞内端粒酶的活性明显增高 ,RT PCR法可调出其hTR基因有效片段 ;
- 靳斌姜希宏刘贤锡刘博刘师莲王伟胡海燕卢翌耿昭
- 关键词：真核表达载体真核表达反转录聚合酶链反应
- ODC单抗的制备及其在大肠癌检测中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的:制备鸟氨酸脱羧酶(ODC)单克隆抗体并观察其在大肠癌检测中的意义。方法:以人ODC重组蛋白免疫小鼠,用杂交瘤细胞技术制备单克隆杂交瘤细胞,以ELISA和Westernblot法验证阳性单克隆细胞所产生的免疫球蛋白。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平。结果:筛选出稳定分泌抗ODC单抗的细胞株,ELISA检测证明其所分泌单抗属于IgG2a型。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该单抗检测效果较好,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织(P<0.05)。结论:成功地制备出ODC单克隆抗体,为进一步研究ODC基因表达与大肠癌的发病机理及其诊断的关系打下了良好基础。
- 胡海燕姜春英张岩耿昭卢翌王晓明张冰刘贤锡
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶结直肠肿瘤杂交瘤
- 含有弓形虫表面抗原P22、P30复合基因的载体构建被引量：2
- 2002年
- 目的 选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法 根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质粒pGEX - 2T -v2 2 ,将两片段定向克隆于克隆载体 pUC19及表达质粒pGEMEXTM- 1上 ,用酶切及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 酶切产物经电泳显示条带清晰 ,P2 2、P30基因片段的泳动位置分别在 4 4 6bp和 86 0bp的位置 ,与预计结果一致 ;测序结果表明插入的复合基因片段方向及序列均正确。结论 成功构建的含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体 ,保证了两基因连接方向、序列及开放读码框的正确 ,为今后两基因的进一步复合表达研究奠定了基础。
- 王伟古钦民刘师莲何深一胡海燕李瑛卢翌耿昭
- 关键词：弓形虫P30基因
- 人ODC重组蛋白及其多抗的制备和临床应用被引量：3
- 2004年
- 目的 :构建鸟氨酸脱羧酶 (ODC)表达载体 ,表达ODC重组蛋白 ,制备其多克隆抗体并观察其在大肠癌诊断中的意义。方法 :从大肠癌组织中提取总RNA ,反转录PCR法扩增全长ODCcDNA ,将扩增的基因插入表达载体 pQE 30的BamHI和SalI酶切位点之间 ,DNA测序验证插入片段。将重组载体转化入宿主菌M 15中进行诱导表达 ,产生含 6 His tag的融合蛋白。WesternBlotting法检测表达蛋白。亲和层析法纯化融合蛋白 ,以该蛋白免疫小鼠制备多抗 ,免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平。结果 :酶切鉴定和DNA测序显示ODC重组表达载体中含有人ODCcDNA全长序列 ,与NIH基因库的人ODCcDNA比较有 99%的同源性。将该重组载体转化入大肠杆菌M 15中表达所得蛋白经WesternBlotting验证为目的蛋白。纯化融合蛋白 ,免疫小鼠获得多抗效价较高。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该抗体检测效果较好 ,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织 (P <0 .0 5 )。结论 :成功地构建了ODC表达载体、表达出ODC重组蛋白、制备出ODC多克隆抗体 ,为进一步研究结直肠癌的发病机理及其诊断和治疗方法打下了良好基础。
- 胡海燕刘贤锡姜春英张岩王晓明刘师莲耿昭卢翌张冰孙爱华
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶结直肠肿瘤多克隆抗体
- JIP3调控TrkB顺轴突转运
- 脑源性神经营养因子(BDNF)在调节神经元的存活、分化和突触可塑性中起重要作用,它的生物学活性主要通过其酪氨酸激酶受体TrkB介导.靶组织分泌的BDNF与支配它的神经元轴突末梢上的TrkB受体结合后,引发BDNF逆轴突信...
- 黄淑红段珊孙涛王珏耿昭闫靖孙海基陈哲宇
- 关键词：BDNFTRKB
- 通过T-A克隆技术构建含免疫刺激序列CpG基序的抗SBR DNA疫苗(英文)被引量：7
- 2002年
- 目的 :构建含免疫刺激序列、能够阻止变形链球菌在牙面粘附的防龋DNA疫苗。方法 :根据原核表达质粒 pS BR CTA2 B基因序列 ,设计针对编码变形链球菌表面蛋白抗原AgⅠ /Ⅱ分子中唾液蛋白结合区段 (SBR)的特异性PCR引物 ,利用PCR技术由质粒 pSBR CTA2 B扩增目的DNA片断 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于中间载体 pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,选择插入方向正确的克隆 ,将目的DNA从中间载体释放 ,再克隆至含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 1。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 1 SBR进行酶切图谱分析和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒 pcD NA3 1 SBR构建成功、开放阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码SBR的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体 pcDNA3 1的适当部位 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA 3 1
- 姜广水刘贤锡杨小青杨丕山卞继峰李静耿昭
- 关键词：免疫刺激序列CPG基序龋病DNA疫苗
- HPV16 L1-E7重组腺病毒rAd5 HPV16 L1-E7的构建及克隆表达被引量：17
- 2000年
- 目的 :研制人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗和嵌合病毒样颗粒疫苗。方法 :以HPV16型野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术构建可表达HPV16主要衣壳蛋白L1( 1 30 1aa)和转化蛋白E7( 1 60aa)融合基因的重组质粒 pUC19L1 E7,HPV16L1 E7DNA片段经质粒 pBSL1 E7转入腺病毒Ad5穿梭质粒 pCA14L1 E7,与腺病毒质粒pBHG10 共转染 2 93细胞 ,制备重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1 E7VLP。结果 :成功构建了HPV16L1 E7重组质粒 pUC19L1 E7,制备HPV16L1 E7重组腺病毒rAd5HPV 16L1 E7,HPV16L1 E7融合蛋白可在 2 93细胞中高效表达 ,可达细胞总蛋白的 10 %以上 ,并装配成嵌合病毒样颗粒 (cVLP)。结论 :成功制备了可高效表达HPV16L1 E7嵌合L1 E7VLP的重组腺病毒rAd5HPV 16L1 E7载体疫苗 ,为HPV重组腺病毒疫苗用于宫颈癌的防治打下了基础。构建的 pUC19L1载体可以比较方便的插入外源基因 ,用来构建多价疫苗 。
- 卞继峰于修平齐眉王芸杨海宁胡海燕耿昭赵蔚明周亚滨贾继辉栾怡
- 关键词：乳头瘤病毒重组腺病毒分子克隆减毒疫苗
- 含变形链球菌PAcA基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA的构建与鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建含有免疫刺激序列、可防止变形链球菌在牙面粘附的DNA疫苗。方法 :利用PCR技术由质粒pPAcA CTA2 B扩增编码PAcA的DNA片段 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于载体pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,将目的DNA从载体上释放 ,再克隆于含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出用作防龋疫苗的真核表达质粒pcDNA3 .1 PAcA。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 .1 PAcA进行酶切图谱和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA构建成功、阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码PAcA的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA。
- 杨小青姜广水张兆莲王晶杨丕山刘贤锡卞继峰胡海燕耿昭卢翌
- 关键词：疫苗构建CPG基元变形链球菌
- GDNF截短异构体胞内运输及分泌的机制研究
- 目的:胶质细胞源性神经营养因子/(GDNF/)是一类调节神经元存活和分化的蛋白质,研究表明GDNF对多巴胺能神经元有保护作用,因而引起了人们对其治疗帕金森病的极大兴趣。GDNF能促进多巴胺能神经元形态分化,使神经元胞体增...
- 耿昭
- 关键词：神经元分泌
- 文献传递
- 乳头瘤病毒重组减毒沙门菌疫苗的构建及诱导黏膜免疫的研究被引量：4
- 2004年
- 卞继峰于修平胡海燕耿昭卢翌刘浩
- 关键词：乳头瘤病毒黏膜免疫
