王学军
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省社会发展科技计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)被引量：5
- 2006年
- 目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。
- 王学军顾凯曹荣月林洁吴洁刘景晶
- 关键词：基因融合门冬酰胺酶胰蛋白酶
- 重组L-门冬酰胺酶工程菌的表达和PEG的化学修饰被引量：2
- 2005年
- 目的提高重组L-门冬酰胺酶(rL-ASP)工程菌的表达量,分离纯化rL-ASP并对之进行PEG化学修饰。方法将带有编码rL-ASP的基因的质粒(pKA)导入不同的宿主菌中,挑出高表达菌株,同时优化发酵培养基,分离纯化获得的高纯度rL-ASP再用PEG进行化学修饰,SDS-PAGE检测修饰效果。结果在pH7.0的条件下,宿主菌为JMl09的工程菌pKA/JMl09酶活力最高,三角瓶振摇培养的酶活力可达216×103IU/L;发酵罐发酵培养,酶活力达312×103IU/L。纯化后的rL-ASP比活力为220IU/mg,rL-ASP经过PEG化学修饰生成rL-ASP-PEG,分子量发生改变。结论改变目标蛋白表达的宿主菌和优化发酵工艺,提高了rL-ASP的表达量,纯化的rL-ASP经过PEG化学修饰后分子量增大。
- 曹荣月申克宇王学军凤姣刘景晶
- 关键词：发酵聚乙二醇化学修饰
- 可载荷多肽的病毒样颗粒
- 本发明通过基因工程技术将大肠杆菌热休克蛋白Hsp70家族中的成员DnaK的多肽结合结构域呈现在乙肝核心抗原HbcAg的MIR区，使其体外装配为50nm左右大小的纳米级颗粒。这种含有200多个多肽结合结构域的纳米颗粒可以用...
- 刘景晶沈良王学军熊祺琰曹荣月吴洁
- 文献传递
- 大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究
- 2006年
- 为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。
- 林洁黄永城王学军吴洁刘景晶
- 关键词：外源多肽抗原表位
- 白血病化疗药物研究被引量：2
- 2003年
- 白血病是一类血液系统的恶性肿瘤 ,发病机制复杂 ,涉及到染色体易位、融合基因及融合蛋白的形成、基因拷贝数的改变、癌基因的活化、抑癌基因的失活等。针对不同白血病 ,从药物作用的分子机制分类综述国内外抗白血病药物的发展及治疗现状。
- 曹荣月钱之玉刘景晶王学军
- 关键词：白血病化疗药物染色体易位融合基因基因拷贝数
- 抗动脉粥样硬化核酸疫苗的纳米颗粒化与粘膜免疫
- 将壳聚糖溶液和抗动脉粥样硬化核酸疫苗质粒DNA在共聚作用下结合形成纳米颗粒。通过鼻腔粘膜免疫，抗动脉粥样硬化核酸疫苗纳米颗粒能诱发兔产生特异的抗胆固醇酯转移蛋白抗体，且抗体水平高于核酸疫苗肌肉注射组。应用这项技术，优化了...
- 宗莉顾凯龙军王学军陈伶俐曹荣月吴洁刘景晶
- 文献传递
- 一种新型速效人胰岛素类似物的构建、制备及性质研究被引量：5
- 2009年
- 目的:构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物(PIns),进行其性质研究。方法:采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28 a后,再将经过改构后的硫氧还蛋白(1-20 aa)的基因片段与重构胰岛素原基因的5′端通过赖氨酸连接,成功构建了速效人胰岛素原类似物融合蛋白(FKPPIns)的表达载体(pET28 a-FKPPIns)。此融合蛋白在大肠杆菌BL-21(DE3)中以包涵体的形式表达,经包涵体洗涤和DEAE阴离子交换树脂纯化后进行复性、酶切。酶切产物经RP-HPLC纯化后,质谱法测定其分子量;等电聚焦法测定此蛋白的等电点;凝胶过滤法测定其自身的缔合性质。对新西兰大白兔肌肉注射纯化后PIns,进行初步的药效学评价。结果:获得了结构为R-P-K-P-Insu lin的PIns纯品,其等电点为7.3,自身缔合性较标准胰岛素显著下降。结论:PIns与标准人胰岛素相比,起效快、达峰时间及持续时间短。
- 刘素丽鲁勇王学军曹荣月刘景晶范豪李泰明
- C端融合RGD三肽的重组L-门冬酰胺酶基因克隆、表达和对血液系统的影响被引量：2
- 2003年
- 利用加端PCR技术构建asnB-RGD工程菌,获得C末端带有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸,Arg-Gly-Asp)三肽的门冬酰胺酶(AnsB-RGD),以改进L-门冬酰胺酶的作用。以pUA18为模板,利用pUC18上游普适引物和根据L-门冬酰胺酶Ⅱ基因(ansB)C末端下游序列设计的引物来扩增目标基因。将目标基因连于pMD18-T载体,转化宿主菌JM109,筛选出的阳性克隆通过HindⅢ、Nco I双酶切下目标基因连到含T7启动子的高效表达载体pET28a上,再转化BL21宿主菌。高效表达的工程菌摇瓶发酵,渗透休克法提取AnsB-RGD融合蛋白,12％的SDS-PAGE检测酶蛋白并考察酶的活力、特异性及其对血液系统的影响。2％琼脂糖凝胶电泳、DNA测序鉴定构建的pET28a-ansB-RGD工程菌,奈氏法、SDS-PAGE及免疫学方法检测AnsB-RGD融合蛋白。DNA序列分析证明RGD三肽已经连接在L-门冬酰胺酶的C末端,带有RGD三肽的融合蛋白仍然能与抗L-门冬酰胺酶的抗体结合,初步发现AnsB-RGD融合蛋白有促进血液凝固作用,但酶活力下降。
- 曹荣月钱之玉余霁王学军李亚君徐群为刘景晶
- 关键词：PCR技术DNA测序
