王世峰
- 作品数：11 被引量：72H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国综合性艾滋病研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表达、纯化及免疫原性研究
- 2008年
- 目的:通过原核细胞表达人免疫缺陷病毒(HIV)Nef抗原,制备特异抗血清,为Nef抗原检测提供技术方法。方法:以HIV Botswana毒株基因组为模板,用PCR法获得Nef蛋白编码基因,将其克隆到pET30a载体中,在大肠杆菌中表达Nef融合蛋白;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得抗血清,用真核表达的Nef抗原对其特异性进行分析。结果:构建的Nef融合基因在大肠杆菌中获得表达,相对分子质量约为36×103,免疫BALB/c小鼠获得针对融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶6400;免疫荧光和Western blot检测表明,该抗血清能特异地与重组痘苗病毒表达的Nef抗原反应。结论:在大肠杆菌中表达了HIV Nef融合蛋白,制备了Nef融合蛋白的高效价小鼠免疫血清,该血清能特异性识别HIV Nef抗原,为HIV Nef抗原检测提供了技术方法。
- 陆柔剑齐建国邓瑶王世峰王文玲辛伟李仁清阮力
- 关键词：人免疫缺陷病毒原核表达抗血清
- 一段天花病毒基因组特异的核苷酸序列
- 本发明所属技术领域：1.生物技术。2.病毒检测技术。本发明提供一段天花病毒基因组特异的核苷酸序列U160K，该序列长920个碱基，广泛存在于天花病毒基因组中，在普通型和轻型天花病毒中其分布方式不同，但核苷酸同源性大于90...
- 阮力王世峰郑楠陆柔剑
- 文献传递
- CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响被引量：11
- 2002年
- 为了研究CpG -寡脱氧核苷酸 (CpG -OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组 (CHO细胞 )疫苗 (简称乙肝疫苗 )免疫效果的影响 ,以乙肝疫苗加Al(OH) 3 、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH) 3 与CpG3三种配伍方式 ,通过腹腔、皮下或肌内 3种不同途径免疫Balb/c小鼠 ,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果。同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放 6个月再免疫小鼠 ,观察CpG的稳定性。结果表明 :① 3种免疫途径中以肌内注射效果最好 ,这在使用CpG的实验组尤为明显 ,在该组肌内免疫的ED50 比腹腔的低了 10倍 ,而诱发的抗体滴度提高了 3倍 ;②疫苗与CpG、Al(OH) 3 联合使用的免疫效果最好 ,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗 +Al(OH) 3 提高 4倍 ,比疫苗+CpG提高 7倍 ;③疫苗 +Al(OH) 3 免疫时 ,表现为IgG1抗体亚型占优势 ,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高 ,以IgG2a最显著 ;④疫苗与CpG混合后 4℃保存半年 。
- 王四清田淑芳许洪林郭斐王文陈红王秀平王世峰阮力
- 关键词：CPG乙型肝炎基因重组CHO细胞疫苗免疫效果
- 一段天花病毒基因组特异的核苷酸序列
- 一段天花病毒基因组特异的核苷酸序列。所属技术领域：1.生物技术 2.病毒检测技术。本发明提供一段天花病毒基因组特异的核苷酸序列U160K，该序列长920个碱基，广泛存在于天花病毒基因组中，在普通型和轻型天花病毒中其分布方...
- 阮力王世峰郑楠陆柔剑
- 文献传递
- Semliki森林病毒衍生的DNA疫苗与常规DNA疫苗的比较被引量：24
- 2002年
- 比较Semliki森林病毒(SFV)衍生的复制型DNA疫苗载体(复制型载体)和常规非复制型DNA疫苗载体(非复制型载体)的导入效率、表达效率、诱导凋亡率和免疫效果,从而评价其作为DNA疫苗载体的应用前景。使用等量SFV载体和常规DNA载体同等效率转染细胞后,复制型载体表达强度比非复制型载体高约3倍,其诱导凋亡的能力是非复制型载体的11倍;以不同剂量的SFV载体和常规DNA载体分别转染BHK21细胞,复制型载体各剂量组载体的表达量均高于非复制型载体。复制型载体在1μg组出现峰值,而非复制型载体则出现在4μg组。体内免疫的结果表明,SFV载体pSCA-SS1免疫的各组小鼠中,低剂量1μg组小鼠的总抗体滴度高于10μg和100μg剂量组;1μgpSCA-SS1免疫的小鼠产生的总抗体滴度与CTL水平,分别与pcDNA3-SS1免疫的小鼠中10μg和100μg组相当。但10μg、100μg组pSCA-SS1免疫小鼠的总抗体及CTL水平,都低于pcDNA3-SS1免疫的小鼠的10μg、100μg组。结果提示:SFV衍生的复制型DNA疫苗载体,在低剂量组时即可诱生与常规DNA疫苗载体高剂量组相近的免疫效果。
- 邓瑶孟昕许洪林王世峰陆柔剑王文玲谷淑燕阮力
- 关键词：DNA疫苗复制子凋亡
- 二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞偏爱密码子的研究
- 2006年
- 目的研究二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞(CHOdhfr-)的偏爱密码子。方法建立CHOdhfr-细胞高丰度mRNA的cDNA文库,对该文库进行签定以获得合格的编码蛋白质的cDNA序列,统计密码子使用频率并与CUTG数据库中的中华仓鼠比较,同时对所获得的cDNA序列进行对应统计分析。结果获得了50个合格的CHOdhfr-细胞高丰度蛋白的cDNA序列,与中华仓鼠密码子使用频率比较,除了Pro,Arg外,其余氨基酸的最高使用频率的密码子在CHOdhfr-细胞和中华仓鼠中都相同。同时根据对应分析确定了能解释最多变量(14.7%)的第一主成分,确定了22个同义密码子为CHOdhfr-细胞偏爱密码子。结论CHOdhfr-细胞存在自身偏爱的密码子,提示密码子的偏爱性是不同哺乳动物细胞功能差异的因素之一,也为外源基因在CHOdhfr-细胞中通过优化密码子而获得高表达提供了新思路。
- 王志云田淑芳王秀平王世峰李仁清楚雍烈阮力
- 关键词：卵巢密码子
- 按痘苗病毒优势密码子改造HIV-1 gag基因提高表达水平的研究被引量：10
- 2005年
- 为确定痘苗病毒密码子偏向性与基因表达的关系及其在痘苗病毒与宿主细胞相互作用过程中的作用,按痘苗病毒的优势密码子对HIV-1gag基因进行改造,并对合成基因与野生型HIV-1gag基因在痘苗病毒载体系统的表达水平进行了研究。结果显示:①各目的基因分别正向插入了痘苗病毒TK区7.5k启动子下游;②免疫荧光检测显示,改造前后的gag基因均能够很好地在痘苗病毒中表达;③Westernblot检测显示,在相同感染量时,改造后的gag基因具有更高的表达水平;④流式细胞术检测显示,密码子改造后的gag基因较野生型gag基因表达水平提高约17%。上述结果表明:按照痘苗病毒优势密码子进行外源基因改造,可作为提高外源基因在痘苗病毒中表达的策略,同时提示,密码子偏向性是痘苗病毒与宿主细胞相互作用的重要调控因素。
- 张相民辛伟王世峰李仁清陆柔剑王文玲吕亦晨阮力
- 关键词：痘苗病毒基因表达HIV-1GAG基因
- 密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率影响的研究被引量：5
- 2006年
- 为了研究密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率的影响,分别采用痘苗病毒及其宿主细胞的优势密码子对绿色荧光蛋白基因进行改造,利用荧光、Western blot和FCM等方法分析其在痘苗病毒载体系统的表达水平。结果显示,全部采用痘苗病毒优势密码子(富含A+T)和全部采用宿主细胞优势密码子(富含G+C),以及部分使用宿主细胞优势密码子的三种绿色荧光蛋白基因都能够有效表达,表达水平相近,表明痘苗病毒载体对目的基因密码子的使用具有很好宽容性。为了探讨这种宽容性的机理,分别利用在胞核内和在胞浆内转录的质粒载体对不同密码子偏性的绿色荧光蛋白基因进行表达分析。结果显示,胞核内转录目的基因的pcDNA3质粒载体能有效表达富含G+C的绿色荧光蛋白基因,不能有效表达富含A+T的绿色荧光蛋白基因,而胞浆内转录目的基因的pSCA质粒载体能同样有效表达上述不同密码子偏性的目的基因。这些结果表明,位于胞浆内的富含A+U的转录产物能够有效表达,细胞核内生成的富含A+U的转录产物可能受核膜屏障或其它核内因素影响而不能有效表达。因此,胞浆内繁殖的特性是痘苗病毒载体具有密码子宽容性的主要原因。此研究为痘苗病毒载体和常用真核表达载体的选择使用提供了重要实验依据。
- 张相民王世峰辛伟邓瑶李仁清闫克夏齐香荣高瑛瑛谭文杰鲁宁孟昕阮力
- 关键词：密码子偏性痘苗病毒载体基因表达
- 非复制重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒Bostwana C亚型Nef蛋白及免疫效果的观察被引量：2
- 2004年
- 从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)BostwanaC亚型全基因的质粒pJM4 HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southernblot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Westernblot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中。NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep IFN ′γ Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN ′γ的CD+8T细胞(占脾细胞总数0 20%);经乳酸脱氢酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞。这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础。
- 辛伟郭斐陆柔剑王世峰邓瑶王文玲张相民李仁清吕亦晨阮力
- 关键词：人类免疫缺陷病毒HIV-1NEF蛋白细胞毒性T细胞
- 病毒密码子使用频率研究进展被引量：8
- 2003年
- 密码子使用频率的研究多集中在自养生物中,对于寄生生物如病毒的研究相对较少。近些年的研究表明某些病毒基因的密码子使用频率和宿主细胞不完全匹配,密码子使用在病毒和宿主的相互作用中起了重要的作用。本文对病毒密码子使用频率的特点、影响病毒密码子使用频率的因素、几种典型病毒的密码子使用特点和密码子使用频率研究的方法做了论述。
- 王世峰阮力
- 关键词：宿主细胞
