潘鑫龙
- 作品数：19 被引量：45H指数：4
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 共表达PCV2 ORF2和猪IL-18基因的重组猪伪狂犬病毒对小鼠的免疫原性被引量：2
- 2016年
- 【目的】研制猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二联活疫苗,并用猪IL-18作为免疫佐剂。【方法】将猪IL-18基因插入到质粒p GO中,获得的重组转移质粒p GO18与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染ST细胞,并进行空斑筛选和纯化;RT-PCR和Western blot分别从转录和蛋白水平鉴定其表达情况。将重组病毒PGO18和PGO、PRV弱毒株HB98、PCV2灭活商品苗和1640细胞培养基分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后二次免疫,二免后4周用PCV2 DF强毒和PRV Min/A强毒接种小鼠。通过ELISA、血清中和试验和流式细胞术及攻毒保护试验评价重组病毒的免疫原性。【结果】获得了重组病毒PGO18,并且可在ST细胞内表达;PGO18可诱导小鼠机体产生PCV2的ELISA和PRV的中和抗体水平,刺激CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的增殖,且能有效抵抗PCV2和PRV强毒攻击。【结论】IL-18基因可增强重组病毒的免疫效果,使重组病毒具有良好的免疫原性,有望成为防治PCV2和PRV的候选疫苗株。
- 郭晓庆朱前磊潘鑫龙杨兴武乔涵王淑娟陈红英
- 关键词：PCV2ORF2重组伪狂犬病毒免疫效力
- 表达PCV20RF2基因和猪IL-18基因的重组伪狂犬病毒的生物学特性研究
- 郭晓庆郑兰兰潘鑫龙杨明凡崔保安魏战勇陈红英
- 猪伪狂犬病病毒河南株的分离及鉴定被引量：7
- 2017年
- 采用PCR方法对河南不同地市采集的疑似猪伪狂犬病病毒(PRV)感染病料进行PCR检测,PCR阳性的病料经处理后,接种ST细胞,分离到15株PRV。分离PRV传至第3代后,在ST细胞上均能出现较稳定的细胞病变,传代至第7代时病毒滴度在10^(5.6) TCID_(50)/0.1 mL^10~9 TCID_(50)/0.1 mL,且均能扩增出特异性gE基因片段(429bp)。将分离PRV接种6周龄雌性昆明小鼠,引起皮炎及小鼠先后死亡。以NY株为例进行理化特性试验,结果表明,对分析纯氯仿、胰酶敏感;对酸、碱及热有较强抵抗力,pH3.0盐酸处理1h、pH11.0 NaOH处理1h、56℃水浴处理1h,才能使其失活;对紫外线处理30min,仍具有感染性。经电镜观察,可看到大小均一、近似圆形的病毒粒子,大小为110~150nm,囊膜表面有呈放射状排列的纤突,表明所分离病毒均为PRV野毒株。
- 潘鑫龙高晓云张宇杨兴武杨明凡崔保安陈红英
- 关键词：猪伪狂犬病毒
- 猪圆环病毒2型和猪博卡病毒双重PCR检测方法的建立
- 引言猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）为仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）的主要致病因子,属于圆环病毒科圆环病毒属[1,2]。2009年,Blomstr（o|¨）m等首次在...
- 付朋飞乔涵潘鑫龙顾阳郭晓庆杨兴武陈红英
- 奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验被引量：1
- 2013年
- 自郑州某奶牛场采集9份乳房炎乳样进行细菌分离鉴定,并进行药敏试验。结果表明,分离出11株细菌,以葡萄球菌、链球菌为主要致病菌,对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、环丙沙星、氧氟沙星、阿米卡星敏感,而对青霉素G、链霉素、克林霉素具有较高耐药性。
- 范成英潘鑫龙郭晓庆陈红英
- 关键词：奶牛乳房炎病原菌药敏试验
- 猪博卡病毒3/4/5型PCR检测方法的建立及应用被引量：2
- 2016年
- 通过分析GenBank上登录的猪博卡病毒3/4/5型(PBoV3/4/5型)基因序列,发现这些基因序列中存在一段高度同源性保守序列,针对该序列设计并合成1对引物,成功建立了可同时扩增出PBoV 3/4/5型的PCR检测方法。对2013年8月至2014年5月河南省50份临床腹泻仔猪小肠样品进行检测,结果 21份为PBoV阳性,阳性率为42%,表明PBoV在河南省猪群中存在一定流行。本试验建立的PCR方法对PBoV3/4/5的检测具有简便、快速、灵敏度高和特异性强的特点,为PBoV 3/4/5型的快速检测提供了有效的技术支持。
- 付朋飞杨兴武乔涵潘鑫龙郭晓庆张宇郭珍珍陈红英
- 关键词：PCR
- 猪圆环病毒2型与猪支原体混合感染的诊断
- 2015年
- 2015年1月,河南某地猪场60日龄仔猪出现腹泻、呼吸困难并伴有后肢端坐状咳嗽为主要特征的疾病。PCR检测PCV2和MH均为阳性,结合发病情况、临床症状和剖检变化,诊断为猪圆环病毒2型与猪支原体混合感染。
- 杨兴武焦显芹潘鑫龙张宇耕乔涵陈红英
- 关键词：猪圆环病毒2型肺炎支原体
- 表达猪细小病毒VP2蛋白的重组猪伪狂犬病毒在小鼠体内的免疫反应被引量：10
- 2016年
- 为了研制出能够同时预防猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的二联活疫苗,本研究将PPV VP2基因克隆到伪狂犬病毒通用转移质粒pG中,构建重组伪狂犬转移质粒pGVP2。利用脂质体转染法将重组质粒pGVP2和PRV HB98弱毒株DNA共转染至猪睾丸(ST)细胞,使其在ST细胞内发生同源重组,经5次绿色荧光空斑纯化重组病毒rPRV-VP2。分别用重组病毒rPRV-VP2、亲本PRV HB98弱毒株、商品化PPV灭活苗和DMEM细胞培养液免疫6周龄雌性昆明小鼠,2周后进行二免。一免后第7周用PRV强毒NY株对小鼠进行攻毒。结果获得表达VP2基因的重组病毒rPRV-VP2,经ELISA试验、血清中和试验(SN)、血凝抑制试验(HI)和流式细胞检测发现,重组病毒rPRV-VP2株可有效刺激小鼠机体产生抗PPV和PRV抗体,同时具有增强小鼠机体细胞免疫反应的能力,且对PRV强毒攻击具有保护作用。结果表明,重组病毒rPRV-VP2可作为同时预防PPV和PRV感染的重组疫苗候选株。
- 付朋飞潘鑫龙乔涵杨兴武朱前磊郭晓庆张宇陈红英
- 关键词：猪细小病毒猪伪狂犬病毒VP2蛋白重组病毒免疫效力
- 鉴别猪伪狂犬病病毒强毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立被引量：13
- 2014年
- 根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gH基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别建立gE和gH基因的单项PCR扩增方法。通过对PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PRV强毒和疫苗毒的双重PCR检测方法,即利用一次PCR反应,从强毒株基因组中可同时扩增出2条大小分别为429 bp(gE基因)、355 bp(gH基因)的特异性片段,从弱毒株DNA中仅扩增出1条大小为355 bp的片段,而猪圆环病毒2型和猪细小病毒DNA扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,所建立的双重PCR检测方法最低有效检测量为1×102TCID50/0.1 mL。该方法适合对PRV强毒和疫苗毒的快速鉴别诊断。
- 顾阳高晓云程琨潘鑫龙崔保安陈红英
- 关键词：伪狂犬病毒双重PCR强毒株疫苗株
- 重组猪细小病毒VP2基因的猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的构建及纯化被引量：2
- 2016年
- 参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本实验室构建的含绿色荧光蛋白标记基因的伪狂犬病毒(PRV)通用转移质粒pG和构建好的pMD-VP2质粒,用BamHⅠ对质粒pG和pMD-VP2进行酶切,然后用CIAP对酶切产物进行去磷酸化处理,纯化回收后将VP2基因插入pG质粒中获得重组伪狂犬病毒转移质粒pGVP2。用脂质体转染法将PRV HB-98株全基因组与质粒pGVP2共转染ST细胞,得到携带有PPV VP2外源抗原基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组伪狂犬病毒rPRV-VP2株。结合VP2基因PCR扩增和绿色荧光观察,经5轮病毒空斑纯化得到了纯化的重组病毒rPRV-VP2株。
- 付朋飞乔涵杨兴武张宇王林青郭晓庆潘鑫龙陈红英
- 关键词：PRV猪细小病毒VP2基因
