李汉兵 作品数:17 被引量:42 H指数:3 供职机构: 浙江工业大学药学院 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
稳定低表达GSNOR细胞系Neuro-2a的构建及其对S-亚硝基化的影响 2022年 目的:探讨转染慢病毒载体构建稳定低表达S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR)的小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞系,并考察稳定低表达GSNOR对S-亚硝基化修饰水平的影响。方法:构建靶向GSNOR的慢病毒载体,用LipoFiter脂质体转染Neuro-2a细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定低表达GSNOR的细胞系。光镜观察Neuro-2a细胞的形态变化,CCK-8法检测转染不同时间后的细胞活力,RT-qPCR和Western blot检测GSNOR的mRNA和蛋白表达水平。生物素转换法检测转染后Neuro-2a细胞内总S-亚硝基化蛋白水平。结果:HBLV-m-ADH5-shRNA1-PURO慢病毒载体序列与目的序列结果一致,提示慢病毒载体构建成功。嘌呤霉素筛选后,光镜观察Neuro-2a细胞形态良好,CCK-8实验结果显示在24、48、72和96 h时点细胞活力无显著差异,提示转染对细胞活力无明显影响。转染第2、4和6代后细胞内GSNOR mRNA水平分别是空载病毒组的37.02%、40.66%和30.13%,均显著降低(P<0.01),GSNOR蛋白表达水平较空载病毒组亦显著下降(P<0.01)。此外,稳定低表达GSNOR的Neuro-2a细胞中蛋白S-亚硝基化修饰水平显著上调(P<0.01)。结论:稳定低表达GSNOR的Neuro-2a细胞系构建成功,GSNOR低表达可上调胞内总蛋白的S-亚硝基化修饰水平。 严洁萍 严洁萍 李婷婷 王思懿 高立 罗双 李汉兵 李汉兵关键词:慢病毒 利用微电子细胞传感器阵列动态监测内皮屏障功能(英文) 2007年 内皮在保持血管的动态平衡中起着至关重要的作用,而内皮屏障的功能损伤是很多炎症反应的重要特征。利用实时细胞电子分析系统体外研究脐静脉内皮的屏障功能,从细胞的贴附、生长到融合状态,实时监测了微电子细胞传感器阵列上细胞阻抗的动态变化。α-凝血酶以剂量依赖的方式显著诱导单层内皮细胞阻抗快速下降,而后缓慢回升。相应地,α-凝血酶显著引起细胞单层对荧光标记葡聚糖通透性的改变和F-肌动蛋白细胞骨架的重分布。结果表明,实时细胞阻抗系统可能成为一种体外研究血管内皮细胞形态和屏障功能的有力的手段。 李汉兵 邓同乐 张清楠 郑筱祥关键词:内皮细胞 通透性 F-肌动蛋白 二甲双胍不依赖腺苷酸活化蛋白激酶途径的抗肿瘤机制研究进展 被引量:2 2019年 二甲双胍是临床上广泛用来治疗2型糖尿病的口服降糖药。流行病学研究发现,二甲双胍与癌症的预防和治疗有着密切的关系。二甲双胍的抗肿瘤分子机制已成为研究热点。大部分研究认为,该药理作用依赖腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的激活。近几年,部分学者提出二甲双胍通过非AMPK依赖途径抗肿瘤的机制,可改善胰岛素敏感性,下调Ras相关GTP结合蛋白Rag活性和DNA损伤反应调节基因1的表达,抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,抑制Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物活性、细胞分裂周期蛋白42和基质金属蛋白酶的表达等多种途径抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和迁移。本综述以此为切入点,综述二甲双胍不依赖AMPK途径的抗肿瘤机制研究进展,为其抗肿瘤作用机制的探讨展示新视角。 李汉兵 赵旭琴 王心怡 戚佳梦 王灿 姚元发关键词:二甲双胍 腺苷酸活化蛋白激酶 肿瘤 基于细胞阻抗分析的内皮功能高糖损伤模型的建立及内皮保护作用药物的筛选 糖尿病血管并发症包括糖尿病微血管并发症和糖尿病大血管并发症,是使糖尿病患者致死、致残的主要原因。糖尿病血管内皮功能损伤是糖尿病大血管及微血管病变的始动环节及病理生理基础,而糖尿病血管内皮功能损伤又是多种影响因素作用于不同... 李汉兵关键词:血管并发症 内皮功能 药物筛选 补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6的结构与功能研究进展 被引量:1 2023年 补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)是与脂联素高度同源的脂肪因子,广泛表达于人体多种组织中,常以三聚体的形式发挥其生物学功能。研究表明,CTRP6在脂质代谢、肥胖症、糖尿病、炎症、肿瘤、纤维化等多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用。此外,CTRP6在农业动物育种中也具有一定的应用前景。该文将对CTRP6的结构特征、表达调控及主要生物学功能进行全面的综述,为CTRP6的进一步研究提供参考和借鉴。 夏静文 李汉兵 毋文静 尤忠毓 张瑾关键词:炎症 肿瘤 纤维化 动物育种 基于柱前衍生化高效液相色谱法评价骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型 2018年 培养C2C12成肌细胞并分化成骨骼肌细胞,取细胞培养液通过柱前衍生化,将葡萄糖与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)络合,使用Unisphere Aqua C18色谱柱(2.0mm×150mm,粒径3.5μm)分离衍生化产物,流动相为V(10mmol/L乙酸铵(pH=5.30))∶V(乙腈溶液)=78∶22,流速为1.0mL/min,检测波长为245nm,进样量为20μL,柱温30℃.葡萄糖质量浓度在100~500mg/L范围内具有良好的线性,相关系数0.998 5;精密度、重复性良好,平均回收率100.26%,RSD值为1.02%.地塞米松孵育处理的骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对葡萄糖的摄取量与对照组相比显著减少.结果显示:柱前衍生化高效液相色谱法可用于评价骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型,为后续胰岛素抵抗机制探讨及药物筛选打下基础. 李汉兵 姚元发 莫泽君 忻锦霞关键词:高效液相色谱 柱前衍生化 胰岛素抵抗 葡萄糖摄取 “基于问题的学习”教学法在药学类专业生理学教学中的应用 被引量:13 2009年 在药学类专业生理学教学过程中实施"基于问题的学习"这一教学方法,探索并优化贴近PBL教学过程和生理学情景的教学评价方式,实践表明这一教学法的实施有利于促进教学效果的提高。 李汉兵 齐敏友 孙国君 宋英 宋必卫 单伟光关键词:生理学 药学类专业 长期间歇性禁食诱导小鼠肝脏脂质异常积聚 被引量:1 2022年 短期间歇性禁食有利于非酒精性脂肪肝病患者控制体重,但长期间歇性禁食的影响还不明确。本研究以C57BL/6N小鼠为模型,采用4个月隔日禁食方式研究长期间歇性禁食对小鼠健康及肝脏脂质代谢的影响。结果显示,与自由采食组相比,隔日禁食组小鼠的体重降低,饲料转化率增加,肝脏指数增加,病理切片分析发现肝脏甘油三酯含量显著增加;qRTPCR分析发现肝脏脂代谢标志基因Pparγ和Atgl的表达显著升高(P<0.05);Westernblot分析发现微管相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P<0.05),自噬接头蛋白p62(SQSTM1)丰度降低(P<0.05),自噬信号正调控关键因子AMPK磷酸化升高(P<0.05),负调控因子mTOR磷酸化降低(P<0.05),表明肝细胞自噬活性增强。综上所述,4个月隔日禁食可引起健康小鼠肝脏中积累过多甘油三酯,同时显著降低mTOR磷酸化水平并提高自噬水平。 龚鹏飞 江祖荣 黄鑫 王思思 李汉兵 彭永佳 张瑾关键词:脂代谢 自噬 基于翻转课堂的混合式教学模式在药理学教学中的设计与实践 被引量:3 2023年 目的:探讨翻转课堂的混合式教学方式在药理学教学中的设计与实践。方法:选取两个药剂学专业班级为研究对象;以1个班51名学生作为试验组,采用翻转课堂理念的混合式教学方式进行授课;以另外1个班61名学生作为对照组,采用传统教学方式进行授课。统计2个班平时成绩、期终考试和总评成绩,进行问卷调查试验组的学评教情况。结果:试验组学生的平时成绩、期末考试成绩和总评成绩均高于对照组(P<0.05)。试验组97.1%以上的学生赞同进行混合式教学,认为翻转课堂教学有助于锻炼学生的文献查阅能力、学术汇报能力和语言表达能力。结论:翻转课堂的混合式教学方式能提升药理学的教学效果,在激发学生的学习动力和充实学生的学习情感上更能显示其独到的优势,并且有助于积极学习的课堂氛围的构建。 齐敏友 施琦雯 李汉兵关键词:药理学 药学专业医学基础课程教学方法的研究与实践 被引量:3 2013年 结合药学专业毕业生的特点,构建药学专业医学基础课程的知识结构,教学内容设计上注意人体解剖组织学、生理学、药理学和临床医学概论等基础医学课程相互联系。针对每一章节设计教学内容,采取多种教学方式,有效改变了教师单一放映、学生机械照抄、课堂缺少交流的教学现状,使学生充分地体会到医学基础课程的重要性,发挥医学基础课程在药学专业课程教学中的重要作用。 齐敏友 李汉兵 宋英关键词:药学专业 医学基础课程 教学方法