李武平
- 作品数：20 被引量：73H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性被引量：3
- 2002年
- 以INFα -m基因为模版 ,采用overlappingPCR技术构建甲硫氨酸脑啡肽干扰素表达质粒 pBV2 2 0 /Enk - /Met-INFα -m ,转化大肠杆菌DH5α表达 ,产物以包涵体形式存在。包涵体经分离、变性、复性 ,然后经CM -Sepharose-FF、DEAE -Sepharose -FF离子交换层析和Sephacryal-HR10 0分子筛纯化 ,获得较纯的Enk -IFNα -m融合蛋白。生物活性检测表明 ,融合蛋白不仅具有干扰素的抗病毒、抗增殖、增强NK细胞功能的活性 。
- 吕宏亮陈勇李武平段招军魏开坤赵军侯云德
- 关键词：人干扰素脑啡肽融合蛋白生物学活性
- 脑啡肽-干扰素α-m融合蛋白外用治疗单纯疱疹病毒感染被引量：1
- 2002年
- 为探讨脑啡肽 -干扰素α -m融合蛋白 (EI)外用治疗单纯疱疹病毒感染的作用 ,分别用HSV - 1感染兔子角膜、HSV - 2感染豚鼠阴道建立动物感染模型。兔子角膜感染 2 4h后用融合蛋白滴眼液治疗 ,每天 3次 ,每次0 5ml,共 14天。豚鼠阴道感染 4 8h后 ,用融合蛋白涂剂抹外阴病灶 ,每天 3次 ,每次 10mg ,共 14天。用IFNα -m和生理盐水 /赋形剂作为对照。采用记录病损程度分级法进行临床症消减观察 ,并于治疗前后测定实验动物病灶病毒滴度、HSV抗体滴度及NK细胞活性。结果显示 :与IFNα -m相比 ,EI治疗组实验动物病毒感染症状大幅减轻且病程缩短 ,动物病灶中病毒滴度下降 ,抗HSV抗体滴度升高 ,NK细胞活性增强。说明脑啡肽干扰素融合蛋白具有较强的消除炎症和局部抗病毒作用 。
- 吕宏亮李武平张成海马超王玉淋邹勇衣作安陈勇吴斌文段招军侯云德
- 关键词：脑啡肽融合蛋白外用单纯疱疹病毒感染
- rhIFN-β1a cDNA在CHO细胞上的表达
- 2004年
- 目的 在CHO细胞上表达rhIFN βcDNA。 方法 利用脂质体技术 ,将含hIFN β基因的pRC CMV IFNβ DNA载体和pSV2dhfr DNA质粒按 3∶1的比例转染CHO k1dhfr 细胞 ,后者是选择性标记。筛选在缺乏胸腺嘧啶的选择培养基生长的单个细胞克隆 ,通过MTX加压扩增与dhfr基因共转染IFNβ基因。筛选的细胞株通过大规模培养 ,收集培养液经一系列的步骤纯化。结果 能够耐受 0 .6 μmol LMTX的细胞可产生IFN 10 5unitperday 10 6cells ,CHO细胞中表达的hIFN β纯化后的抗病毒比活性可达 2 .2× 10 8IU mg。结论 建立了适合表达人干扰素
- 李武平衣作安张成海王刚郑丽舒段招军吕宏亮侯云德
- 关键词：干扰素卵巢细胞
- 重组人干扰素-β及其PEG修饰
- 重组人IFN-beta(rhIFN-beta)由成纤维细胞和某些上皮细胞在某些诱生剂刺激后产生的.rhIFN-beta分子是由166个氨基酸组成的20KD的糖蛋白(约含20﹪的糖基化成分).rhIFN-beta与IFN-...
- 李武平
- 关键词：干扰素-Β密码子聚乙二醇纯化
- 文献传递
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因(ureI)的克隆及其表达和纯化被引量：1
- 2004年
- 目的 对幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因ureI进行克隆、测序 ,并在昆虫细胞中表达及进行产物纯化。方法 克隆ureI基因 ,经测序正确后 ,酶切、连接到pFASTBACHb质粒上 ,与穿梭载体DH10BAC转座 ,获得Bacmid ureI质粒 ,转染Sf9细胞 ,采用Ni2 +螯合琼脂糖亲和层析纯化 ,经SDS PAGE和Westernblot鉴定。结果 克隆了ureI基因 ,并在昆虫细胞Sf9中表达纯化 ,蛋白纯度达 85 %以上 ,并与 6 His单抗特异结合。
- 衣作安李武平张成海高建梅王刚段招军侯云德
- 关键词：幽门螺杆菌基因克隆昆虫细胞纯化
- 革兰氏阳性细菌表面显示技术及其应用
- 2004年
- 本文概述了革兰氏阳性菌表面显示技术的基本原理、开发研究的热点载体和菌株及其应用前景 ,并与其它表面显示系统进行比较 。
- 衣作安张成海李武平
- 关键词：革兰氏阳性细菌菌株
- 重组人IFNα 1c/86D/22R/27F在大肠杆菌中的表达及活性研究
- 2003年
- 利用重组PCR点突变技术将人IFNα 1c/ 86D的第 2 2、2 7位的Ser编码序列突变为Arg和Phe ,DNA测序正确 ,并在大肠杆菌BL2 1中表达 ,表达量为 19%。采用CM Sepharose、DEAE SepharoseFF纯化后WesternBlot检测为单一条带。细胞病变抑制法测定其比活为 3.5 1× 10 7U/mg ,较IFNα 1b( 1.5 5 10 7U/mg)略高。抗A5 4 9细胞的增殖活性与IFNα 1b相当。
- 陈勇吕宏亮段招军李武平王红艳刘永清郑菊梅侯云德
- 关键词：点突变大肠杆菌
- 重组人干扰素-β(rhIFN-β)中试工艺研究被引量：2
- 2004年
- 目的 建立适合大规模生产重组人干扰素 β(rhIFN β)的分离纯化工艺。 方法 采用超声破菌、离心分离包涵体、仲丁醇萃取、Sephacryl 10 0、HIC层析等分离纯化步骤。结果 纯化的rhIFN β纯度达 98%以上 ,比活性为 2 .0× 10 7IU/mg,各项质量指标均符合质控标准。结论 此纯化工艺简便 ,可重复性好 ,适于大规模生产。
- 李武平宋瑜丽张成海衣坐安吕洪亮段招军侯云德唐旭东
- 关键词：纯化糖蛋白
- 跨膜区缺失的流感病毒M2蛋白表达纯化及其抗原性检测被引量：1
- 2006年
- 目的 表达并纯化缺失跨膜区的流感病毒M2蛋白，并检测其抗原性。方法 利用RT．PCR方法从流感病毒A／PR／8／34（H1N1）的cDNA中扩增全长M2基因，利用两套引物扩增出缺失跨膜区26—43位氨基酸的sM2基因，并克隆到pET30a载体中表达融合蛋白，用镍柱纯化后的融合蛋白免疫小鼠获得抗血清，免疫荧光检测其抗原性。结果 sM2融合蛋白在大肠埃希菌中可高效表达，纯化后可获得高纯度的重组蛋白。免疫小鼠获得的血清进行免疫荧光检测，显示表达的融合蛋白有免疫原性。结论 跨膜区缺失的流感病毒M2融合蛋白与完整M2蛋白有相同的抗原性。
- 郑丽舒段招军彭夫望谢志萍高寒春李武平衣作安侯云德
- 关键词：流感病毒A型M2抗原性
- 人新型干扰素κ的基因克隆、表达、纯化及其抗病毒活性的初步研究被引量：8
- 2005年
- 目的制备人干扰素κ(hIFNκ)并初步研究其生物学活性。方法克隆hIFNκ的cDNA并根据大肠埃希菌的密码子偏好性人工合成了hIFNκ基因,在大肠埃希菌DH5α中高效表达、纯化后测定了rhIFNκ的多种生物学活性,包括抗病毒活性、抗细胞增殖活性、种属特异性以及NK细胞调节活性。结果成功地获得了高纯度的rhIFNκ,纯度在90%以上。利用WISHVSV系统检测rhIFNκ的抗病毒活力为2.0×106IU/mg。与rhIFNα2b的比较发现,rhIFNκ无论在抗病毒活性、细胞生长抑制,还是在促NK细胞活性方面均弱于前者。结论rhIFNκ在不同种属来源细胞上的抗病毒活性因种属来源而异,不同的病毒对rhIFNκ的敏感性是不同的。
- 张辉段招军朱建高彭夫望李武平高寒春谢志萍王玉娥侯云德
- 关键词：干扰素类抗病毒活性基因克隆人干扰素纯化NK细胞活性
