朱乐乐
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备被引量：1
- 2014年
- 目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a(+)-Dectin-2和pET28a(+)-Dectin-3,并在E.coli BL21(DE3)中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示:单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。
- 关建洪朱乐乐林欣贾鑫明
- 关键词：C型凝集素受体单克隆抗体
- C型凝集素受体Dectin-3和Dectin-2形成异源二聚体协同抗真菌感染的分子机制
- 近年来,随着广谱抗生素、免疫抑制剂的广泛应用,器官移植的大量开展,以及艾滋病的流行,念珠菌感染已经成为主要的医院内血源性感染疾病,最常见致病菌是白念珠菌。因此,阐明白念珠菌感染的免疫应答机制,能够为白念珠菌感染的预防和治...
- 朱乐乐贾鑫明姜远英林欣
- 关键词：C型凝集素受体白念珠菌
- 人C型凝集素受体dectin-1单克隆抗体的制备
- 2015年
- 目的:克隆获得并原核表达人dectin-1基因的胞外段,以其作为抗原,制备人C型凝集素受体dectin-1的单克隆抗体。方法和结果:利用RT-PCR技术从人的外周血中克隆获得人dectin-1基因,克隆到pCDNA 3.0(+)载体中,获得pCDNA3.0(+)-dectin-1质粒。将dectin-1胞外段[dectin-1(202bp-744bp)]克隆到pET28a(+)载体,构建原核表达质粒pET28a(+)-dectin-1(202bp-744bp),转到大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导目的片段原核表达,得到高效表达的dectin-1(202bp-744bp),镍柱亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,取抗体滴度高的小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得15株阳性杂交瘤细胞株,利用有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞株的筛选,获得5株单克隆细胞株。用单克隆细胞株制备小鼠腹水模型,经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化获得dectin-1的单克隆抗体。经蛋白质印迹法验证,此单克隆抗体能有效地识别人和小鼠的dectin-1蛋白。结论:成功制备获得dectin-1蛋白的特异、高效的单克隆抗体。
- 杨龙王英朱乐乐姜远英贾鑫明
- 关键词：C型凝集素受体DECTIN-1单克隆抗体
- CARD9桥接Ras-GRF1和H-Ras形成三元复合物介导Dectin-1受体激活ERK信号通路启动机体的抗真菌感染免疫应答
- C型凝集素受体Dectin-1是机体感知真菌感染的关键模式识别受体,因此,阐明Dectin-1介导机体抗真菌感染的免疫应答分子机制具有十分重要的意义,目前研究认为Dectin-1受体识别白念珠菌酵母态表面分子β-葡聚糖后...
- 贾鑫明唐冰朱乐乐林欣
- 关键词：C型凝集素受体DECTIN-1H-RAS真菌感染
