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玉米螟P450基因cDNA的克隆及植物次生物质对其诱导表达被引量：6: 2009年; 昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生理功能,包括对植物次生物质代谢和杀虫剂解毒等.本研究以玉米螟5龄幼虫中肠的总RNA为模板,根据不同昆虫P450基因家族保守氨基酸序列,设计并合成简并引物,利用RT-PCR扩增出了玉米螟细胞色素P450基因cDNA片段,将其克隆到pMD19-T载体进行序列测定.测序获得了编码213个氨基酸残基的641 bp的DNA片段,命名为OfP450(GenBank登录号:EU807990);与已公布的棉铃虫、家蚕、欧洲防风草结网毛虫、小菜蛾和黑腹果蝇等的细胞色素P450氨基酸序列进行比较,其一致性分别为55%、50%、49%、44%和31%.将植物次生物质棉酚、丁布添加入人工饲料中,对玉米螟进行了饲喂实验,采用优化半定量RT-PCR,以18SrRNA为内标,RT-PCR检测进食棉酚、丁布植物化合物的玉米螟中肠P450基因的转录.结果表明,其转录水平能被棉酚、丁布显著诱导.提示本实验克隆的玉米螟细胞色素P450对植物次生物质的代谢作用与P450表达量呈正相关.该研究为下一步将植物介导的RNA干扰技术应用于害虫生物防治提供坚实的基础.; 张雨良曾洪梅杨秀芬杨峰山刘华尹富仕毛建军邱德文; 关键词：玉米螟 P450基因克隆植物次生物质

嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质及其基因序列和该拒食蛋白及其基因的用途: 一种嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质，其中，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长的药物中的应用。一种编码如本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质的基因，其中，其...; 邱德文杨怀文杨秀芬曾洪梅张雨良袁京京毛建军尹富仕; 文献传递

嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质及其基因序列和该拒食蛋白及其基因的用途: 一种嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质，其中，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长的药物中的应用。一种编码如本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质的基因，其中，其...; 邱德文杨怀文杨秀芬曾洪梅张雨良袁京京毛建军尹富仕; 文献传递

一种利用RNAi培育抗棉铃虫植物的方法: 棉铃虫蜕皮调节转录因子HaHR3基因是棉铃虫生长发育相关的重要基因。本发明通过克隆棉铃虫HaHR3基因，选择HaHR3基因的部分片段，构建了RNAi中间载体pUCCRNAi-HaHR3sa和植物表达载体pCAM-RNAi...; 曾洪梅邱德文杨秀芬郭立华袁京京徐大伟尹富仕张雨良熊叶辉; 文献传递

嗜线虫致病杆菌昆虫拒食蛋白的研究: 致病杆菌属(Xenorhabdus)是存在于斯氏线虫属(Steinernema)的昆虫病原线虫肠道内的共生细菌,属革兰氏阴性菌。在自然条件下,共生菌与线虫共同作用,破坏寄主防御系统,最后杀死昆虫。在此过程中,共生菌能产生...; 曾洪梅邱德文杨秀芬张雨良尹富仕杨怀文; 文献传递

拒食蛋白XnAFP2三个结构域片段的表达及其生物活性分析被引量：2: 2010年; 嗜线虫致病杆菌北京变种Xenorhabdus nematophila var. pekingensis CB6菌株产生的蛋白XnAFP2对多种昆虫有拒食活性。生物信息学分析表明,XnAFP2包含DomainⅠ、DomainⅡ和DomainⅢ3个功能结构域。为确定其主效活性区域,分别对3个结构域进行了克隆、表达和生物活性测定。结果表明,3个蛋白片段对棉铃虫Helicoverpa armigera3龄幼虫的生长抑制率分别为17.4%、39.8%和20.2%,对玉米螟Ostrinia furnacalis3龄幼虫的生长抑制率分别为20.2%3、8.6%和21.7%,对小菜蛾Plutella xylostella3龄幼虫的非选择性拒食率分别为25.7%、44.1%和26.8%。研究结果表明,DomainⅡ是拒食蛋白XnAFP2的主效活性区域。; 尹富仕曾洪梅张雨良杨秀芬邱德文; 关键词：嗜线虫致病杆菌结构域基因表达拒食活性

棉铃虫HaHR3基因的克隆及其植物RNA干扰载体的构建被引量：5: 2010年; 采用RT-PCR方法克隆了棉铃虫蜕皮调节转录因子HaHR3基因,该基因含有1671 bp的完整开放阅读框。序列分析表明,HaHR3与多种昆虫蜕皮调节转录因子高度同源。利用生物信息学方法对HaHR3的结构特征进行分析发现,HaHR3具有蜕皮调节转录因子超家族的典型特征,包括两个锌指结构和一个DNA结合结构域,不存在信号肽序列和N糖基化位点。选择HaHR3基因的部分片段构建了RNAi中间载体pRNAi1017-HaHR3sa,再将HaHR3正反向序列亚克隆至植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS,成功构建了由35s启动子调控的HaHR3基因的正反向RNA干扰载体pCAM-RNAi-HaHR3。这一载体的成功构建为下一步通过植物介导的RNA干扰技术防治棉铃虫打下了坚实的基础。; 尹富仕曾洪梅张雨良邱德文杨秀芬王立梅; 关键词：棉铃虫 RNA干扰

拒食蛋白XnAFP2功能结构域分析与作用机理初步研究: 拒食蛋白XnAFP2是一种从嗜线虫致病杆菌CB6菌株中分离纯化的毒性蛋白,对多种农业害虫具有拒食、抑制生长发育的作用。为了进一步研究拒食蛋白XnAFP2,本文克隆了拒食蛋白基因xnAFP2,对其进行了功能结构域分析,分别...; 尹富仕; 关键词：基因克隆结构域; 文献传递

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尹富仕