宋云枝
- 作品数：48 被引量：486H指数：15
- 供职机构：山东农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学理学更多>>
- 正向和反向重复RNA介导的抗马铃薯Y病毒基因工程比较研究被引量：51
- 2004年
- RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)5'端反向重复cDNA序列和正向重复cDNA序列(DR),分别构建植物表达载体pROK-IR和pROK-DR,利用农杆菌介导方法转化烟草NC89,比较这2种转基因烟草在RNA介导抗病性方面的差异。抗病性检测表明,转化IR和DR的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,但转化IR序列可大大提高抗病植株在转基因植株中的比例。分析结果表明所获得的抗病性为RNA介导的抗病性,是RNA沉默的结果。这一研究结果为利用IR策略进行抗病毒遗传育种提供了理论依据,并为讲一步开展RNA介导抗病性的机制研究奠宗了基础。
- 朱俊华朱常香温孚江宋云枝
- 关键词：RNA介导基因工程
- 生物技术专业实验集成教学体系的优化与创新
- 2010年
- 在生物技术专业实验教学实践中，不断探索、优化、创新，初步构建了一套生物技术专业实验的集成教学体系，实验教学的试运行表现出了良好的教学效果。
- 彭清才郭兴启刘学春朱常香宋云枝姚良同
- 关键词：生物技术
- 马铃薯Y病毒CP基因5’端和3’端反向重复结构介导的抗病性研究
- ＜正＞RNA沉默是生物（特别是真核生物）细胞抵御外来核酸（病毒、转座子或转基因）入侵以保持生物自身基因组完整性的一种防御机制,在动物RNAi、植物转录后基因沉默及真菌的quelling中都是保守的。RNA介导的病毒抗性是...
- 宋云枝李鹏朱常香迟胜起温孚江
- 文献传递
- 利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草被引量：23
- 2005年
- RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。
- 白庆荣朱俊华刘晓玲朱常香宋云枝温孚江
- 关键词：马铃薯X病毒嵌合基因转基因烟草
- 烟草环斑病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清的制备被引量：14
- 2005年
- 烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是我国二类进境检疫危险性有害生物,对农业生产危害较大.本研究依据TRSV外壳蛋白基因cp序列设计合成了2条引物,通过RT PCR扩增得到长约1500bp的目的片段.将目的片段与质粒pET-22b(+)连接,构建了含TRSV cp基因的融合蛋白原核表达载体pETRSV-CP.序列分析表明,TRSV-SD1的cp基因全长1548bp,编码515个氨基酸与GenBank中其它TRSV分离物cp基因相比,核苷酸及推导的氨基酸序列同源性为90.7%～94.6%.将pETRSV-CP转入大肠杆菌,诱导表达.SDS-PAGE结果显示,表达的TRSV CP融合蛋白的相对分子质量约为58kDa.以此融合蛋白制备的抗血清的效价为1/1024,抗血清与TRSV具有良好的特异性反应.
- 朱常香宋云枝王玫玫王秀芳温孚江
- 关键词：烟草环斑病毒外壳蛋白基因原核表达抗血清
- 核基质结合区对马铃薯Y病毒全长非翻译CP基因介导抗病性的影响被引量：7
- 2005年
- 为探索核基质结合区(m atrix attachm ent reg ions,MAR s)对RNA介导的病毒抗性的影响,我们将从烟草中克隆到的核基质结合区TM 2构建在包含马铃薯Y病毒全长非翻译CP基因的植物表达载体pRPVYCPN的表达盒的两侧,构建了植物表达载体pRTM 2CPNTM 2。采用农杆菌介导基因转化法,将表达载体pRPVYCPN和pRTM 2CPNTM 2转入烟草品种NC89中,分别获得了144株和344株转基因烟草。抗病性检测发现,核基质结合区的存在能明显提高RNA介导抗性的产生效率。在含MAR s转基因植株中,抗病植株的比率为15.1%,而不含核基质结合区的转基因植株的抗病比率则为8.3%。这一研究结果对抗病毒植物的分子育种和转基因表达调控有指导意义。
- 迟胜起宋云枝朱常香郑成超刘晓玲温孚江
- 关键词：核基质结合区马铃薯Y病毒
- 烟草蚀纹病毒山东分离物全基因组序列的克隆和保守性分析被引量：4
- 2011年
- 为利用RNA介导的病毒抗性策略,培育抗性稳定或抗多烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)株系的转基因植株,采用RT-PCR及5'-RACE方法克隆了烟草蚀纹病毒山东分离物TEV-SD1的全基因组序列。TEV-SD1全基因组核苷酸序列长度为9494 bp,包含1个9165 bp的开放阅读框架(open reading frame,ORF),编码3054个氨基酸。将TEV-SD1基因组序列与GenBank中已公布的4个TEV全基因组序列和11个外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列比对分析发现,各分离物CP基因间的核苷酸和氨基酸序列平均相似性分别为96.65%和98.31%,高于其它功能基因间的相似性;各分离物CP基因3'端核苷酸序列相似性平均为96.55%,高于5'端序列。聚类分析发现TEV在自然界中的分子变异与其寄主关系密切。
- 张林韩全军袁彤彤宋云枝朱常香温孚江
- 关键词：烟草蚀纹病毒基因克隆外壳蛋白RNA干扰
- 一种单子叶植物总DNA提取方法的改进及应用被引量：33
- 1995年
- 本文报导了一种可用于多种单子叶植物总ＤＮＡ提取的简易方法，其特点是迅速简易、成本低、产量高、纯度好，所得粗提总ＤＮＡ产量达３００μｇＤＮＡ／ｇ组织，经ＲＮＡ酶（ＲＮａｓｅＨ）处理后，电泳检测未发现残余ＲＮＡ。该方法可用于不同用途的单子叶植物总ＤＮＡ的提取与纯化，如用于花粉管导入法分子育种的基因源植物总ＤＮＡ的提取、对转基因植物进行ＤＮＡ分析等研究。
- 刘学春潘春欣宋云枝陈惠莉温孚江
- 关键词：单子叶植物脱氧核糖核酸
- CP基因3'端短片段介导的对马铃薯Y病毒的抗性被引量：31
- 2006年
- 目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试验表明前者没有一例转基因植株表现为抗病,而转化反向重复结构的转基因植株82.8%表现近似免疫的高度抗病型,Southern印迹杂交证明目的基因已整合到烟草基因组,Northern印迹杂交结果显示反向重复结构转基因植物的抗病性与RNA的表达量呈现负相关。结论抗病性是RNA介导的病毒抗性。3′端短片段诱导产生的转基因抗病株比例比5′端短片段诱导产生的高。
- 竺晓平朱常香宋云枝温孚江刘红梅李向东
- 关键词：马铃薯Y病毒DSRNARNA沉默
- 一体化生物技术专业实验课程体系的构建与实践被引量：6
- 2016年
- 专业实验课程的教学在本科人才培养中占有重要地位。在分析生物技术专业实验课程建设背景的基础上,针对存在的问题,将"基因工程综合实验"和"细胞工程综合实验"两门专业实验课程的内容进行整合,构建了一体化生物技术专业实验课程体系,并在实验内容、教学方法、实验报告、考核方式等方面进行了改革和探索。生物技术专业实验课程的改革与实践,极大地促进了学生的实践能力、创新精神、综合素质的提高。
- 朱常香王芳李滨宋云枝刘学春彭清才
- 关键词：生物技术一体化实验课程体系
