孙欲晓
- 作品数：11 被引量：33H指数：4
- 供职机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 外源性TNF-α基因克服多药耐药性的初步研究被引量：4
- 2001年
- 目的：探索外源性细胞因子 TNF-α基因克服多药耐药（ multidrug resistance,MDR）的新途径。方法：以重组逆转录病毒为载体，将 TNF-α基因导入具 MDR表型的人乳腺癌细胞系 MCF- 7/Adr，经 G418抗性筛选获阳性克隆 MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2。以 PCR和 ELISA法检测目的基因的整合与表达。细胞计数法观察细胞生长速度的改变 , MTT法检测外源性 TNF-α基因的逆转 MDR作用，流式细胞仪分析细胞内 ADR积累的变化。结果： MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2细胞中有 TNF-α基因的整合和表达，病毒上清中 TNF-α含量分别为 1 737 pg/ml（ 106 cells/48 h）、 2 875 pg/ml。与阴性对照细胞相比， MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2细胞的生长速度明显减慢，生长抑制率分别为 32.4％、 54.8％，对 ADR的耐药性明显降低，耐药逆转倍数分别为 5.2倍、 19.3倍，细胞内 ADR的积累明显增加。结论：外源性 TNF-α基因的导入能有效克服耐药性，增加细胞内药物的积累为其逆转耐药性的主要机制。
- 郭伟剑钱关祥沈兆忠罗建明郑颂国胡亮孙欲晓
- 关键词：乳腺肿瘤多药耐药性肿瘤坏死因子TNF-Α基因治疗
- 肿瘤坏死因子-α基因抑制耐药性人乳腺癌细胞的研究被引量：3
- 2002年
- 目的 观察肿瘤坏死因子 α(TNF α)基因对耐药细胞生长的抑制作用及机制。方法以重组逆转录病毒为载体将TNF α基因导入耐药性人乳腺癌细胞系MCF7/ADR ,获阳性克隆MCF7/ADR TNF1与MCF7/ADR TNF2。体外观察并比较野生型和转基因癌细胞的生长速度 ,流式细胞仪分析细胞周期的变化 ,端粒酶重复扩增实验 (TRAP)综合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法测定端粒酶活性的变化。结果 MCF7/ADR TNF1与MCF7/ADR TNF2细胞中有TNF α基因的整合和表达 ,病毒上清中TNF α含量分别为 173 7μg/L(10 6个细胞 /4 8h)、2 875 μg/L。与阴性对照细胞相比 ,MCF7/ADR TNF1与MCF7/ADR TNF2细胞的生长速度明显减慢 ,生长抑制率分别为 3 2 .4%、5 4.8% ,细胞周期阻滞于S +G2 /M期 ,端粒酶活性降低。结论 外源性TNF α基因的导入能有效抑制耐药细胞 ,阻滞细胞周期、抑制端粒酶活性可能为其主要机制。
- 郭伟剑孟志强沈兆忠罗建明郑颂国钱关祥孙欲晓胡亮
- 关键词：多药耐药性肿瘤坏死因子-Α乳腺癌细胞端粒酶活性
- 外源性TNF-α基因联合异搏定、三苯氧胺逆转多药耐药性被引量：8
- 2001年
- 目的 观察TNF α基因联合异搏定 (VRP)、三苯氧胺 (TAM)逆转多药耐药性 (MDR)的效果。方法 以重组逆转录病毒为载体将TNF α基因导入具MDR表型的人乳腺癌细胞系MCF7/ADR ,经G418抗性筛选获阳性克隆MCF7/ADR TNF。以PCR与ELISA法检测目的基因的整合与表达。MTT法检测外源性TNF -a基因联合VRP、TAM的逆转MDR作用 ,应用公式I=d/D1+d/D2 分析联合逆转效应。结果 MCF7/ADR -TNF细胞中有TNF α基因的整合和表达 ,TNF α分泌量为 1737pg/ml(10 6cells/ 48h)。与阴性对照细胞相比 ,MCF7/ADR -TNF细胞对ADR的耐药性明显降低 (P <0 .0 5 ) ,耐药逆转倍数为 1.6倍。TNF α基因与VRP联合呈拮抗效应 ,而TNF α基因与TAM (6 μmol/L)联合对MCF7/ADR的耐药性逆转有明显的协同效应 (效应指数I=0 .6 4)。结论 外源性TNF
- 郭伟剑李杰沈兆忠罗建明钱关祥孙欲晓胡亮
- 关键词：多药耐药性异博定三苯氧胺
- hTNF-α基因转导的小鼠肝癌细胞株H22的某些生物学行为
- 1999年
- 目的：为制备有效的细胞因子基因修饰瘤苗，观察人肿瘤坏死因子α（ｈＴＮＦ－α）基因修饰前后是否有生物学行为的改变。方法：将含信号肽的ｈＴＮＦ－α ｃＤＮＡ基因用逆转录病毒载体导入小鼠肝癌细胞株Ｈ２２中，用Ｇ４１８筛选、克隆和扩增。经分子生物学方法和细胞生物学方法对基因修饰的正确性、表达和分泌进行了鉴定。结果：ｈＴＮＦ－α基因整合至Ｈ２２细胞基因组ＤＮＡ中，未发生重排，并表达外源ｈＴＮＦ－α。ｈＴＮＦ－α基因修饰的肿瘤细胞表面形态有很大的变化。有些经ｈＴＮＦ－α基因修饰的Ｈ２２克隆，Ｈ－２Ｉ类抗原表达增强，提高肿瘤细胞免疫原性，间接诱导机体抗肿瘤免疫。结论：为进一步选择较好的Ｈ２２－ｈＴＮＦ－α克隆进行动物体内试验打下基础。
- 孙欲晓张腾飞陈诗书
- 关键词：瘤苗人肿瘤坏死因子Α免疫原性
- 复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达被引量：2
- 2001年
- 为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明 。
- 孙欲晓陈诗书
- 关键词：腺病毒载体
- TNF-α基因修饰瘤苗的抗肿瘤作用研究被引量：3
- 1997年
- 本实验观察比较了H22肿瘤细胞TNF一x基因修饰前后的体内致瘤性及经照射后作为瘤苗的治疗作用.结果表明在实验剂量范围内,H22-TNF-x细胞较H22原肿瘤细胞致瘤性下降,且经照射后作为瘤苗对一定剂量的原肿瘤细胞有治疗作用.为基因修饰瘤苗的进一步研究打下基础.
- 孙欲晓张腾飞陈诗书
- 关键词：瘤苗Α-肿瘤坏死因子致瘤性免疫原性
- 基因修饰肿瘤疫苗研究进展被引量：2
- 1996年
- 近年来基因修饰肿瘤疫苗包括ＭＨＣ分子、共刺激信号Ｂ７分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗，在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展，本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源ＭＨＣ、Ｂ７分子，使宿主免疫系统能有效识别、杀伤肿瘤；表达某些细胞因子（如ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α等）能诱导产生ＣＴＬ，而某些细胞因子则激发非Ｔ细胞的杀伤作用（如ＩＬ－４、Ｇ－ＣＳＦ诱导中性粒细胞的炎症反应，ＩＬ－２诱导ＮＫ细胞的杀伤作用，ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＦＮ－γ等诱导肿瘤局部Ｍφ的浸润）。
- 孙欲晓陈诗书
- 关键词：肿瘤细胞MHC修饰肿瘤疫苗
- 腺病毒载体介导人VEGF cDNA促进随意型皮瓣成活的实验研究被引量：6
- 2004年
- 目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮细胞生长因子基因对大鼠缺血随意型皮瓣成活的影响。方法30只SD大鼠随机分成3组,每组10只,于鼠背设计蒂在尾侧髂嵴水平的随意型皮瓣,面积为2cm×8cm,A组皮瓣远端23顺皮瓣长轴分10个点真皮下注入1012PFU的携带人血管内皮细胞生长因子基因的腺病毒(AdCMVVEGF),B组同法注入同剂量的携带β半乳糖苷酶基因的腺病毒(AdCMVGal),C组注入1ml的生理盐水,3d后掀起皮瓣并原位缝合,术后7d观察实验结果。结果每组皮瓣成活面积的百分比分别为A组(8591±254)%,B组为(5956±118)%,C组为(6148±109)%,A组成活率显著高于B组和C组,差异有非常显著性意义(P<001),B组与C组比较差异无显著性意义(P>005)。原位杂交、免疫组化显示,应用AdCMVVEGF治疗的成活皮瓣中,VEGF有表达,组织学切片显示,AdCMVVEGF治疗皮瓣中肉芽组织增生,新生血管大量形成。结论以腺病毒为载体局部应用VEGF基因能增加缺血皮瓣的成活面积,该法具有高效的特点。
- 李发成崔磊孙欲晓钱云良陈诗书关文祥
- 关键词：VEGF皮瓣成活腺病毒载体CMVPFU
- 缺血性疾病的基因治疗被引量：1
- 2000年
- 动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄等引起的缺血性疾病,严重危害人类的健康。基因治疗的目的是在某些细胞上产生瞬间的和局部特异的作用,因此降低细胞增生和基质形成,为缺血性疾病提供了一种很有希望和前景的治疗手段。在很多缺血动物模型中,抑制平滑肌细胞的增生,防止血栓的形成及抑制再狭窄的发生,从而改善缺血区的血供,缓解和治疗缺血症状;或者应用促血管生成因子,促进新生血管的产生,形成血管床。
- 孙欲晓
- 关键词：缺血性疾病基因治疗
- IL—2基因修饰鼠肝癌细胞引起的凋亡研究被引量：4
- 1995年
- 用重组人白细胞介素-2(IL—2)含信号肽.DNA的缺陷型逆转录病毒将人IL—2基因整合于鼠肝癌细胞株H22染色体后,PCR及RT—PCR方法确证有人IL—2基因存在及表达,流式细胞仪检测表明IL—2基因修饰后的H22细胞中DNA低含量细胞明显多于对照组.用透射电镜分别观察了IL—2基因修饰H22细胞和未经修饰H22细胞的超微结构,发现IL—2基因修饰H22细胞其染色体有固缩等凋亡现象发生,说明人IL—2基因在鼠肝癌细胞中的表达具有促使肿瘤细胞发生凋亡的作用;这可能也是IL—2基因修饰后其致瘤性下降的重要机制之一.
- 张腾飞孙欲晓陈诗书
- 关键词：逆转录病毒载体基因转染
