周晓辉
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 问号钩端螺旋体rLTB/rCTB-LipL32/1免疫保护作用及野生株LipL32基因表达和患者抗体检测被引量：5
- 2005年
- 目的 构建LTB- LipL32/ 1和CTB- LipL32 / 1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用,了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率。方法 采用常规分子生物学技术构建LTB- LipL32 / 1和CTB- LipL32 /1融合基因及其原核表达系统。采用SDS PAGE检测目的重组蛋白rLTB -LipL32 / 1及rCTB -LipL32 / 1表达情况。分别采用Westernblot和GM1 -ELISA检测rLTB -LipL32 / 1及rCTB -LipL32 /1的免疫反应性和佐剂活性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株LipL32基因及其表达情况。采用ELISA检测2 2 8例钩体病人血清LipL32基因产物的抗体。采用豚鼠保护试验检测重组蛋白的免疫保护作用。结果 与报道的相关序列比较,LTB -LipL32 /1和CTB- LipL32 / 1融合基因核苷酸序列相似性分别为99.12 %～99.71%和98.5 4 %～99.4 2 % ,氨基酸序列相似性分别为97.5 8%～99.6 3%和96 .77%～99.6 3%。rLTB- LipL32 1和rCTB- LipL32 /1表达产量均约为细菌总蛋白的10 % ,并主要以包涵体形式存在。rLTB -LipL32 / 1和rCTB- LipL32 /1均分别能与LipL32 /1兔抗血清和牛GM1结合。97.9%(95 97)问号钩体野生株含有LipL32基因,95 .9% (93 97)问?
- 阮萍严杰毛亚飞周晓辉
- 关键词：问号钩端螺旋体LTB基因霍乱弧菌
- 甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白H1a基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫原性和保护作用被引量：4
- 2006年
- 目的构建甲型副伤寒杆菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原核表达系统,确定表达产物rH1a免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达情况。方法采用高保真PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增H1a基因,T-A克隆后测序,构建H1a基因原核表达系统pET32a-H1a-E．coli BL21DE3。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查rH1a表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rH1a。采用Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性。建立PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达频率。观察rH1a对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,所克隆的H1a基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为99．59％。rH1a表达量为细菌总蛋白的60％左右。甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rH1a并与之结合。rH1a免疫家兔可产生抗体。100％(98／98)甲型副伤寒杆菌临床菌株均含有H1a基因并表达H1a。500μgrH1a灌喂或皮下注射免疫小鼠受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率均为50．0％,若加入5μg rLTB,存活率分别上升至75．0％和66．7％。结论本研究成功地从甲型副伤寒杆菌临床菌株中构建了H1a基因高效原核表达系统。rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用。甲型副伤寒杆菌临床菌株广泛存在H1a基因并高频率表达。
- 阮萍林晓骥李晶周晓辉严杰
- 关键词：甲型副伤寒杆菌原核表达免疫原性
- 问号钩端螺旋体lipL41基因表达及重组抗原分析被引量：1
- 2005年
- 目的构建问号钩端螺旋体(钩体)ltB/ctBlipL41/1融合基因及其原核表达系统。方法采用连接引物聚合酶链反应(PCR)构建ltBlipL41/1和ctBlipL41/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的重组蛋白rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1表达情况;用免疫印迹和神经节苷脂酶联免疫吸附试验(GM1ELISA)分别检测上述目的重组蛋白的免疫原性和佐剂活性;采用PCR和显微镜凝集试验(MAT)分别检测97株问号钩体野生株lipL41/1基因及其表达情况;用ELISA检测228例钩体患者血清lipL41基因产物的抗体。结果与报道的相关序列比较,ltBlipL41/1和ctBlipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%～99.9%和99.8%～100%。rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,主要以包涵体形式存在。rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1均分别能与rLipL41/1兔抗血清和牛GM1结合。87.6%(85/97)问号钩体野生株含有lipL41基因,84.5%(82/97)问号钩体野生株分别与rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清出现效价范围为1∶4～1∶128的MAT阳性结果。84.6%(193/228)和78.5%(179/228)的患者血清分别rLipL41/1和rLipL41/2抗体阳性。结论成功地构建了ltBlipL41/1和ctBlipL41/1融合基因及其原核表达系统。所表达的rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1融合蛋白有良好的免疫原性和佐剂活性。lipL41基因存在于不同问号钩体血清群中并高频率表达。rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1具有成为钩体属特异性疫苗抗原的良好前景。
- 阮萍严杰毛亚飞彭慧琴周晓辉
- 关键词：问号钩端螺旋体基因表达重组抗原融合基因疫苗抗原
- 甲型副伤寒杆菌侵袭蛋白(spaO)基因原核表达及免疫性和保护作用研究被引量：2
- 2006年
- 目的研究甲型副伤寒杆菌spaO基因重组表达产物rSpaO免疫性和保护作用,并了解甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达情况。方法扩增并克隆甲型副伤寒杆菌临床株 JH01 spaO基因,构建原核表达系统;采用SDS-PAGE分析rSpaO表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集 rSpaO,采用Western blot鉴定其免疫反应性;采用PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株 spaO基因携带和表达频率;观察rSpaO对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,克隆的spaO基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99．45％-99．89％和 99．01％-100％;rSpaO表达量为细菌总蛋白的75％左右;甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rSpaO; rSpaO免疫家兔可产生抗体;94．9％(93／98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有spaO基因,91．4％(85／93) spaO+菌株表达SpaO。rSpaO灌喂或皮下注射免疫小鼠(500μg)受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率分别为58．3％和50．0％;若加入5μg rLTB,存活率分别上升88．3％和75．0％。结论甲型副伤寒杆菌临床菌株有较高的spaO基因携带率和表达率;rSpaO有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗的候选抗原。
- 毛亚飞林晓骥李晶阮萍周晓辉严杰
- 关键词：甲型副伤寒杆菌原核表达
