吴辉文
- 作品数：3 被引量：20H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金更多>>
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- 重组载体pEGFP-N1/TNFR1在人脐静脉血管内皮细胞中的表达
- 2009年
- 目的:构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/TNFR1,并在人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)中表达。方法:分离并培养HUVECs,将已成功构建的融合表达载体pEGFP-N1/TNFR1,通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染到HUVECs中,RT-PCR检测TNFR1mRNA的表达,Western blotting检测融合蛋白的瞬时表达,同时在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察。结果:成功分离HUVECs,重组pEGFP-N1/TNFR1融合表达载体转染HUVECs后,在细胞中检测到TNFR1基因片段,Western blotting可以检测到TNFR1在HUVECs表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达。结论:重组pEGFP-N1/TNFR1融合表达载体在HUVECs中获得了表达,融合蛋白具有TNFR1和绿色荧光蛋白(GFP)的双重活性,为进一步研究TNFR1转位的调控因素打下基础。
- 叶顺传曾秋棠吴辉文吕云波
- 关键词：肿瘤坏死因子绿色荧光蛋白脐静脉血管内皮细胞
- 法舒地尔对急性心肌梗死大鼠心肌的保护作用被引量：20
- 2008年
- 目的:通过检测急性心肌梗死(AMI)大鼠左心室梗死面积及缺血区凋亡细胞来评价法舒地尔对大鼠AMI后心肌的保护作用。方法:雌性Wistar大鼠随机分为3组,AMI组:结扎左前降支(LAD);治疗组:术前1 h法舒地尔30 mg/kg腹腔注射,结扎LAD;假手术组:仅在LAD下穿线但不结扎。术后24 h,伊文蓝-红四氮唑双染色,确定缺血面积和梗死面积,TUNEL法检测缺血区凋亡细胞,免疫组织化学染色法检测缺血区bcl-2和bax的表达,逆转录-聚合酶链式反应测定Rho激酶mRNA的表达。结果:治疗组与AMI组比较,梗死面积显著减小(26.04±2.51)%∶(32.27±3.07)%,P<0.01,缺血面积差异无统计学意义。AMI组与假手术组比较,凋亡指数明显增加(31.94±3.03)∶(2.44±1.37),P<0.01,bcl-2表达降低,bax表达增加,Rho激酶mRNA表达增加(均P<0.01)。而治疗组与AMI组比较,凋亡指数显著降低,bcl-2表达增加,bax表达降低,Rho激酶mR-NA表达降低,均P<0.01。结论:Rho激酶参与了AMI心肌细胞的凋亡,法舒地尔的心肌保护作用与其抗心肌细胞凋亡效应有关。
- 戴睿曾秋棠吴辉文
- 关键词：心肌梗死法舒地尔细胞凋亡
- 肌球蛋白ⅡB对人脐静脉血管内皮细胞中肿瘤坏死因子受体1转位影响的观察
- 2008年
- 目的:观察非肌肉肌球蛋白重链ⅡB(nonmuscle myosin heavy chainⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TN-FR1)转位的影响。方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染入HUVECs,筛选获得稳定克隆株。设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,si RNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFα诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR1蛋白含量的变化。结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB si RNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2)∶(0.454 0±0.041 1),P<0.01],也可以明显减少TNFα诱导前[(0.430 6±0.028 9)∶(0.324 8±0.016 7),P<0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]细胞质膜TNFR 1的含量。在转染NMHC-ⅡB si RNA的细胞,TNFα的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]。结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用,但是可能并不是惟一的或决定性的因素。
- 叶顺传曾秋棠吴辉文吕云波
- 关键词：肿瘤坏死因子受体1小分子干扰RNA人脐静脉血管内皮细胞转位
