刘程伟
- 作品数：68 被引量：134H指数：6
- 供职机构：佳木斯大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省博士科研启动基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 早期生长反应基因-1在自体移植静脉中的表达研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究自体静脉移植后早期生长反应基因-1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用。方法 Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型。术后分为1、2、6、24 h,3、 7、14、28、42 d组,取正常静脉作为对照。应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达,联合应用Western blot蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1的蛋白表达。结果自体静脉移植后, Egr-1 mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化。移植后1 h,Egr-1 mRNA基因表达值为2．21±0．85。 6-24 h时下降,7 d时重新升高,28 d达高峰为3．16±1．14。移植早期2 h:Egr-1蛋白的表达阳性率为 31％±6％,24 h至3 d下降,28 d达高峰为41％±8％。免疫组化显示:移植早期Egr-1蛋白阳性表达主要位于中膜血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞／巨噬细胞;移植后期Egr-1蛋白阳性表达主要位于新生内膜和中膜的VSMCs,同时部分内皮细胞也有表达。结论移植静脉内膜增生与Egr-1的激活及表达关系密切,因而与移植静脉内膜增生及狭窄有关。
- 刘程伟杨军张雪松杨德华张强胡新华
- 关键词：静脉早期生长反应基因-1
- 脾大部分切除术对肝硬化门脉高压症大鼠脾功能影响的实验研究
- 目的:研究肝硬化门脉高压症大鼠血清白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-8(IL-8)变化规律及可能性机制;探讨脾大部分切除术的优越性及对于门脉高压症应保留多少脾脏的问题;研究脾大部分切除后残脾的生理功能.方法:健康成...
- 刘程伟
- 关键词：门静脉高压症全脾切除术白细胞介素-2白细胞介素-8
- 文献传递
- 急性肠系膜静脉血栓形成与MTHFR基因C677T突变的相关性研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T突变在急性肠系膜静脉血栓形成(AMVT)发病中的意义。方法采用高效液相色谱法测定63例AMVT患者和128名健康对照者血浆的同型半胱氨酸(Hcy)水平,放射免疫法测定血浆叶酸浓度;应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法进行MTHFRC677T基因多态性分析,并进行基因型及等位基因频率的计数。结果AMVT组和对照组血浆Hcy水平分别为(23.5±8.8)μmol/L和(12.7±6.9)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。Hcy水平与叶酸呈负相关(AMVT组:r=-0.42,P<0.01;对照组:r=-0.39,P<0.01)。MTHFR C677TTT基因型在AMVT组的分布频率为33.3%,高于对照组的17.2%,差异有统计学意义(χ2=6.31,P<0.05)。结论血浆Hcy水平升高是AMVT形成的危险因素之一。MTHFR C677T多态性中TT基因型可能是AMVT形成的一个重要遗传风险因子。
- 李志文胡新华杨军张强何家安范玥尧张志深刘程伟杨德华辛世杰段志泉
- 关键词：静脉血栓形成肠系膜静脉亚甲基四氢叶酸还原酶多态性
- PDGF-B基因转染骨髓间充质干细胞的研究
- 2006年
- 目的:探讨血小板源性生长因子B(PDGF-B)基因转染修饰大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的可行性。方法:应用FAM标记重组真核表达载体系统(pcDNA3-PDGF-B),以脂质体法转染原代MSC,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果:MSC的基因转染成功,持续表达时间超过了8周,没有发现明显的细胞毒作用及对细胞活力的显著影响。结论:采用真核转染技术可以介导外源基因转染MSC,MSC是一种理想的基因载体细胞,可用于PDGF-B的基因治疗。
- 李铁民程颖胡新华刘程伟赵宁张佳林刘永锋
- 关键词：血小板源性生长因子B转染脂质体
- 基因表达谱芯片筛选破裂性腹主动脉瘤组织中的差异表达基因
- 2006年
- 目的采用表达谱基因芯片技术筛选破裂性腹主动脉瘤组织中的差异表达基因。方法选取破裂性腹主动脉瘤组织标本6例,以年龄、性别构成、动脉瘤直径等相仿的6例未破裂腹主动脉瘤作对照。抽提总RNA,纯化mRNA后逆转录制备杂交探针,采用含有4 096种人类基因全长cDNA的表达谱芯片进行差异表达谱分析,通过Northern blot或Western blot反向验证部分差异表达基因。结果在破裂性腹主动脉瘤组织中发现差异表达基因共有124条,上调的基因89条,下调的基因35条;共存性基因有42条,其中上调基因29条,下调基因13条。差异表达的基因有与基质代谢、炎性因子及粘附分子、细胞凋亡、原癌基因或抑癌基因、细胞信号和传递蛋白、细胞骨架和运动蛋白相关基因表达密切相关的多种基因参与。通过Northern blot等方法反向验证基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶组织抑制剂2基因,证实在腹主动脉瘤组织中存在基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶组织抑制剂2的mRNA及蛋白产物的差异表达。结论应用表达谱基因芯片筛选破裂性腹主动脉瘤中的差异表达基因,可能为其发病机制及防治的研究提供新思路。
- 杨军胡新华张宏伟刘程伟张志深张强
- 关键词：生物医学工程学腹主动脉瘤NORTHERNBLOT金属蛋白酶组织抑制剂
- RNA干扰沉默雷帕霉素靶蛋白基因表达对血管平滑肌细胞增殖活性的影响被引量：10
- 2006年
- 目的构建靶向雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的RNA干扰表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性的影响。方法根据大鼠mTOR基因序列设计2个短发夹环RNA (shRNA)序列,化学法合成单链寡核苷酸序列,将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN,脂质体介导转染包装细胞PT67后获得mTOR的重组逆转录病毒shRNA表达载体,感染VSMC,Northern blot和Western blot法检测mTOR及其下游底物真核细胞启动子4E结合蛋白(4E-BP1)、p70s6k等表达的变化,流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化,噻唑蓝(MTT)法检测VSMC增殖活性的改变。结果shRNA序列插入pLXIN载体并感染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR的mRNA和蛋白产物表达,mTOR通路下游的核糖体蛋白S6激酶(p70s6k)表达相应减少,而4E-BP1的表达却显著增强；感染前VSMC细胞G_1/G_0,期比例为71%,S期为15%,凋亡细胞为2%；转染后72 h,G_1/ G_0期比例为87%,S期为6%,凋亡细胞为6%(P＜0．01)；表明G_0/G_1μ→S过程受阻,VSMC的分裂、增殖受到抑制,凋亡机制启动,更多细胞停滞在G_0/G_1期。结论成功构建靶向mTOR基因的shRNA表达载体,能够明显抑制VSMC分裂、分化和增殖。
- 胡新华张强杨军杨德华刘程伟张志深
- 关键词：雷帕霉素RNA干扰血管平滑肌细胞
- Egr-1对VSMC增殖、凋亡和表型转化的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:研究早期生长反应基因-1(Egr-1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡和表型转化的影响。方法:实验分空白对照组和Egr-1组。应用MTT法研究不同浓度和不同作用时间组Egr-1对VSMC增殖的影响;应用透射电镜方法、原位DNA片段末端标记(TUNEL)方法,研究不同作用时间下Egr-1对VSMC表型转化与凋亡的影响。结果:MTT法检测不同浓度Egr-1组与对照组间比较OD值具有显著性差异(P<0.05)。浓度40μg/mL时促VSMC增殖效应最显著。在最适浓度下(40μg/mL)Egr-1促VSMC增殖作用于24h达到高峰。Egr-1抑制VSMC凋亡的作用在12h时最明显。对VSMC凋亡的影响在一定时间范围内呈负相关。Egr-1作用24h时促VSMC向合成表型转化的作用最显著。结论:Egr-1对VSMC的促增殖作用在一定范围内与浓度和作用时间呈正相关。Egr-1一定程度具有抑制VSMC凋亡的作用并促进VSMC由收缩型向合成型转化。
- 刘程伟王培宏王树卿
- 关键词：EGR-1平滑肌血管增殖凋亡表型转化
- 上皮钙黏蛋白和α-连接素的表达与乳腺癌生物学特性的关系被引量：1
- 2005年
- 目的 检测上皮钙黏蛋白和α连接素在乳腺癌组织中的表达情况,分析它们与乳腺癌生物学特性的关系,探讨乳腺癌浸润、转移的机理。方法 采用免疫组织化学方法检测54 例乳腺癌及21 例癌旁正常组织(距肿瘤5 cm以上并经病理检查证实)中上皮钙黏蛋白和α连接素的表达情况。结果 21例癌旁正常组织中,上皮钙黏蛋白和α连接素均主要定位于腺泡或导管上皮细胞膜上,显示了细胞细胞间交界和细胞轮廓,二者均表达正常;54例乳腺癌组织中上皮钙黏蛋白和α连接素的异常表达率分别为51.9%和63.0%。上皮钙黏蛋白和α连接素的异常表达与组织学分级及高增殖活性密切相关。α连接素异常表达与TNM分期、腋窝淋巴结转移和术后远处转移显著相关。上皮钙黏蛋白异常表达与HER 2表达呈正相关。COX多元回归分析显示,两种蛋白表达均未能成为影响乳腺癌预后的独立指标。结论 乳腺癌中广泛存在上皮钙黏蛋白和α连接素异常表达,二者异常表达与乳腺癌的增殖、分化失控相关。
- 刘臻张强马文锋杨栋刘程伟亓明
- 关键词：乳腺肿瘤上皮钙黏蛋白Α-连接素生物学病理检查
- RNA干扰沉默哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白基因表达对大鼠血管平滑肌细胞增殖活性及移植血管内膜增生的影响被引量：5
- 2007年
- 目的构建靶向哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的 RNA 干扰表达载体,研究其对离体培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法设计并合成针对大鼠 mTOR 基因的短发夹环 RNA(shRNA)序列和对照序列,插入逆转录病毒载体pLXIN,转染包装细胞获得重组的病毒载体。感染 VSMC,Northern 杂交和免疫蛋白印迹检测 mTOR及其下游底物4E-BP1和 p70s6k 表达的变化,流式细胞仪检测 VSMC 增殖周期的变化,MTT 法检测VSMC 增殖活性的改变。建立大鼠自体静脉移植模型54只,随机分成转基因组、对照组、空白对照组,术后7 d、14 d、28 d 取材,常规 HE 染色、免疫组织化学染色、免疫蛋白印迹检测 mTOR 表达,TUNEL 法检测 VSMC 凋亡。结果 shRNA 序列插入 pLXIN 载体,成功包装并且感染 VSMC,证实针对mTOR 基因的 pLXIN-shRNA 能够显著抑制 mTOR 表达,mTOR 通路下游的 p70s6k 表达减少,而4E-BP1的表达却显著增加;被感染 VSMC 的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在 G_0/G_1期;局部感染移植血管能够显著减少 mTOR 基因的 mRNA 及蛋白质产物表达(均 P<0.01),内膜增生程度亦较其他组明显减轻(P<0.01),凋亡细胞增多(P<0.01)。结论成功构建靶向 mTOR 基因的 RNA 干扰表达载体,沉默 mTOR 基因表达能够抑制 VSMC 分裂、分化和增殖,减轻内膜增生,增加 VSMC 凋亡。
- 胡新华张强杨军刘程伟张志深杨德华
- 关键词：基因表达血管内膜
- 转染survivin反义寡脱氧核苷酸对移植血管内膜增生的影响被引量：13
- 2006年
- 目的研究survivin基因的反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对移植血管内膜增生的影响。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为5组：对照组，survivin ASODN 50μg组，200μg组，正义对照组，lipoectin＋pluronic组。分别施加不同的处理因素，在移植后1，2周取材。用组织形态学方法比较内膜增生程度；用半定量RT-PCR检测survivin基因的mRNA表达；Western blot检测survivin基因的蛋白产物表达；免疫组化方法检测survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL法检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡。结果静脉移植1～2周内膜增生明显，局部转染50μg survivin ASODN后明显抑制内膜增生（P〈0．05），200μg组受抑制程度较50μg组更为显著（P〈0．05）。静脉移植后，对照组survivin的mRNA及蛋白产物表达显著增加，而survivin ASODN组却显著减少（P〈0．05），VSMC中PCNA表达也同时减少，而TUNEL阳性细胞明显增加。结论survivin ASODNs可显著抑制移植静脉的内膜增生；其作用可能是通过抑制survivin的基因及蛋白产物表达，促进VSMC凋亡而实现的。
- 杨军胡新华刘程伟张志深张强
- 关键词：静脉移植
