刘文山
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
- 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”武汉市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生文化科学更多>>
- 利用a凝集素在酿酒酵母表面展示解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2被引量：11
- 2008年
- 【目的】将解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母表面,构建全细胞催化剂。【方法】采用PCR方法扩增得到解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2成熟肽编码基因LIP2,将其连接到AGA2基因的下游构建表面展示载体pCTLIP2。分别以橄榄油、三丁酸甘油酯和对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为底物检测展示的脂肪酶酶活。在此基础上,对野生菌及工程菌的酶学性质进行比较。【结果】展示Lip2的酿酒酵母重组菌株在半乳糖的诱导下,表现出水解橄榄油、三丁酸甘油脂以及pNPP的活性,20℃诱导72h时酶活达到最高,为182U/g干细胞。对展示的Lip2的酶学性质研究表明,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,温度稳定性比自由酶有所提高,50℃温浴4h后残余酶活为其最大酶活的23.2%。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物检测其底物特异性,结果显示其水解C8,C12,C16对硝基苯酚酯活性相近,均远高于对硝基苯酚丁酸酯(C4)的水解酶活。【结论】对于Lip2,a凝集素系统是一个有效的展示系统,利用该系统成功将Lip2展示在酿酒酵母表面,从而构建了酿酒酵母全细胞催化剂,该全细胞催化剂具有良好的潜在应用前景。
- 刘文山徐莉赵鹤云杨江科闫云君
- 关键词：脂肪酶解脂耶氏酵母酿酒酵母
- 理工科大学生团队精神的塑造被引量：1
- 2006年
- 本文在问卷调查和统计分析的基础上,就如何培养当代大学生的团队合作精神提出了几点建议,希望通过增强集体荣誉感、培养沟通能力、树立规则意识、正确处理集体利益与个人利益之间的关系、增设相关课程与活动等几个方面的引导和教育,能够使大学生在团队精神方面展现新面貌,成为适应时代发展要求的合格人才。
- 吴疆鄂徐春燕刘文山刘收聂清斌
- 关键词：大学生团队精神问卷调查
- 土壤中产脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌的分离与鉴定被引量：3
- 2010年
- 洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)在生物防治、生物降解等农业领域有着广泛的应用,它产生的脂肪酶则在有机合成、精细化工等领域潜力巨大。采用改良的TB-T平板筛选法从土壤中初步筛选出300株洋葱伯克霍尔德菌,然后用脂肪酶活性检测平板对300株菌进行筛选,最终获得6株脂肪酶产量高的菌,通过发酵发现6株菌均有较好的产脂肪酶能力。随后通过16S rDNA比对的方法将6株全部鉴定为B.cepacia。在此基础上,采用HaeⅢ-recA RFLP和基因种特异性PCR对6株菌进行了基因种鉴定,结果表明JWT16、G63YL、WJ158和JWT137属于Burkholderia cenocepacia菌,JWP9属于Burkhold-eria vietnamiensis,JWT267则属于Burkholderia multivorans。
- 贾彬刘文山杨江科汪小锋叶才伟闫云君
- 关键词：洋葱伯克霍尔德菌
- 解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2的表面展示及其酶学性质被引量：1
- 2010年
- 表面展示酶作为全细胞催化剂具备诸如能提高酶的稳定性、省去纯化过程、节约成本等优点。脂肪酶是应用最为广泛的工业酶之一。本研究利用酿酒酵母细胞壁蛋白Cwp2作为锚定蛋白,将解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母细胞表面,以制备脂肪酶全细胞催化剂。Lip2被融合到Cwp2的N端,Cwp2通过其C端的GPI锚定信号共价结合到细胞壁上。表面展示的Lip2可以水解三丁酸甘油酯及对硝基苯酚辛酸酯(pNPC),其pNPC水解酶活达到4.6U/g干细胞。作为全细胞催化剂,表面展示的Lip2具备良好的催化特征,其最适温度为40°C,最适pH为8.0,同时还具备良好的有机溶剂稳定性。
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- 关键词：脂肪酶解脂耶氏酵母酿酒酵母
- 脂肪酶表面展示技术被引量：5
- 2007年
- 脂肪酶是一种广泛应用的水解酶类。脂肪酶的表面展示技术不仅是脂肪酶蛋白质工程中一种有效的高通量筛选方法,而且展示的脂肪酶与自由酶相比具备更高的温度稳定性、有机溶剂稳定性等优点,其作为全细胞催化剂与传统的固定化脂肪酶相比也具备诸多优点。脂肪酶表面展示的宿主包括噬菌体、细菌以及酵母等,将分别介绍这三种宿主中脂肪酶表面展示的概况及其作为高通量筛选和全细胞等方面的应用。
- 刘文山闫云君
- 关键词：脂肪酶高通量筛选
- 脂肪酶在酿酒酵母中的表面展示研究
- 随着石化能源的日益枯竭，生物柴油作为一种清洁环保、性能优良的绿色可替代能源受到广泛的关注。脂肪酶法制备生物柴油技术由于具备反应条件温和、无污染物排放等优点，发展前景广阔。但脂肪酶价格高、在有机溶剂中易失活等缺点，限制了酶...
- 刘文山
- 关键词：脂肪酶酿酒酵母
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的基因改造及其在毕赤酵母中组成型和诱导型的表达被引量：10
- 2010年
- 【目的】克隆洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）脂肪酶基因,实现其在毕赤酵母中快速、安全和稳定性的大量表达。【方法】首先设计引物扩增B.cepacia脂肪酶基因,然后应用生物信息学方法分析B.cepacia和毕赤酵母整体密码子使用情况、脂肪酶基因信号肽及密码子偏好性。在此基础上,运用overlap PCR对脂肪酶基因中低使用频率密码子进行改造并同时降低基因的G＋C含量,获得优化的脂肪酶基因。再分别把原始和优化的脂肪酶基因导入载体pGAPZα和pPIC9K中,获得组成型表达载体pGAPlipW、pGAPlipO和诱导型表达载体pPIClipW、pPIClipO。分别将所得4种载体转入GS115中,得到一系列工程菌。经发酵和NTA树脂纯化后,对脂肪酶的酶学性质进行了初步研究。【结果】4种工程菌的脂肪酶活力分别为pPIClipW37.8U/mL,pPIClipO129.5U/mL,pGAPlipW40.2U/mL和pGAPlipO184.3U/mL。改造后脂肪酶活力比原始脂肪酶提高了4.6倍。酶学性质研究表明,脂肪酶在60℃时活力最高,在40℃-65℃范围内非常稳定;脂肪酶最适pH值为9.0,在pH6.0-pH10.0范围均表现很好的稳定性。【结论】通过overlap PCR改造后的脂肪酶显著提高了其在毕赤酵母中的表达效率,且GAP启动子比AOX1启动子更适合于B.cepacia脂肪酶的表达。大量表达的重组脂肪酶的性质与野生脂肪酶的性质相同,符合生产要求。
- 贾彬刘文山杨江科叶才伟徐莉闫云君
- 关键词：洋葱伯克霍尔德菌OVERLAPGAP启动子
