刘志华
- 作品数：11 被引量：62H指数：3
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 球毛壳菌(Chaetomium globosum)过氧化物膜蛋白过敏原基因克隆、序列分析及原核表达被引量：2
- 2006年
- 以球毛壳菌cDNA文库中获得过氧化物膜蛋白(pero)基因片段(GenBank Accn: BP099709)为基础,用RACE技术获得该基因的全长cDNA序列。序列长747bp,由412bp的3’ RACE产物和508bp的5’RACE产物拼接而成。开放阅读框501bp,编码166个氨基酸,蛋白分子量为17．5kDa,理论等电点为5．75。利用cDNA两侧非编码区序列作引物克隆出该基因的DNA 序列,序列分析表明该基因由2个内含子和3个外显子组成。ClustalX多序列比对表明:该基因与粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)的过氧化物膜蛋白过敏原同源性最高(83％)。将pero基因编码区克隆到原核表达载体pET28a中,构建成表达质粒pET28a-pero并转化大肠杆菌BL21,IPTG 诱导后SDS-PAGE检测表达情况,结果发现在21kDa处有一特异性融合蛋白带,大小与预期相符, 说明该基因已经在大肠杆菌中表达。克隆的cDNA序列、DNA序列及推测的氨基酸序列在 GenBank登录(登录号分别为AY555771,AY584753,AAS66898)。
- 刘志华杨谦杨力明
- 球毛壳菌组蛋白H3基因克隆与特性分析被引量：1
- 2005年
- 构建了球毛壳菌菌丝的cDNA文库,并获得了1410条ESTs序列,用里氏木霉(Hypocrea jecorina,AAM76068)和粗糙脉胞菌(Neurospora crassa,CAA25761)的组蛋白H3基因(Histone H3)蛋白序列对球毛壳菌(Chaetomium globosum)ESTs序列本地数据库进行tBlastn检索,获得了球毛壳菌组蛋白H3cDNA序列。cDNA序列全长739bp,开放阅读框411bp,编码136个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为15.4kD。BlastP同源性分析表明该基因与里氏木霉同源性最高为100%;与地钱(Marchantia polymorpha)同源性最低为95%。三级结构预测表明,该蛋白C端为球状结构域,而N端结构对其发挥调控作用起重要作用。该基因的cDNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank登录(登录号分别为AY669068,AAT74576)。
- 刘志华杨谦
- 关键词：球毛壳菌组蛋白H3基因克隆特性分析生物信息学
- 球毛壳菌60S核糖体蛋白L10a基因克隆与特性分析被引量：19
- 2006年
- 用粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)XP_322380和赤霉菌(G ibberella zeae)PH-1(EAA76971)的60S核糖体蛋白L10 a基因(60S ribosom al prote in L10 a,RPL10 a)蛋白序列对球毛壳菌(Chaetom ium globosum)ESTs序列数据库进行tB lastn检索,获得了球毛壳菌RPL10 a cDNA序列。cDNA序列长765 bp,开放阅读框654 bp,编码217个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为23.9 kD。B lastP分析表明该基因氨基酸序列与粗糙脉胞菌相似最高为89%;与玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)相似性最低为78%。cDNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank登录(登录号分别为AY669070,AAT74578)。
- 刘志华杨谦
- 关键词：球毛壳菌基因克隆特性分析生物信息学
- 球毛壳菌cox5基因克隆及特性分析被引量：1
- 2007年
- 利用BlastX将球毛壳菌(Chaetomium globosum)ESTs序列与GenBank的Nr数据库进行相似性搜索,获得含有细胞色素c氧化酶亚基5基因(cox5)全长cDNA序列的EST(BP099084),以此设计引物。以球毛壳菌总RNA反转录产物为模板进行PCR扩增,获得球毛壳菌cox5的cDNA序列。cDNA全长685bp,编码169个氨基酸的多肽,蛋白质分子量18.3KD。蛋白质家族预测其属于cox4家族。球毛壳菌cox5是具有导肽的跨线粒体内膜的蛋白质。BlastP相似性分析表明cox5氨基酸序列保守性不高,与其相似性最高的是柄孢霉的cox5(Podospora anserina,CAB76570),相似性为75%。cox5基因的cDNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank上登录(登录号分别为DQ082750、AAY85812)。
- 胡珅杨谦刘志华
- 关键词：球毛壳菌基因克隆特性分析生物信息学
- 绿色木霉内切葡聚糖酶基因egⅦ及其编码的氨基酸序列和用于克隆该基因的引物
- 绿色木霉内切葡聚糖酶基因egⅦ及其编码的氨基酸序列和用于克隆该基因的引物，它涉及涉及一种内切葡聚糖酶基因及其编码的氨基酸序列和用于克隆该基因的引物。它提供了绿色木霉内切葡聚糖酶基因egⅦ及其编码的氨基酸序列和用于克隆该基...
- 黄晓梅杨谦陈秀玲宋金柱刘志华
- 文献传递
- 球毛壳菌(Chaetomium globosum)功能基因克隆及表达研究
- 球毛壳菌（Chaetomium globosum）是一种应用前景广阔的植物病害生物防治菌。不仅能有效地防治多种蔬菜、林木和其它大田作物的病害，还能够降解木质素等难降解化合物，含有多种生产高价值酶类的基因，具有重要研究价值...
- 刘志华
- 关键词：球毛壳菌基因表达生物防治全长CDNA序列
- 球毛壳菌pdc基因克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2009年
- 利用BlastX将球毛壳菌(Chaetomium globosum)ESTs序列与GenBank的Nr数据库进行相似性搜索,获得含有丙酮酸脱羧酶基因(pdc)的2条ESTs(BP099214和BP113195),以此设计引物,克隆获得球毛壳菌pdc基因的cDNA及DNA序列。cDNA和DNA序列长度分别为1725和1829bp,编码574个氨基酸的多肽,蛋白质分子质量63.38ku。蛋白质家族预测其属于焦磷酸硫胺素TPP家族。BlastP相似性分析表明,PDC氨基酸序列保守性不高,与其相似性最高的是柄孢霉的PDC(Podospora anserina,CAD60727),相似性为79%。pdc基因的cDNA及DNA序列在GenBank上的登录号分别为EU304327,EU304326。
- 张金栋刘志华杨谦胡珅
- 关键词：球毛壳菌丙酮酸脱羧酶基因克隆生物信息学分析
- 球毛壳菌二烯醇内酯水解酶基因克隆及序列分析被引量：1
- 2005年
- 以球毛壳菌cDNA文库中获得的二烯醇内酯水解酶基因片段(GenBank Accn:BP099060)为基础,用RACE技术克隆出该基因的全长cDNA序列。序列长919bp,由450bp的3′RACE产物和608bp的5′RACE产物拼接而成。开放阅读框762bp,编码253个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为27.5kD,理论等电点为5.98。利用cDNA两侧非编码区序列作引物克隆出该基因的DNA序列。序列分析表明,该基因由2个内含子和3个外显子组成,外显子与内含子剪连接区符合AG-GT规则。克隆的cDNA序列、DNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank登录(登录号分别为AY465528,AY555772,AAS66899)。
- 刘志华杨谦
- 关键词：RACE
- 球毛壳菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因克隆及特性分析被引量：29
- 2005年
- 用粗糙脉孢菌(Neurospora crassa,XP_327967)和菜豆炭疽病菌(Colletotrichum lindemuthianu,P35143)的甘油醛_3_磷酸脱氢酶基因(Glyceraldehyde 3_phosphatedehydrogenase,GAPDH)氨基酸序列对球毛壳菌(Chaetomium globosum)菌丝ESTs序列本地数据库进行tBlastn检索,获得了球毛壳菌GAPDH全长cDNA序列。该序列长1240bp,开放阅读框1014bp,编码337个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为36.1kD。用PCR方法克隆了该基因的DNA序列,序列长为1556bp,由2个内含子和3个外显子组成。BlastP同源性分析表明该基因与鹅掌柄孢壳(Podosporaanserine)同源性最高为95%;与米曲霉(Aspergillusoryzae)同源性最低为87%。GAPDH酵母转化子生物功能分析表明转化子对Na2CO3和高温有高的耐受性,证明GAPDH为抗胁迫基因。该基因的cDNA序列、DNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank登录(登录号分别为AY522719,AY593253,AAS01412)。
- 刘志华杨谦
- 关键词：球毛壳菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因克隆转基因酵母
- 病原菌细胞壁诱导下球毛壳菌葡聚糖酶活测定及抑菌试验被引量：7
- 2010年
- 通过对峙培养试验,研究球毛壳菌对稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌及核盘菌4种植物病原菌生长的抑制作用,结果表明,球毛壳菌对稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌生长抑制作用更明显。在6种植物病原真菌细胞壁诱导下,球毛壳菌可产生β-1,3-葡聚糖酶,但是产酶规律不同。在稻瘟病菌、立枯丝核菌和尖孢镰刀菌细胞壁诱导下,β-1,3-葡聚糖酶活要明显高于杨树烂皮病菌、核盘菌和叶枯菌。其中,在稻瘟病菌细胞壁诱导11 d后,酶活达到最高,为0.61 U;而杨树烂皮病菌和叶枯菌细胞壁的诱导产酶效果最差。球毛壳菌可作为生物防治真菌。
- 陈刚杨谦刘志华彭鹏
- 关键词：球毛壳菌Β-1,3-葡聚糖酶
