余妍
- 作品数：24 被引量：43H指数：4
- 供职机构：遵义医学院珠海校区更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省教育厅自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究被引量：1
- 2008年
- 目的比较两种方法纯化rhIL-31的效果。方法将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coli.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。
- 余妍孙万邦刘曦
- 空肠弯曲菌PEB1重组蛋白的表达及单克隆抗体的制备
- 2009年
- 目的表达CJ PEB1重组蛋白,制备并鉴定CJ PEB1蛋白的单克隆抗体。方法诱导培养工程菌E.co-li BL21(DE3)表达CJ PEB1重组蛋白,以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原常规免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体。无菌取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,建立杂交瘤细胞株。将建株的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔诱生腹水制备抗体,应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测腹水中抗体的效价,应用Western-blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性。结果得到高纯度的CJ PEB1重组蛋白,蛋白质分子量大小与预计的理论值相符。获得两株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株杂交瘤细胞诱生的腹水,经间接ELISA法检测,腹水中的抗体效价分别为8×104和5×104,经双向琼脂扩散试验检测效价均为1∶16。通过Western-blot鉴定,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均与PEB1蛋白特异性地结合;其诱生的腹水与CJ菌液混合出现凝集现象,而与大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等菌液混合均未出现凝集现象。结论成功建立了两株稳定分泌抗CJ PEB1重组蛋白抗体的杂交瘤细胞株并制备了抗CJ PEB1蛋白的单克隆抗体,为今后研究多种检测CJ的方法创造了条件。
- 任思坡孙万邦杜联峰余妍黄俊琼罗军敏
- 关键词：空肠弯曲菌单克隆抗体杂交瘤细胞
- 空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究
- 2012年
- 目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。
- 杜联峰徐岗村孙万邦王宜峰王胜香罗军敏姚新生夏嫱杨瑞余妍
- 关键词：空肠弯曲菌免疫程序
- 空肠弯曲菌外膜蛋白亚单位脂质体佐剂疫苗的研制被引量：3
- 2006年
- 目的探索用脂质体包裹空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni,CJ)28-31KD(即PEB1、PEB2、PEB3、PEB4)外膜蛋白制备安全、稳定、有效的CJ亚单位脂质体佐剂疫苗。方法采用薄膜-超声-冻融法制备阴离子脂质体(AL)、阳离子脂质体(CL)CJ28-31KD外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,通过电子显微镜观察脂质体疫苗微粒的形态、测其粒径及分布,进行稳定性检测、无菌试验、热原质试验、疫苗的不良反应观察及包裹率检测等疫苗质量鉴定。结果1疫苗都为均匀乳白色混悬液,无分层和沉淀现象,阴离子脂质体疫苗颗粒形态呈球形,平均直径250nm,分布均匀,阳离子脂质体疫苗颗粒大,不规则;2两种疫苗的无菌试验及热原质试验均合格,不良反应观察结果均无明显不良反应;3阴、阳离子脂质体疫苗冻融前包裹率分别为32.1%、22.5%,冻融后分别是38.3%、28.4%。结论采用薄膜-超声-冻融法制备CJ亚单位佐剂疫苗是可行的;制备的疫苗是安全、稳定的;冻融法可以提高脂质体疫苗包裹率。
- 李成文孙万邦余妍冯胜军宋明英
- 关键词：弯曲杆菌
- 重组人白细胞介素-31表达条件的优化被引量：1
- 2008年
- 目的优化重组人白细胞介素-31(rhIL-31)的表达条件。方法以不同浓度IPTG、不同诱导时间、不同诱导温度对含有pET32a/rhIL-31的工程菌E.coliBL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果诱导时间为5h,IPTG浓度为1.5mmol/L,诱导温度为37℃时,rhIL-31的表达量最高。结论已初步优化了重组蛋白rhIL-31的表达条件。
- 余妍孙万邦黄俊琼曹雪梅郑静魏培
- 关键词：重组蛋白
- 空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗对小鼠免疫原性和保护性研究被引量：3
- 2012年
- 目的:研究空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗的免疫原性和保护性。方法:健康雄性昆明小鼠分为实验组和对照组。实验组设pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量和壳聚糖-pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量;对照组设空载体pcDNA3.1(-)(100μg/100μl)组和生理盐水(NS)组,各组均采用小鼠股四头肌注射法。在第0、10、20天免疫,于每次免疫后第10天采集各组小鼠血清,以间接ELISA法检测血清中特异性IgM、IgG的含量。分离各组小鼠脾淋巴细胞包被细胞培养板,以细胞ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平。设空肠弯曲菌液灌胃攻击免疫后小鼠,检测肠道分泌液细菌培养数量。结果:裸DNA组和壳聚糖-DNA组各组特异性IgG水平均高于两对照组(P<0.05)。裸DNA组和壳聚糖-DNA组小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平均高于两对照组(P<0.05),壳聚糖-DNA组高于裸DNA组(P<0.05)。肠道分泌液细菌培养结果细菌指数裸DNA组的低于两对照组;佐剂DNA组低于裸DNA组。结论:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性和保护作用,壳聚糖能增强pcDNA3.1(-)-peblA的免疫原性,有望成为空肠弯曲菌基因疫苗的候选佐剂。
- 徐岗村杜联峰孙万邦王宜峰王胜香罗军敏姚新生夏嫱杨瑞余妍
- 关键词：空肠弯曲菌壳聚糖免疫原性
- 医学免疫学形成性考核评价体系的实践被引量：7
- 2015年
- 分析目前遵义医学院医学免疫学课程的教学现状,提出形成性考核评价体系在医学免疫学课程教学过程中的改革措施,探索并在教学实践中融入形成性考核概念,构建形成性考核评价体系,对传统的教学方法、考核方式等方面进行改进,培养学生自我学习的能力、及时掌握学生的学习状况、提高学生分析和解决问题的能力和综合素质。
- 杜联峰余妍夏嫱金明哲廖业郭锦锦孙万邦
- 关键词：医学免疫学形成性考核教学实践
- 猪脾转移因子的制备和生物学活性研究被引量：2
- 2016年
- 目的:采用冻融-透析法制备猪脾转移因子,并对其理化性质以及免疫学生物学活性、生物安全性进行初步检定。方法:采用低温匀浆反复冻融新鲜的猪脾脏、无菌离心匀浆脾脏组织液,取上清液透析制备转移因子;以改良Lowry法分别检测多肽含量,并进行理化指标、无菌试验、热原质试验及其生物学活性检测。结果:冻融-透析法制备猪脾转移因子的理化性状符合《中国生物制品》的要求;无菌试验、热原质试验均为阴性;安全试验合格;淋巴细胞转化试验和E花环形成试验证实其具有刺激淋巴细胞增殖生物学活性。结论:成功制备了猪脾脏转移因子,其各项理化指标符合生物制品规程的要求,同时具有较好的非特异性免疫学的生物学活性。
- 杜联峰夏嫱余妍杨瑞郭锦锦孙万邦朱进军
- 关键词：理化性质
- 白细胞介素31在E.coli中的表达及活性鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建人IL-31原核表达载体,在大肠杆菌中表达,研究人IL-31对人表皮角化细胞分泌趋化因子MIP-3β的活性影响。方法大量培养pET28a(+)-hIL-31工程菌株,提取质粒,BamHI、HindⅢ双酶切,并将其连接到原核表达载体pET32a(+),通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达。用RT-PCR检测该目的蛋白对人表皮角化细胞HaCaT表达趋化因子MIP-3β的影响。结果原核表达质粒pET32a(+)-hIL-31构建正确,经双酶切、PCR和序列测定鉴定,序列正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达,纯化后的目的蛋白可刺激人表皮角化细胞表达MIP-3β。结论原核表达质粒pET32a(+)-hIL-31构建正确,纯化后的蛋白具有生物学活性,可刺激人表皮角化细胞表达趋化因子MIP-3,β为研究人IL-31的作用及其作用机制和制备单克隆抗体奠定了基础。
- 黄俊琼余妍杜联锋宋明英肖美艳孙万邦
- 关键词：E.COLI趋化因子
- 空肠弯曲菌亚单位脂质体佐剂疫苗诱导抗体产生规律的研究被引量：3
- 2005年
- 目的探索空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,CJ)亚单位脂质体佐剂疫苗诱导抗体产生的一般规律,为该疫苗的接种打下一定基础。方法将CJ疫苗经肌肉注射免疫新西兰家兔后动态收集血清,以ELISA间接法测其特异性IgGOD值。结果第一次免疫后10天左右,血清中即可检测到IgG,50天左右即达到高峰,此后逐渐降低,较高抗体水平可维持6个月左右。结论CJ亚单位疫苗在1月内接种3次最佳,6个月后应该加强免疫。
- 李成文孙万邦余妍李官成宋明英
- 关键词：空肠弯曲菌亚单位疫苗抗体
