魏飞力
- 作品数：71 被引量：314H指数：8
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程更多>>
- 20例HIV/AIDS患者耐药结果分析被引量：4
- 2009年
- 目的对高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)失败的HIV/AIDS患者,进行回顾性基因型耐药检测,了解HAART过程中HIV-1耐药位点的产生,分析基因型耐药检测在HAART过程中的必要性及指导意义。方法采用Versant HIV-1RNA3.0检测病毒载量;采用TriTEST CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP Reagent检测CD4+T淋巴细胞计数;采用Trugene HIV-1Genotyping Kit和OpenGene DNA系统进行基因型耐药检测;用Blast等分子生物学软件进行HIV-1亚型分析。结果20例患者中,17例保存有治疗前的血浆标本,其中1例在治疗前即存在非核苷类逆转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)耐药相关突变。20例患者均进行了治疗后耐药检测,其中3例未检出耐药相关突变。其他17例检出耐药相关突变,其中13例出现NNRTIs耐药相关突变;突变位点主要为K103N、Y188L、Y181C、V106M和G190A;11例显示有核苷类逆转录酶抑制剂(nucleoside/nucleotidereverse transcriptase inhibitors,NRTIs)耐药相关突变,突变位点主要为M184V、T/215Y/F、D67N、K70R以及K219E/Q;3例出现蛋白酶抑制剂(protease inhibitors,PIs)耐药相关突变,其中主突变为M46I/L、V82F/A,而次级突变中以M36I、L63P出现的频率最高。20例患者中B亚型9例(45%,9/20),CRF01_AE重组亚型5例(25%,5/20),CRF07_BC重组亚型5例(25%,5/20),CRF06_CPX1重组亚型1例(5%,1/20)。结论对治疗失败的患者进行基因型耐药检测可以帮助医生判断HAART失败的原因,并指导治疗方案的优化;亚型分析显示HIV-1病毒亚型的流行与感染途径之间存在明显的联系。
- 魏飞力吴昊张彤李庆刘志英王蕊焦艳梅陈德喜
- 关键词：HIV-1基因型耐药
- 中国健康人趋化性细胞因子CCL3L1的基因拷贝数及其与HIV-1易感性关系的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究中国健康人群趋化性细胞因子配体蛋白CCL3L1(CC chemokine ligand 3-like-1)的拷贝数及其与HIV易感性的关系。方法收集全血标本,提取基因组DNA,应用Realtime PCR法分析其CCL3L1的相对拷贝数。首先选取22例健康人和23例HIV慢性感染者计算其CCL3L1拷贝数,分析我国健康人群CCL3L1平均拷贝数情况,并分析HIV感染和CCL3L1拷贝数的关系;选取男性同性恋早期感染HIV阳性者29例和HIV阴性者57例,分析CCL3L1基因拷贝数与HIV易感性的关系。结果我国人群CCL3L1平均拷贝数约为3;HIV慢性感染者与健康人无显著性差异(P=0.880);同性恋HIV阴性者CCL3L1拷贝数显著高于同性恋HIV阳性者(P=0.000)。结论我国健康人CCL3L1平均拷贝数为3,CCL3L1拷贝数与HIV易感性关系密切。
- 柳雅立石英徐斌南萍计云霞魏飞力寇卜心陈德喜
- 关键词：CCL3L1基因拷贝数HIV-1易感性
- 荧光定量聚合酶链反应和直接测序法检测乙型肝炎病毒逆转录区耐药变异的比较被引量：3
- 2010年
- 目的 通过比较荧光定量聚合酶链反应（PCR）和直接测序法同步检测HBV逆转录区耐药变异情况,探讨直接测序法检测耐药在临床应用的可行性及其对制订挽救治疗方案的指导意义.方法 选择拉米夫定（LAM）和（或）阿德福韦（ADV）长期治疗出现应答不良的慢性乙型肝炎患者为研究对象.通过荧光定量PCR法和引入ntPCR技术的PCR产物直接测序法同步进行核苷类似物相关耐药的检测,分析基因变异耐药情况,比较两种方法检测结果.统计学分析采用SPSS14.0统计学软件处理.均数比较采用t检验,计量资料采用配对x2检验.结果 两种耐药检测方法在对LAM和（或）ADV相关耐药检测的一致性较高,差异无统计学意义.在对LAM与LAM和ADV联合/序贯治疗者中,与荧光定量PCR法比较,直接测序法检测的阳性率更高[分别为43.2%（10/42）对比38.6%（17/44）与66.7%（16/24）对比54.2%（13/24）],而漏检率更低[9.5%（2/21）,19.0%（4/21）;5.9%（1/17）,23.5%（4/17）],其敏感性可能略优于荧光定量PCR,但差异无统计学意义.高载量组与低载量组比较,差异明显（x2=5.18,P=0.023）,高载量组两种方法检测结果的一致性更好.而在低载量组,直接测序法具有更高的阳性检出率和更低的漏检率,其敏感性可能略优于荧光定量PCR,但差异无统计学意义.结论 直接测序法检测PCR产物,不仅特异性好,而且与荧光定量PCR耐药检测方法相比,其敏感性略高.此外,PCR产物经直接测序法检测可以获得HBV DNA rt区序列的全面信息.
- 金怡魏飞力马丽娜陈新月
- 关键词：核苷(酸)类似物测序法
- 佳息患联合施多宁治疗艾滋病病毒1型感染的免疫反应效果被引量：3
- 2002年
- 目的 观察非核苷类逆转录酶抑制剂施多宁与蛋白酶抑制剂佳息患联合用于治疗艾滋病病毒 1型 (HIV 1 )后的机体免疫反应。 方法 2 0例HIV 1慢性感染者 ,在治疗前后定期采集外周血 ,分离血浆及单个核细胞 ,检测病毒载量及T淋巴细胞亚群。 结果 治疗后 ,病人血浆中HIV 1核糖核酸 (RNA)含量降低 ,CD+ 4T淋巴细胞数量增多 ,其免疫系统活化指标趋向于正常。 结论 施多宁与佳息患联合治疗有效地抑制了HIV 1的复制 。
- 李莉魏飞力梅珊冯鑫姚均曹韵贞金侠
- 关键词：艾滋病病毒病毒载量CD4^+淋巴细胞
- 实时荧光定量PCR检测HIV-1逆转录酶活性方法的建立
- 2009年
- 目的体外模拟HIV-1的逆转录起始过程，建立实时荧光定量PCR测定HIV-1逆转录（RT）酶活性的方法。方法以人类基因组DNA为模板PCR扩增得到tRNAL^ys-3基因，在其5’端加入，17转录启动子，应用T7RNA聚合酶转录得到cRNA；以HIV-1感染性克隆为模板PCR扩增得到HIV的5’-LTR—PBS，将其克隆连接至pGEM-Teasy载体上，利用SP6RNA聚合酶转录得到SP6-5’-LTR—PBScRNA；分别应用两种标准RT酶（SuperScriptⅢ和HIV-1标准RT酶）催化体外逆转录反应合成相应cDNA。实时荧光定量PCR法检测底物cDNA模板量，进而得出逆转录酶的相对活性。结果成功获得长度为93bp的tRNALy。。引物和872bp的SP6-5’-LTR—PBSRNA模板。将SuperScriptⅢ和HIV-1标准RT酶分别按1：10、1：100、1：1000、1：10000比例稀释后催化逆转录反应，实时荧光定量PCR分析所得的逆转录产物cDNA，其循环阈值分别为13．9、18．3、20．9、24．9和20．4、25．5、28．7、32．5。结论成功模拟HIV-1逆转录的起始过程并建立了基于实时荧光定量PCR检测RT酶活性的新型方法，为临床治疗、新药筛选和耐药检测提供了参考指标。
- 柳雅立石英张洪海吴亚松魏飞力计云霞陈新月吴昊陈德喜
- 关键词：HIV-1聚合酶链反应
- 分泌型碱性磷酸酶示踪TA克隆真核表达载体及其构建方法
- 本发明公开了一种分泌型碱性磷酸酶示踪TA克隆真核表达载体，其是在真核表达启动子(CMV)下游和BGH多聚腺嘌呤转录终止子的上游插入碱性磷酸酶示踪TA克隆位点。本发明所述载体可利用培养基上清进行检测；可利用化学发光仪器进行...
- 陈德喜张洪海魏飞力李宁张玉林孙玉乔录新
- 文献传递
- 慢性肝病患者拉米夫定耐药毒株突变模式特征分析被引量：8
- 2017年
- 目的 探讨拉米夫定（LAM）耐药毒株突变模式及HBV S基因相关变异在不同疾病进展慢性肝病患者中的特征.方法 收集LAM耐药慢性肝病患者的血液标本,获得相应的HBV RT基因核苷酸序列,分析耐药突变位点、药物耐受和耐药相关HBV S基因变异特点及组间差异.结果 本研究纳入慢性乙型肝炎（CHB）患者47例,乙肝肝硬化（LC）和乙肝相关肝细胞癌（HCC）患者16例.M204I单点突变与L180M＋M204I/V为LAM耐药的慢性肝病患者最常见突变形式（35/63,55.56％）.LC/HCC组对三种以上核苷（酸）类似物同时耐药人数高于CHB组（62.50％ vs 34.04％,P =0.046）.LC/HCC组在HBV-S区检测到与免疫逃逸相关的HBsAg突变位点数多于CHB组（62.50％ vs 31.91％,P=0.031）,I126T/V与G145A（LCC/HCC,60％）、I126S/T与S117T（CHB,46.67％）为HBsAg逃逸突变的最常见形式.两组患者均检测到RT区变异伴随HBsAg终止密码子的突变（rtA181T/sW172＊和rtM204I/sW196＊）.结论 不同疾病进展慢性肝病患者LAM耐药毒株突变及相关HBV S基因变异特征存在差异,LC/HCC患者多重耐药和免疫逃逸毒株比例高于CHB患者.
- 欧阳雅博李庆魏飞力张玉林黄雁翔宋晨朝郭向华谢放王珊珊陈德喜
- 关键词：乙型慢性肝病拉米夫定耐药突变
- TAT-HBX-EGFP融合蛋白的表达、纯化及在小鼠肝脏内的跨膜分布
- 2008年
- 目的高效表达TAT—HBX—EGFP融合蛋白，研究其在小鼠肝脏内的分布。方法构建TAT-HBX—EGFP重组载体，IPTG诱导使其在BL21中大量表达；蛋白经Ni柱纯化后注射入小鼠体内，免疫荧光观察TAT，HBX—EGFP融合蛋白在小鼠肝脏的分布。结果TAT，HBX—EGFP在大肠埃希菌中获得高效表达；HBX蛋白可以在TAT的引导下进入小鼠肝脏。结论TAT引导肽可以将HBX蛋白引导至小鼠肝脏。
- 石英魏飞力柳雅立计云霞吴昊陈德喜周育森
- 甲型H1N1流感超敏感诊断方法的建立及优化
- 2010年
- 利用几种助沉剂和核酸纯化方法富集病毒RNA,建立甲型H1N1流感超敏感诊断方法。收集31份甲型H1N1流感确诊病人提取的病毒RNA,稀释至1000分之一倍后分别应用酵母tRNA、糖原、AcrylCarrier助沉剂和磁珠、硅胶颗粒和离心柱的9种组合进行病毒RNA的富集,富集后分别进行RealtimePCR检测。并对检测结果进行统计学分析。利用几种助沉剂和核酸纯化方法的组合时,发现磁珠+AcrylCarrier助沉剂方法是最佳的核酸富集方法,能够大大提高病毒核酸的检出效率。建立了甲型H1N1流感超敏感诊断方法,该方法能够大大提高甲型H1N1流感的检出率。
- 计云霞刘宁石英魏飞力魏征陈德喜
- 关键词：甲型H1N1流感
- 实时定量PCR体外检测单碱基损伤修复试剂盒
- 一种实时定量PCR体外检测单碱基损伤修复试剂盒，所述试剂盒的组成如下：10X检测缓冲液、5X低盐细胞裂解液、2X细胞核蛋白或线粒体蛋白提取液、20X检测底物、2XqPCR损伤修复缓冲液，所述修复缓冲液包括taq酶、dNT...
- 陈德喜李宁张洪海金荣华张玉林孙玉魏飞力石英
- 文献传递
