陈新文
- 作品数：99 被引量：275H指数：9
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 棉铃虫核多角体病毒泛素基因的克隆表达及抗体制备被引量：4
- 2005年
- 昆虫杆状病毒和痘病毒是目前已知唯一编码泛素基因的病毒。通过PCR方法,克隆了棉铃虫核多角体病毒(HaSNPV)泛素基因(Ubiquitin,Ubi)。序列分析表明,该基因编码区全长252bp,编码83个氨基酸残基,预计分子量为9.24kDa。将泛素基因克隆到原核表达载体pET28a上,构建重组质粒pETUbi,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达融合蛋白。用Histag抗体检测目的蛋白,Westenblot实验证明所表达的蛋白是带有Histag的重组融合蛋白。通过改变IPTG浓度和诱导时间对表达条件进行了优化。利用NI琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化目的蛋白,SDSPAGE鉴定为单一条带,同时用提纯蛋白制备了特异性抗体,为进一步的研究打下基础。
- 李京京姚青杨东叶余泽华陈新文
- 关键词：棉铃虫核多角体病毒泛素克隆原核表达抗血清
- 双重组棉铃虫病毒杀虫剂
- 陈新文
- 病毒杀虫剂由于具有杀虫效果好、对非靶生物十分安全等优点，是化学杀虫剂的理想替代品。该项成果对棉铃虫病毒杀虫剂进行了双重重组遗传改良，获得了缺失egt基因并分别在多角体蛋白基因启动子和p6.9基因启动子下表达蝎毒基因的两株...
- 关键词：
- 关键词：病毒杀虫剂棉铃虫化学农药
- 杆状病毒的分子生物学及分子进化研究
- 陈新文胡志红孙修炼王华林王汉中彭辉银金锋李枚JustM.VlakBasilM.Arif刘明富梁布锋王录明邓菲吴东罗保君刘岚卢玉蓉张双民
- 首次报道了棉铃虫病毒HaSNPV基因组131403bp和HzSNPV基因组的全序列97%同源性揭示了两者可能为同一种病毒的不同变种。发明了“基因对比排列图”（GeneParityPlot）研究方法，首次揭示了NPV基因组...
- 关键词：
- 关键词：杆状病毒分子生物学分子进化
- 杆状病毒作为基因治疗载体的研究进展被引量：9
- 2002年
- 杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒 .近来的研究表明杆状病毒能进入哺乳动物细胞 ,但病毒自身不能在哺乳动物细胞中复制 ,感染也不引起细胞病变 .另外 ,已经证明杆状病毒能在体外或体内高效地转导许多类型哺乳动物细胞 ,并且能得到固定表达细胞系 ,显示了杆状病毒作为基因治疗载体有着良好的应用前景 .
- 梁昌镛胡志红陈新文
- 关键词：杆状病毒基因治疗载体转导
- 杆状病毒介导的GFP转染与退变的兔椎间盘髓核细胞
- 2005年
- 目的:检测杆状病毒转染正常与退变的椎间盘髓核细胞的效率以及杆状病毒介导的GFP基因(Ac/CMV/GFP)在正常与退变细胞中的表达水平。方法:取新西兰大白兔的髓核细胞进行离体培养,第1组:健康幼兔;第2组:椎间盘退变模型兔;第3组:椎间盘发生自然退变的成年兔。以200MOI杆状病毒介导的绿色荧光蛋白(GFP)转染离体培养的细胞,于第48h采用流式细胞仪检测转染效率,同时采用HPIAS2000图像分析软件半定量分析外源性GFP基因的表达水平。结果:3组细胞被转染的百分率分别为84.4±3.4,82.9±5.7,81.8±5.5(P>0.05)。外源性基因表达荧光蛋白的光密度值分别为0.0054±0.0029,0.0052±0.0032,0.0056±0.0031(P>0.05)。结论:杆状病毒转染椎间盘髓核细胞的效率与椎间盘退变程度无关,杆状病毒介导的外源性基因能在正常与退变的髓核细胞中高水平的表达。
- 刘小云宋建华李康华王锡阳梁昌镛陈新文
- 关键词：椎间盘退变髓核细胞
- 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒组织蛋白酶基因的序列分析和进化研究被引量：7
- 2001年
- 对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (HaSNPV)的组织蛋白酶 (ν cath)基因进行了序列分析 ,此基因编码区长 10 98bp ,预计编码一个 36 6个氨基酸的蛋白产物。序列分析表明 ,HaSNPV的V CATH蛋白与其它杆状病毒的同源蛋白具有相似的保守结构并保留有相同的酶活性位点 ,根据已知的杆状病毒组织蛋白酶序列构建了ν cath基因的进化树 ,发现HaSNPV的ν cath位于NPV组中一个单独的分枝 ,结合ν cath基因在棉铃虫病毒基因组中的位置与其它NPV有较大不同 ,推测HaSNPV的ν cath基因可能拥有特殊的进化历程。
- 刘岚陈新文孙修炼Hilary LauzonJust M. VlakBasil M. Arif胡志红
- 关键词：棉铃虫核苷酸序列分析进化树
- 丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化突变体的研究
- HCV基因组编码两个包膜糖蛋白:E1和E2。近来有研究表明糖基化位点Asn-X-Thr/Ser和内质网分子伴侣之间的相互作用对于病毒蛋白的正确折叠,装配以及成熟都起到了很关键的作用。另外,也有研究表明HCV E1第四个糖...
- 万崎章晚联陈新文
- 文献传递
- 中国棉玲虫重组病毒
- 本发明是一种对野生型病毒进行遗传改良的中国棉铃虫重组病毒，其基因组中缺失了egt基因即蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因，在缺失egt基因的位点处，插入由中国棉铃虫病毒多角体蛋白基因启动子控制的昆虫特异性神经毒素AaI...
- 陈新文胡志红J.M.福拉克(J.M.Valk)孙修炼
- 文献传递
- 棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒穿梭表达载体及制备方法
- 本发明公开了一种棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒穿梭表达载体及构建方法，将含有低拷贝数的细菌F复制子、卡那霉素抗性基因和β半乳糖苷酶基因、作为细菌转位子插入位点的短片段插入到lacZα基因N－末端的8.5kb的DNA片段置换...
- 王汉中陈新文胡志红
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化作用的研究被引量：1
- 2003年
- 本研究构建丙型肝炎病毒(HCV)糖蛋白E2的N-糖基化位点定点突变体。采用高保真性的PfxDNA聚合酶设计两对引物分别引入两个突变位点通过PCR体外定点突变使E2第535、583位核苷酸由A突变为T从而使AAC编码的天冬酰氨突变为TAC编码的酪氨酸,使得N-糖苷化位点NNT、NST突变为YNT、YST。结果得到两个单位点以及一个双位点突变体,并将突变型E2连接到真核表达载体pcDNA3.1-/Myc-HisB上。成功获得的3个HCVE2糖蛋白糖基化位点定点突变体,为进一步进行HCVE2糖蛋白糖基化位点与分子伴侣之间的相互关系以及突变体对机体的免疫功能的影响的研究奠定了基础。
- 万崎章晓联陈新文
- 关键词：丙型肝炎病毒突变体
