郭小琴
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金公益性行业科研专项更多>>
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- 滑液支原体烯醇化酶基因的克隆表达及其表达产物活性的测定被引量：3
- 2013年
- 参照GenBank中滑液支原体P53株序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得滑液支原体WVU1853菌株烯醇化酶基因并将其克隆至pGEM-T Easy,测序并完成点突变后构建重组表达质粒pET-28a-eno,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后纯化表达产物并测定其酶促活性。结果显示,表达产物具有水解酶活性,最适pH为7.5,最适温度为50℃,Mg2+可作为酶活性辅因子,相同浓度的Zn2+可提高酶活性,而Mn3+、Al 2+、Ni 2+、Ba2+和Li+对酶活性均有不同程度的抑制作用;其米氏常数(km)和最大反应速率(Vmax)分别为1.1×10-3 mol/L和0.739μmol/(L.min)。
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- 关键词：滑液支原体克隆酶活性
- 传染性支气管炎病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：1
- 2012年
- 为建立一种快速、灵敏、特异的检测传染性支气管炎病毒(IBV)的逆转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP),针对IBV毒株保守性N蛋白设计4对LAMP特异性引物,以RNA为模板,在Bst DNA聚合酶作用下恒温反应,对不同型IBV、新城疫病毒、禽流感病毒和鸡滑液支原体进行特异性分析,并与普通RT-PCR进行灵敏性比较。结果表明RT-LAMP法在30min就能够特异性鉴定出不同型别的IBV,且灵敏度是普通RT-PCR的107倍,反应结果可眼观判断。本研究建立的IBV RT-LAMP检测方法具备耗时短、灵敏度高、简单易行等特点,在实验室快速诊断中是一种检测IBV的有效方法。
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- 关键词：传染性支气管炎病毒
- 滑液支原体烯醇化酶的生物学功能研究
- 滑液支原体（Mycoplasma synoviae，MS）是禽类的主要致病性支原体之一，其主要引起鸡和火鸡的慢性呼吸道感染，亦可导致鸡的传染性滑膜炎及腱鞘炎。虽然滑液支原体感染一般不会直接导致禽类的死亡，但其所导致的机体...
- 郭小琴
- 关键词：滑液支原体烯醇化酶生物学特性
- 文献传递
- 滑液支原体二氢硫辛酰胺乙酰转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
- 2015年
- 为制备滑液支原体(MS)的单克隆抗体,将滑液支原体WVU 1853株全菌免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,在间接ELISA检测的基础上经有限稀释法克隆化,成功筛选出3株分泌抗MS WVU 1853株单克隆抗体的杂交瘤细胞融合株1B3、1E7及4E8。ELISA和Western-blot试验表明,这3株单克隆抗体可特异性地与滑液支原体WVU 1853株的32ku蛋白质结合,而与禽的其他几种常见病原微生物无任何反应。亚类鉴定结果表明,这3株单克隆抗体重链均为IgG1,轻链均为λ型。质谱分析结果表明,所获得的3株单克隆抗体均为抗滑液支原体二氢硫辛酰胺乙酰转移酶单克隆抗体。
- 郭小琴包世俊邢小勇胡国明薛慧文温峰琴胡永浩项海涛
- 关键词：滑液支原体单克隆抗体杂交瘤
- 鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定被引量：7
- 2013年
- 为了探明醛缩酶在支原体中的定位,根据已发表的鸡毒支原体醛缩酶(fba)基因序列设计特异性的引物,以鸡毒支原体Rlow株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增鸡毒支原体醛缩酶fba基因,将fba克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析。结果表明,fba基因全长873bp,编码290个氨基酸。将构建的重组表达质粒pET28a-fba转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白rMGfba,大小约为33ku。纯化蛋白并对蛋白进行酶活性检测,结果显示该酶在体外具有与阳性对照醛缩酶相同的催化功能。用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,提取鸡毒支原体膜蛋白,Western-blot分析结果显示FBA多抗可与疏水性膜蛋白特异性结合,说明FBA位于鸡毒支原体膜表面。
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- 关键词：鸡毒支原体醛缩酶原核表达酶活性
