赵祥平
- 作品数：60 被引量：162H指数：8
- 供职机构：天津出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：天津市科技支撑计划国家质检总局科技计划项目天津市滨海新区科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>
- 一种鉴别尼帕病毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立
- 2016年
- 为建立一种快速、敏感和特异地鉴别尼帕病毒（NiV）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）的检测方法,本试验以NiV M基因和HP-PRRSVnsp2基因为靶序列,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、定量线性范围、敏感性和重复性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因和HP-PRRSVnsp2基因的RNA标准对照（NiV-M-RNA和HP-PRRSV-nsp2-RNA）,线性范围分别为4.6×101-4.6×107和4.1×101-4.1×108拷贝/μL;最低检出限分别为46和4.1拷贝;该方法组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示出良好的可重复性;该方法仅对NiV和HP-PRRSV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒（CSFV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪流感病毒（SIV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪圆环病毒2型（PCV2）发生交叉反应。用该方法对236份猪实际样品进行NiV和HP-PRRSV核酸检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,8份样本的HP-PRRSV检测结果为阳性。本研究建立的方法为猪实际样本中NiV和HP-PRRSV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。
- 王建华董志珍王玉玲肖妍赵祥平
- 关键词：尼帕病毒高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TAQMAN-MGB探针
- 驽巴贝斯虫病巢式PCR检测方法的研究被引量：6
- 2009年
- 针对驽巴贝斯虫(Babesia caballi)rap-1基因序列设计内外两对引物,从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA,采取两次扩增的方法,获得222bp基因片段,经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测,准确率为100%。
- 赵祥平王玉玲侯艳梅
- 关键词：驽巴贝斯虫病巢式PCR
- 非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：19
- 2009年
- 非洲猪瘟病毒p54蛋白在病毒感染与增殖过程中起重要作用。根据p54基因的核苷酸序列,设计并合成引物和用6-carboxy-fluorescein(6-FAM)和tetramethyl-6-carboxyrhodamine(TAMRA)荧光素标记TaqMan双水解探针,以构建的含p54基因的pET-p54重组质粒作为阳性模板,建立了ASFV检测的荧光定量PCR方法(已申请专利,专利号200910067620.6)。结果表明,所建立的方法与含p54基因的模板质粒数呈现很好的相关性(R2=0.991),可检测出低于15个拷贝/μL的样品,灵敏度和特异性高,可作为出入境检验检疫部门对非洲猪瘟病毒的快速检测方法。
- 董志珍侯艳梅赵祥平李琳肖妍王玉玲黄金海霍蕾
- 关键词：非洲猪瘟病毒荧光定量PCR
- 高效液相色谱-串联质谱法检测动物血清、尿液中硝基呋喃代谢物残留
- 本试验旨在建立动物血清、尿液样品中硝基呋喃代谢物的高效液相色谱-串联质谱检测方法.样品在酸性条件下与2-硝基苯甲醛发生衍生化反应,经乙酸乙酯提取,采用液相色谱-串联质谱仪器进行检测.结果表明:呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢...
- 王飞李淑静杨爽赵祥平
- 关键词：动物源性食品高效液相色谱质谱分析
- 牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的原核表达及产物的抗原性分析被引量：3
- 2006年
- 采用PCR方法,以牛疱疹病毒Ⅰ型基因组DNA为模板扩增gB基因,克隆至pGEM-T载体。将以克隆质粒pGEM-T-gB为模板扩增的gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段分别连接至原核表达载体pET32a。获得的重组质粒分别转化感受态细胞BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。经SDS-PAGE鉴定,gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中以融合蛋白形式获得了表达。以磁化组氨酸蛋白纯化系统对融合蛋白纯化后,Western-blotting和ELISA分析结果表明,这些融合蛋白均与BHV-1标准阳性血清反应,可作为抗原用于牛传染性鼻气管炎ELISA检测方法的建立。
- 吴春涛王建华侯艳梅赵祥平霍蕾董志珍
- 关键词：GB基因原核表达纯化抗原性分析
- 非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制被引量：4
- 2012年
- 针对非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。
- 董志珍赵祥平张霞肖妍栾慎顺
- 关键词：非洲猪瘟病毒荧光定量PCR试剂盒
- 从我国进口奶牛及其后代中发现牛免疫缺陷病毒（BIV）的自发感染被引量：5
- 1994年
- 牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）在牛群中的自发感染，已先后在一些国家发现。本文首次报道了ＢＩＶ在我国进口奶牛及其后代中的存在。当以ＴｒｐＥ－ｐ２６融合蛋白做抗原，应用蛋白质印迹法对我国近年进口牛及其后代进行检测时，在所检测的６８９份样品中，检出阳性样品１６份，阳性率为２．３２％。这一结果已经ＴｒｐＥ－ｇｐ４５做抗原的蛋白质印迹法、反转录酶序列（ＲＴ）的ＰＣＲ反应及其产物的狭缝杂交所确证。检测为阳性的牛已被隔离，有关病毒的分离鉴定和基因组功能片段的克隆等工作正在进行中。
- 耿运琪纪永刚陈荷新刘淑红杨丽珠梁栋马明陈启民秦贞奎赵祥平侯艳梅曾毅
- 关键词：牛免疫缺陷病毒血清学检测奶牛
- 检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用被引量：13
- 2012年
- 用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。
- 董志珍肖妍赵祥平栾慎顺张霞
- 关键词：单克隆抗体非洲猪瘟
- 施马伦贝格病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立
- 2014年
- 目的 建立施马伦贝格病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）快速检测方法.方法 从GenBank数据库中获得施马伦贝格病毒S基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorerV4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物,建立施马伦贝格病毒等温扩增快速检测方法.结果 RT-LAMP检测方法对施马伦贝格病毒RNA的灵敏度达到10个拷贝,所用引物对赤羽病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病毒、水泡性口炎病毒及牛病毒性腹泻病毒无特异性扩增,表现出良好特异性.结论 建立的施马伦贝格病毒等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强,为快速检测施马伦贝格病毒提供了新方法.
- 王乃福吴冬雪张霞董志珍王玉玲王建华赵祥平
- 关键词：施马伦贝格病毒核酸扩增技术
- 传染性羊痒病抗性基因分型方法的建立
- 2010年
- 根据GenBank中登录的绵羊朊蛋白编码基因PRNP序列,设计并合成了可用于单核苷酸多态性(SNP)快速分析的3对引物和7条分别标记了FAM和VIC荧光染料的MGB探针,建立了一种利用荧光定量PCR扩增反应对羊痒病抗性基因进行筛选的方法。结果表明,设计的引物及探针具有特异性和高效扩增性,能够用于PRNP羊痒病抗性基因的快速分型。借助该方法可建立一整套完善的预警监测体系来预防该病的发生,也可用于羊痒病的常规实验室诊断。
- 董志珍赵祥平侯艳梅李琳肖妍蔡国瑞栾慎顺霍蕾
- 关键词：朊蛋白基因基因分型
