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RORα高表达对人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响被引量：6: 2016年; 目的观察RORα高表达对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法构建高表达RORα人胃癌MGC803细胞。Real-time PCR或RT-PCR和Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3 m RNA和蛋白表达。MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验检测RORα高表达对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。结果 RORα高表达MGC803细胞RORαm RNA和蛋白表达显著上调。在48、72与96 h,RORα高表达细胞的增殖活性明显低于对照组和空载体组(P<0.05)。RORα高表达G_2/M期细胞明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。高表达组细胞的迁移距离较对照组与空载体组明显减少(P<0.05)。高表达组穿膜细胞数较对照组与空载体组明显减少(P<0.05)。RORα高表达可明显下调MMP-9和上调TIMP3m RNA与蛋白。结论成功构建RORα高表达MGC803细胞,RORα高表达可抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,将细胞阻滞于G_2/M期,其机制可能与下调MMP-9和上调TIMP3有关。; 赵晓红刘芳向姝霖夏红曾希苏波凌晖苏琦; 关键词：人胃癌MGC803细胞增殖

RORα高表达抑制人胃癌MGC803细胞Wnt／β-catenin信号通路靶基因表达被引量：13: 2016年; 该文探讨了RORα(retinoid acid receptor related orphan receptorα)高表达对人胃癌MGC803细胞Wnt/β-catenin信号通路靶基因的作用。采用MTT检测了MGC803细胞增殖。采用RT-PCR、Western blot与免疫共沉淀检测了Wnt/β-catenin信号通路相关分子与靶基因表达。荧光素酶报告基因方法检测c-Myc基因启动子活性。MTT结果显示,RORα高表达人胃癌MGC803细胞的增殖能力较对照组明显减弱(P<0.05)。RT-PCR与Western blot结果显示,RORα高表达组Wnt1m RNA与蛋白质水平较对照组下调(P<0.05),而β-catenin m RNA与蛋白质水平无差异(P>0.05)。免疫共沉淀结果显示,RORα高表达组RORα与β-catenin结合明显增加(P<0.05)。RORα高表达可显著下调核内β-catenin水平(P<0.05),同时可显著下调TCF-4(T cell factor-4)蛋白质水平(P<0.05)。RORα高表达可显著下调Axin、c-Myc、c-Jun m RNA与蛋白质水平(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,RORα高表达c-Myc启动子活性明显降低(P<0.05)。以上结果表明,RORα高表达可通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关分子基因表达来抑制人胃癌细胞增殖。; 苏坚赵晓红刘芳夏红苏波曾希凌晖苏琦; 关键词：人胃癌MGC803细胞增殖 WNT/Β-CATENIN信号通路靶基因

DADS上调RORα抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭被引量：3: 2016年; 目的研究二烯丙基二硫(DADS)是否通过上调维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达抑制人胃癌MGC803细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭。方法实验组分为6组,对照组,空载体组,RORα干扰组(miRRORα),DADS组,空载体联合DADS组,miR-RORα联合DADS组。Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3蛋白表达。MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验分别检测细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭的改变。结果 DADS处理细胞24 h后,与对照组和空载体组比较,DADS上调RORα和TIMP3、下调MMP-9蛋白表达。干扰组较对照组与空载体组RORα表达明显下调。与DADS处理组比较,干扰RORα表达上调MMP-9、下调TIMP3蛋白表达。MTT实验显示,DADS抑制MGC803细胞增殖,而干扰RORα表达促进增殖。流式细胞术显示,DADS诱导G2/M期阻滞,下调RORα削弱其作用。迁移实验显示,DADS处理组迁移距离明显减少。RORα干扰组迁移距离明显高于对照组和空载体组。侵袭实验显示,DADS处理组较对照组和空载体组穿膜细胞明显减少。干扰组穿膜细胞明显多于对照组和空载体组。干扰RORα表达降低DADS对细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 DADS上调TIMP3表达,下调MMP-9表达,抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,其作用机制与上调RORα表达有关。; 苏波向姝霖苏坚赵晓红夏红刘芳凌晖苏琦; 关键词：二烯丙基二硫人胃癌细胞增殖

沉默RORα体内外对人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响被引量：2: 2017年; 目的在构建RORα沉默人胃癌MGC803细胞的基础上,探讨沉默RORα对MGC803细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 4周龄雄性裸鼠,分为MGC803细胞组与RORα沉默组,每组5只。相差显微镜观察RORα沉默MGC803细胞形态的改变。RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测EMT相关分子表达。裸鼠实验检测沉默RORα对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,沉默RORα细胞大小与形状差异更明显,纤维母细胞样长梭形细胞增多,异型性更为显著。Western blot显示,沉默RORα可明显上调MGC803细胞Snail蛋白表达(P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测显示,沉默RORα可上调Snail与Vimentin和下调E-cadherin mRNA与蛋白表达。免疫荧光显示,RORα沉默细胞Snail与Vimentin阳性表达较MGC803细胞组明显增强,而E-cadherin阳性表达显著减弱。裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快(P<0.05),RORα沉默组移植瘤体重较对照组增加14.12%(P<0.05)。RORα沉默组移植瘤组织的Ki-67、CD34与Vimentin阳性表达较MGC803细胞组明显增加,而E-cadherin阳性表达明显降低。结论沉默RORα可体内外促进人胃癌MGC803细胞EMT。; 刘芳赵晓红夏红苏坚曾希苏波凌晖苏琦; 关键词：人胃癌MGC803细胞 SNAIL VIMENTIN

DADS上调RORα抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭作用: 目的：通过构建高表达维甲酸相关孤核受体α（Retinoid-related orphan receptor A, RORα）人胃癌MGC803细胞，观察RORα表达在二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DA...; 赵晓红; 关键词：胃癌二烯丙基二硫; 文献传递

沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭: 2016年; 目的:在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法:软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 m RNA与蛋白表达。结果:集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P<0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19)mm明显高于对照组(1.32±0.14)mm和空载体组(1.29±0.17)mm(P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P<0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 m RNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 m RNA与蛋白。结论:沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。; 刘芳赵晓红夏红苏坚曾希苏波凌晖苏琦; 关键词：人胃癌MGC803细胞 WNT通路

DADS上调RORa抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭作用: 目的：通过构建高表达维甲酸相关孤核受体α（Retinoid-related orphan receptorA, RORα）人胃癌MGC803细胞，观察RORα表达在二烯丙基二硫（diallyldisulfide，DADS...; 赵晓红; 关键词：MGC803细胞二烯丙基二硫增殖迁移; 文献传递

二烯丙基二硫上调RORα抑制人胃癌细胞Wnt/β-catenin通路靶基因被引量：2: 2017年; 目的观察DADS上调RORα对人胃癌MGC803细胞Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达的影响。方法RT-PCR、Western blot与免疫共沉淀检测Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达。荧光素酶报告基因检测c-Myc基因启动子活性。结果 RT-PCR与Western blot显示,DADS处理后各组RORαmRNA与蛋白表达上调(P<0.05),而沉默RORα较对照组明显下调(P<0.05)。DADS处理后各组Wnt1 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05)。沉默RORα较对照组Wnt1 mRNA与蛋白明显上调(P<0.05)。DADS处理前后各组β-catenin mRNA与蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。免疫共沉淀显示,DADS处理组RORα与β-catenin结合明显增加,而沉默组与β-catenin结合明显减少(P<0.05)。DADS可明显下调核内β-catenin与p-β-catenin(P<0.05),而沉默RORα可明显上调β-catenin与p-β-catenin(P<0.05)。同时,DADS可明显下调TCF-4表达(P<0.05),而沉默RORα可明显上调TCF-4(P<0.05)。DADS可明显下调Axin、c-Myc、c-Jun mRNA与蛋白表达(P<0.05),而沉默RORα作用相反(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示,DADS处理后,各组c-Myc启动子活性明显低于处理前(P<0.05)。沉默组c-Myc启动子活性明显高于对照组(P<0.05)。结论 DADS可上调RORα抑制Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达。; 苏坚赵晓红向姝霖刘芳夏红苏波凌晖曾希苏琦; 关键词：二烯丙基二硫人胃癌细胞靶基因启动子活性

稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定被引量：3: 2016年; 目的构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的c DNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORαc DNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pc DNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pc DNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pc DNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的c DNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORαmRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pc DNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。; 赵晓红向姝霖刘芳夏红曾希苏波凌晖苏琦; 关键词：真核表达转染人胃癌MGC803细胞

RORα高表达对二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响被引量：4: 2017年; 背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抗肿瘤的作用。该研究在DADS上调人胃癌MGC803细胞RORα的基础上,观察DADS与RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影响。方法:相差显微镜观察MGC803细胞形态的影响。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT相关分子表达。裸鼠实验检测对移植瘤生长的影响。结果:相差显微镜显示,DADS组与RORα高表达组细胞大小较MGC803细胞一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞少见,异型性降低。RORα高表达加DADS后,上述改变更为明显。Western blot检测结果显示,DADS组与RORα高表达组Snail蛋白表达明显下调,DADS+RORα高表达组更明显(P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测显示,DADS与RORα高表达可明显下调Vimentin和上调E-cadherin m RNA与蛋白表达,DADS+RORα高表达组更为显著(P<0.05)。免疫荧光显示,DADS组与RORα高表达组细胞Snail与Vimentin表达较对照组明显减弱和E-cadherin表达显著增强,DADS+RORα高表达组更为显著,与Western blot结果一致。裸鼠实验显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),并且,移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率分别为15.07%、26.55%与49.27%(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组较对照组的Ki-67、CD34与Vimentin表达均明显降低,E-cadherin表达明显增强。结论:RORα高表达可增强DADS体内外抑制人胃癌细胞EMT的作用。; 夏红苏坚赵晓红刘芳苏波凌晖曾希苏琦; 关键词：二烯丙基二硫人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化 SNAIL VIMENTIN

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赵晓红

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