许兢
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 费氏中华根瘤菌15142中硫代谢相关基因cysH和cysE的研究
- 硫和氮都是生物体生长、发育所必需的元素，两者相互作用，共同完成蛋白质的合成与代谢。硫酸盐需要通过同化途径还原后，才能被生物体转化为自身的物质。
在细菌、植物、动物中，3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸(PAPS)是多种...
- 许兢
- 关键词：费氏中华根瘤菌突变体
- 文献传递
- 费氏中华根瘤菌HN01的putA基因克隆
- 2010年
- 从快生型大豆根瘤菌费氏中华根瘤菌HN01的基因组文库中克隆到一个putA(脯氨酸脱氢酶)基因,该基因与已报道的苜蓿中华根瘤菌1021中putA基因在核苷酸和氨基酸水平上分别有82%和86%相似性.利用自杀性质粒pK18mob构建含有putA基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合导入出发菌株HN01中,获得正向插入的极性突变体GXHNPA和反向插入非极性突变体GXHNPB.将putA基因完整的ORF连接到广宿主载体pLAFRJ上,获得用于互补的质粒pGXHN37,通过三亲接合,将pLAFRJ导入GXHNPA和GXHNPB获得互补菌株GXHNPHA和GXHNPHB.对出发菌株、突变菌株、互补菌株进一步的研究发现,以脯氨酸为唯一C、N源的MM培养基中培养时,突变体均不能生长,互补菌株和野生型HN01没有差异,而在完全培养基YMB中培养时,突变菌株生长不受影响.植株实验发现,突变体均能有效结瘤,但是固氮酶活与出发菌株相比有所下降,结瘤时间延迟1d,竞争结瘤能力下降,而互补菌株与野生型HN01没有明显的差异.
- 唐美琼申佩弘许兢蒋承建陈钢武波
- 关键词：克隆突变体结瘤
- 费氏中华根瘤菌15142的cysDN基因克隆及其相关功能被引量：3
- 2011年
- 为确定cysDN操纵子的功能及对根瘤菌结瘤的影响，通过三亲本接合，将质粒转座子pTnMod-RKm′随机插入费氏中华根瘤菌15142中，建成随机插入突变体库，随后通过含有不同硫源的MM培养基的筛选得到一株不能利用硫酸盐但能够利用半胱氨酸的突变体. 进一步克隆和测序分析后发现该操纵子与已报道的Sinorhizobium sp. strain BR816的cysDN在核苷酸水平上有92%的相似性，在氨基酸水平上有96%的相似性. 用自杀质粒pK18mob分别构建含有cysD部分片段和cysN部分片段的重组质粒，通过三亲本接合导入出发菌株15142中，经过同源单交换，分别获得cysD的pK18mob正反向插入突变株cysDF/15142 以及cysDR/15142和cysN的pK18mob正反向插入突变株cysNF/15142与cysNR/15142. 用广谱宿主质粒pLAFRJ载体连接完整操纵子cysDN构建互补质粒cysDN＋pLAFRJ，将该质粒通过三亲本接合导入突变株中，获得互补菌株. 用不同硫源的液体MM培养基培养，发现互补菌株能够补回突变菌株不能利用硫酸盐作为唯一硫源的缺陷，说明cysDN操纵子确实与硫酸盐同化途径有关；植株试验表明突变株比出发菌株推迟结瘤1-2 d，固氮酶活也比出发菌株稍低；竞争结瘤试验表明突变菌株占瘤率较差，但在平均瘤数、平均瘤重、平均植株干重上则无差异. 图3 表4
- 张武田润申佩弘蒋承建许兢李俊芳武波
- 关键词：费氏中华根瘤菌基因克隆
- 费氏中华根瘤菌lrp基因的克隆、突变与功能
- 2008年
- 通过分子克隆技术,从费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01基因组文库中克隆到一个lrp基因.该基因与已报道的苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)1021的lrp基因在核苷酸水平上有89%相似性,在氨基酸水平上有99%相似性.利用自杀质粒pK18mob构建含有lrp基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合后导入原始菌株HN01中,经过同源单交换,获得发生正向插入突变的突变株GXHNLTA和反向插入突变的突变株GXHNLTB.将lrp基因ORF连接到载体pLAFR3上,获得用于互补的质粒pGXHNL100,将该质粒通过三亲本接合导入突变株中,获得互补株GXHNWA、GXHNWB.对野生型菌株、突变株、互补株进一步研究发现,在以脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸为唯一碳、氮源的MM培养基中培养时,突变体GXHNLTA、GXHNLTB的生长均滞后于出发菌株HN01.植株试验表明,突变菌株GXHNLTA、GXHNLB比野生菌株HN01开始结瘤的时间提前1d,在结瘤效率、单株瘤数、瘤重、固氮酶活性方面并无显著差别.
- 陈钢唐美琼孙云许兢武波
- 关键词：SINORHIZOBIUMFREDIILRP基因突变
- 费氏中华根瘤菌HN01中putA基因的研究
- 本工作的主要目的是探索快生型大豆根瘤菌HN01(Sinorhizobium fredii HN01)中脯氨酸脱氢酶编码基因putA在竞争结瘤的分子机理,为进一步研究结瘤固氮机理打下基础。采用PCR扩增的方法,从本实验室已...
- 唐美琼许兢武波
- 文献传递
