花群义
- 作品数：219 被引量：775H指数：16
- 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2010年
- 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。
- 阮周曦花群义杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎
- 关键词：蓝舌病病毒水疱性口炎病毒赤羽病病毒多重RT-PCR
- 多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分被引量：45
- 2009年
- 根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测,数据显示两者检测结果符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本试验方法不需电泳、酶切和测序,即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分,检测效率提高近3倍;灵敏度更高,比国标方法灵敏10倍;适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。
- 曾少灵秦智锋阮周曦花群义卢体康吕建强陈书琨曹琛福张彩虹孙洁陈兵吴绍精
- 关键词：细胞色素B基因
- 鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。
- 詹爱军王新卫陈书琨孙洁陈兵阮周曦花群义
- 关键词：液相芯片
- 家蚕微孢子虫诊断方法研究进展被引量：2
- 2016年
- 自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学检测和分子生物学检测方面的研究进行了综述,并且展望未来发展趋势,以期对家蚕微粒子病进行更快速、准确的诊断与防治。
- 曹琛福林彦星吕建强花群义
- 关键词：家蚕微孢子虫
- 禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐,耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷,为了提高检测效率和通关速度,借助胶体金半定量检测技术,以禽流感HI抗体滴度24为临界值,研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A/Chicken/Hongkong/SZ-HI/1997(H5N1)病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌,IPTG诱导表达4h后,SDS-PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料,采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡,确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强,与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致,检测HI抗体滴度为24鸡血清时结果符合率达94%。
- 陶虹秦智锋卢体康储成群曾少灵林庆燕花群义吕建强詹爱军陈书琨孙洁曹琛福阮周曦陈兵毕英佐
- 关键词：禽流感抗体检测
- 小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究被引量：2
- 2014年
- 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。
- 刘晓慧杨云庆叶玲玲祝贺吕建强赵文华颜红尹尚莲花群义杨仕标张光培周晓黎董俊艾军
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体竞争ELISA
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2004年
- 目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳性克隆。经核苷酸序列分析 ,并与Genbank中的VSV编码核衣壳蛋白N基因序列进行比较。结果 该序列与VSVNewJersey型的 0 9/ 82 HD B株同源性最高 ,核苷酸和推测氨基酸的同源性分别为 98.9%和 98.8% ,有 13个核苷酸差异 ,伴有 5个氨基酸改变 ,第 72位的酪氨酸变为组氨酸 ,第 89位的缬氨酸变为异亮氨酸 ,第 183位的天冬氨酸变为天冬酰胺 ,第 2 0 5位的苯丙氨酸变为亮氨酸 ,第 4 18位的丙氨酸变为缬氨酸 ;与In diana型各株的同源性较低 ,与Glasgow株相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 6 7.9%和 71.6 %。结论 已成功地克隆了水泡性口炎病毒N基因 。
- 花群义徐自忠金宁一杨云庆董俊杨晶焰周晓黎
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆免疫血清学分子生物学
- 我国动物基因工程疫苗的研究进展被引量：5
- 2011年
- 基因工程疫苗利用现代生物方法克服了常规疫苗的各种缺点,具有安全稳定,能产生良好的保护性免疫反应,成本低,1针可防多病等优点,是动物疫苗未来的发展方向。目前,我国已研制出多种动物基因工程疫苗,已经或即将投入产业化生产,为我国动物疾病防控和生产提供了有力支持,未来还需加速产业化进程和加强新型疫苗研究。
- 唐金明花群义张烈韬鲁刚
- 关键词：基因工程疫苗动物
- A型动物流感病毒RT-RPA检测方法的建立及初步应用被引量：9
- 2018年
- 根据A型流感病毒M基因核苷酸序列设计引物及探针,建立了一种灵敏度高、特异性强、检测迅速、操作简便的重组酶聚合酶扩增技术（RT-RPA）。选用常见动物疫病病原验证引物探针的特异性,设计多对引物及探针,筛选出最适反应体系及反应条件,并与实时荧光RT-PCR方法比较。结果显示,本研究建立的RT-RPA方法特异性强,只有A型动物流感病毒呈阳性,其他相关常见病原均为阴性;反应时间短,检测反应时间仅需20 min;灵敏度高,最低可检测到A型动物流感病毒核酸浓度为0.96×10-2g/mL。与实时荧光RT-PCR方法相比,其灵敏度稍低。本研究建立的检测A型动物流感病毒的RT-RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,检测快速,适合现场检测以及在基层实验室推广应用。
- 王潇曹琛福曹琛福林彦星黄超华贾伟新
- 非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立被引量：20
- 2009年
- 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。
- 曾少灵花群义张彩虹曹琛福秦智锋阮周曦杨俊兴卢体康吕建强孙洁陈兵林庆燕杨云庆
- 关键词：非洲猪瘟病毒聚合酶链反应
