罗金平
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- HeLa细胞表达分泌重组eGFP-DPF-1在卵母细胞上的定位被引量：1
- 2003年
- 将兔输卵管蛋白(DPF-1)基因连结于增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因5′端,构建了真核表达重组质粒(pEGFP-N1/DPF-1),转染HeLa细胞,获得稳定表达分泌融合蛋白eGFP-DPF-1的HeLa细胞株。该融合蛋白呈现的分子量达120 KD,提示经翻译后修饰。取兔卵母细胞-卵丘细胞复合物(COC)、去除卵丘细胞后的卵母细胞或输卵管内的卵母细胞,与该株细胞共培养或培养于该株细胞条件培液中,观察兔输卵管蛋白在兔卵母细胞上的分布。结果显示DPF-1大量结合于卵母细胞透明带,先结合于透明带内层,然后维持在内层多外层少的分布状态上;在卵母细胞质膜表面则呈点状均匀分布。DPF-1在卵母细胞上的分布不受其周围颗粒细胞的阻碍,且颗粒细胞上未见有DPF-1结合的痕迹。本实验首次证实体外真核细胞表达分泌的输卵管蛋白能与卵母细胞结合,并借助绿色荧光蛋白作为示踪信号体外直接观察到该表达产物在卵母细胞上的动态分布,为进一步深入分析输卵管蛋白的功能提供了线索,也为研究输卵管内其他蛋白在配子/早胚上定位提供了可行的办法。
- 罗金平颜桂军顾正左嘉客
- 关键词：卵母细胞绿色荧光蛋白HELA细胞分泌
- 具生殖系嵌合能力的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的建立被引量：5
- 2004年
- 目的:建立能实现种系传递的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系。方法:从C57BL/6J小鼠3.5d的囊胚中分离培养内细胞团。经体外适宜培养建系后,将C57BL/6J胚胎干细胞(ES)注入ICR小鼠受体囊胚腔,制备嵌合体小鼠。结果:成功地建立了3个C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系,该C57BL/6JES细胞呈集落状生长,正常稳定的核型率>80%,具高水平的磷酸酶活性,并表达ES细胞特殊性细胞表面标记SSEA-1,不表达SSEA-3和SSEA-4;体内外的分化实验也证实mC57ES1具向三胚层组织分化的能力。经显微注入ICR小鼠囊胚腔中,产生4只嵌合体小鼠,经证实其中1只为种系嵌合小鼠。结论:建立了能实现种系传递的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系,该系的ES细胞可用于今后制备转基因动物和基因敲除动物。
- 颜桂军顾正罗金平于合国王健左嘉客
- 关键词：C57BL/6J小鼠胚胎干细胞
- 人输卵管蛋白全长cDNA克隆及真核细胞中的表达
- 2003年
- 目的:克隆人输卵管蛋白(hOviductin)全长cDNA序列,真核细胞中表达,并了解hOviductin是否与大鼠卵母细胞结合。方法:构建人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库,以^(32)P标记的兔输卵管蛋白全长cDNA序列为探针,自文库中筛选hOviductin全长cDNA序列。将获得的hOviductin编码区cDNA序列插入pEGFP-N1真核表达载体,转染HeLa细胞,表达分泌重组的绿色荧光蛋白(EGFP)-hOviductin,并估量其浓度。激光扫描共聚焦显微镜下观察EGFP-hOviductin与大鼠卵巢的卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)或去除透明带后的裸卵的结合情况。结果:所构建的cDNA文库重组率为98.5％,滴度为1.1×10~6pfu/mL。克隆所得hOviductin全长cDNA约为2500 bp,Gen-Bank的登录号为AY189737。EGFP-hOviductin在条件培液中的浓度为0.236 nmol/L,能结合在去透明带的大鼠裸卵质膜外表面,而未见其与COC结合。结论:hOviductin能在HeLa细胞中表达分泌,其分泌产物可结合于大鼠裸卵质膜外表面。
- 罗金平潘勇颜桂军顾正左嘉客
- 关键词：克隆
