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基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用: 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用。该构建方法包括：以含有猪瘟病毒疫苗C株基因组5’半长的重组质粒pA-F123为模板，用限制性内切酶SpeI和NsiI进行酶切，酶切...; 方维焕陈宁李肖梁童超李得江袁雪梅万婧

两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用被引量：7: 2010年; 根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)5端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法。灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性。两种方法对猪瘟病毒C株的检测下限均为101TCID50,均高于常规的套式PCR。用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SYBR Green方法的检测下限为3×100copies,比TaqMan探针方法更加灵敏(3×101copies)。应用建立的SYBR Green方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSFV检测,有8份样品为阳性,与套式PCR方法检测结果一致。进一步应用SYBR Green方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致。因此,本研究建立的SYBRGreen荧光定量PCR检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测。; 袁雪梅陈宁陈宇王萍童超李得江万婧李肖梁方维焕; 关键词：猪瘟病毒荧光定量PCR

携带分子标记的猪瘟病毒感染性cDNA载体的构建方法: 本发明涉及病毒抗体研究，旨在提供一种携带分子标记的猪瘟病毒感染性cDNA载体的构建方法。包括：(1)用生理盐水稀释猪瘟活疫苗至1头份/ml作为实验材料，抽提总RNA后，根据设计的6对引物，RT-PCR分段扩增相应的6个c...; 方维焕陈宁李肖梁李得江袁雪梅童超扈鸿霞

猪瘟病毒石门株E2蛋白的单抗制备及抗原表位鉴定被引量：1: 2012年; 用猪瘟病毒石门株E2(SM-E2)的BC区原核表达蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备单抗,测定其效价并鉴定抗原表位。结果表明,制备了1株持续、稳定分泌抗SM-E2的单克隆抗体2B10,效价在1∶600～1∶1 000之间。单抗2B10能与常规SDS-PAGE转膜的SM-E2蛋白发生反应,表明其识别的是线性表位,并且该单抗只能识别石门毒株,而不能与C株疫苗及2型流行毒株发生反应。点突变E2蛋白ELISA分析结果表明,该单抗不与707、709、711、713和714位突变蛋白发生反应,表明单抗2B10识别的线性表位为707I-X-P-X-G-X-G-G714。该单抗对猪瘟病毒抗原多样性分析和致病机制研究有一定的应用价值。; 谢文绮李得江陈宁廖迅童超方维焕; 关键词：猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2 单克隆抗体

猪瘟病毒浙江分离株体外生长特性及其囊膜糖蛋白E2分子的变异分析被引量：4: 2011年; 为了研究分离于浙江省衢州和杭州的2株猪瘟病毒基因2型流行毒株QZ-07、HZ1-08在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)中的生长特性及其囊膜糖蛋白E2的分子进化特征,采用间接免疫荧光、效价测定和进化分析等分子生物学方法将基因2型流行毒株与基因1型石门株进行了比较。结果表明,石门株在PK-15细胞中的增殖效率明显高于ST细胞;感染PK-15细胞后第48小时,细胞内的效价可达107TCID50/mL,而在ST细胞中的效价只有105.25 TCID50/mL。基因2型毒株在PK-15细胞中的增殖水平明显低于ST细胞,尤其以HZ1-08株更为明显;感染ST细胞后第48小时,细胞内的效价为105 TCID50/mL,而PK-15细胞中的效价只有102.75 TCID50/mL。两基因型毒株E2的核苷酸同源性低于90%,氨基酸同源性约为90%。表明,基因2型毒株的体外生长特性及其E2的分子特性均与基因1型毒株存在差异。; 万婧陈宁童超廖迅谢文绮李肖梁方维焕; 关键词：猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2 分子变异

携带分子标记的猪瘟病毒C株感染性cDNA载体的构建方法: 本发明涉及病毒抗体研究，旨在提供一种携带分子标记的猪瘟病毒感染性cDNA载体的构建方法。包括：(1)用生理盐水稀释猪瘟活疫苗至1头份/ml作为实验材料，抽提总RNA后，根据设计的6对引物，RT-PCR分段扩增相应的6个c...; 方维焕陈宁李肖梁李得江袁雪梅童超扈鸿霞; 文献传递

基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用: 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用。该构建方法包括：以含有猪瘟病毒疫苗C株基因组5’半长的重组质粒pA-F123为模板，用限制性内切酶SpeI和NsiI进行酶切，酶切...; 方维焕陈宁李肖梁童超李得江袁雪梅万婧; 文献传递

嵌合猪瘟病毒基因Ⅱ型E2抗原区的重组C株病毒构建及其生物学特性: 2013年; 【目的】目前使用的基因Ⅰ型猪瘟兔化弱毒C株疫苗是公认的安全、有效疫苗,但近年来基因Ⅱ群的猪瘟流行毒株比例增高,因此对猪瘟(CSF)的有效防控提出了更高要求。本研究旨在通过反向遗传学技术构建适应CSFV基因Ⅱ型的新型C株疫苗,为标记疫苗的开发奠定基础。【方法】在构建的C株感染性克隆基础上,拯救嵌合CSFV基因Ⅱ型HZ1-08毒株E2抗原区的重组C株病毒RecCHZE2,并分析其致病性和免疫原性。【结果】重组嵌合病毒RecCHZE2接种家兔后出现典型的定型热,兔脾脏肿大;重组嵌合病毒RecCHZE2接种猪只后没有发热和明显的白细胞减少,在接种后第12天检测到一过性的病毒血症;对接种猪血清检测结果表明,针对2型毒株的相应抗体在接种后的20 d达到高峰;接种猪血清针对C株和HZ1-08毒株的中和抗体效价相当,但C株免疫猪血清对流行毒株的中和抗体水平降低。【结论】重组嵌合病毒RecCHZE2不仅保留C株病毒弱毒的特性,且可提高针对Ⅱ型流行毒株的抗体水平。; 童超陈宁廖迅袁雪梅李肖梁方维焕; 关键词：猪瘟病毒

猪瘟病毒石门株和疫苗C株嵌合病毒构建及其特性鉴定: 猪瘟是猪的重要传染病，具有致死性及高度传染性等特点，其病原为猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)，为黄病毒科瘟病毒属成员，是有囊膜的单股正链RNA病毒。CSFV基因组长约12.3k...; 童超; 关键词：猪瘟病毒嵌合病毒

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童超