目的:观察枳实对功能性消化不良(FD)大鼠胃Cajal间质细胞(ICCs)及其SCF/c-Kit信号通路的影响。方法:48只健康SD大鼠随机分为正常组,模型组,枳实低、中、高剂量组,多潘立酮组,每组8只。除正常组外,其余5组均采用改良夹尾刺激法制造FD大鼠模型,于造模同一天分别使用枳实低、中、高剂量水煎剂(0.5、1.0、2.0g/m L),多潘立酮(0.30mg/m L)进行灌胃,4周后测定大鼠胃排空率,ELISA法检测血清SCF含量,RT-PCR法检测胃窦组织c-Kit m RNA、SCF m RNA的表达,Western Blot法检测胃窦组织c-Kit蛋白、SCF蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃排空率、血清SCF含量、胃窦组织c-Kit m RNA、SCF m RNA表达及胃窦组织c-Kit蛋白、SCF蛋白表达均显著下降(P<0.05);与模型组比较,枳实低、中、高剂量组及多潘立酮组胃排空率、血清SCF含量、胃窦组织c-Kit m RNA、SCF m RNA表达及胃窦组织c-Kit蛋白、SCF蛋白的表达均显著升高(P<0.05);与多潘立酮组比较,枳实低剂量组胃排空率、血清SCF含量、胃窦组织c-Kit m RNA表达、c-Kit蛋白、SCF蛋白的表达均显著降低(P<0.05),枳实中剂量组胃排空率显著降低(P<0.05),胃窦组织SCF m RNA表达及胃窦组织c-Kit蛋白表达均显著升高(P<0.05),枳实高剂量组血清SCF含量、胃窦组织c-Kit m RNA、SCF m RNA表达及胃窦组织c-Kit蛋白、SCF蛋白均显著升高(P<0.05);与枳实低剂量组比较,枳实中、高剂量组胃排空率、血清SCF含量、胃窦组织c-Kit m RNA表达及胃窦组织c-Kit蛋白、SCF蛋白表达均显著升高(P<0.05),枳实中、高剂量组SCF m RNA表达均显著升高(P<0.05);与枳实中剂量组比较,枳实高剂量组胃排空率、血清SCF含量及胃窦组织c-Kit m RNA、SCF m RNA及SCF蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:枳实可通过上调c-Kit和SCF的表达,启动SCF/c-Kit信号通路,促进ICCs的增殖,从而促胃动力。
目的探讨内质网自噬在大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICCs)内质网应激(ERS)过程中的作用,为改善胃动力障碍提供新靶标。方法采用酶解法分离大鼠胃窦ICCs并行免疫荧光鉴定,使用衣霉素(TM)诱导ICCs构建ERS模型,三甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬,雷帕霉素(Rapa)促进自噬。随机将细胞分为4组并分别给予不同的处理,ICCs组正常培养,ERS组给予2μg/m L TM处理ICCs,3-MA组给予2μg/m L TM和4μmol/m L 3-MA联合作用,Rapa组给予2μg/m L TM和2μmol/m L Rapa联合作用,每组作用时间均为6 h;通过实时荧光定量PCR法检测ERS相关因子GRP78、自噬相关因子LC3B的mRNA表达;CCK-8法检测各组细胞活性。结果成功分离并鉴定ICCs。与ICCs组比较,ERS组、3-MA组和Rapa组的GRP78和LC3B表达均升高(P均<0.05),细胞活性降低(P均<0.05)。与ERS组比较,3-MA组GRP78表达升高(P<0.05),LC3B表达、ICCs细胞活性降低(P均<0.05);Rapa组GRP78表达降低(P<0.05),LC3B表达、ICCs细胞活性升高(P均<0.05)。结论 ICCs的ERS过程伴发内质网自噬,内质网自噬可减轻ICCs的ERS损伤作用。
目的:研究柴胡疏肝散含药血清对体外大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)增殖及其细胞周期的影响.方法:体外培养的大鼠胃ICC经荧光鉴定,取生长对数期内的I C C与各含药血清共孵.实验分为空白组、柴胡疏肝散含药血清组(5%、10%、20%)及10%多潘立酮含药血清组.通过CCK-8法检测ICC的增殖作用;使用流式细胞术检测ICC细胞周期;Western blot检测ICC细胞周期素依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,CDK2)、cyclin E的表达.结果:与空白组比较,柴胡疏肝散含药血清各浓度组及10%多潘立酮含药血清组可显著促进ICC增殖(均P<0.01),可提高ICC细胞周期G0/G1期及S期比例(均P<0.01),同时10%柴胡疏肝散及10%多潘立酮含药血清组可显著上调ICC周期蛋白CDK2、cyclin E的表达(均P<0.01).柴胡疏肝散各浓度组内比较,10%、20%浓度组对促进ICC增殖及提高G0/G1期和S期比例均优于5%浓度组(均P<0.05);10%与20%浓度组在促进I C C增殖作用及提高S期比例上差异无统计学意义(均P>0.05).与10%多潘立酮含药血清组比较,10%柴胡疏肝散组对ICC增殖作用及上调CDK2、c y c l i n E的表达均优于10%多潘立酮组(均P<0.05);10%、20%柴胡疏肝散含药血清组提高G0/G1期及S期比例亦优于10%多潘立酮组(均P<0.05).结论:柴胡疏肝散含药血清可提高ICC生长活性,对ICC的增殖分化起促进作用.
