王小龙
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物医学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪、鼠、鸭补体C3d基因克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了比较猪、鼠、鸭C3d基因的不同,以便为下一步研究不同动物C3d作为分子佐剂核酸疫苗的效果,试验对3种基因进行克隆和序列分析。首先提取猪、鼠、鸭的肝脏总RNA,以RNA为模板,通过RT-PCR方法,分别扩增C3d分子的cDNA,再将3种动物的cDNA分别克隆到pMDl8-T载体中,然后转化BL21大肠杆菌,经酶切鉴定后进行序列测定,根据测序结果利用生物信息学工具软件对3种C3d进行生物学性质分析。结果发现,猪与鼠和鸭的C3d基因的同源性分别为81.9%和65.6%,鼠与鸭C3d基因的同源性为65.8%;鼠、猪的补体C3d分子与受体CR2结合的功能区有28个氨基酸,鸭有29个氨基酸。
- 夏庆祥张德庆吴家强王小龙牛钟相
- 关键词：C3DRT-PCR克隆
- 猪C3d分子佐剂PRRSV GP5基因核酸疫苗的构建及免疫效果的研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因C3d-P28分子佐剂重组质粒,探明C3d-P28分子佐剂的免疫增强效果。【方法】用大肠杆菌疫苗对健康猪进行免疫激活,提取猪肝脏总RNA,RT-PCR克隆C3d-P28并连接至pUC19载体,构建pUC19-P28.n(2、4、6)串联体,然后分别将P28.n(2、4、6)连接至真核表达载体pcDNA3.1构建成pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)。RT-PCR扩增PRRSV GP5基因,分别定向克隆至pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)中,构建pcDNA3.1-GP5-P28.n(2、4、6)重组质粒;提取重组质粒进行双酶切、电泳,同时用重组质粒转染Marc 145细胞,经间接免疫荧光进行蛋白表达检测,并用重组质粒免疫小鼠,通过ELISA试剂盒检测小鼠体内抗体、IL-4和IFN-γ的水平,检验重组质粒的免疫效果。【结果】从猪肝脏中克隆了C3d cDNA,构建了pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)串联体,并将PRRSV GP5基因定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)中,构建了PRRSV GP5重组质粒(pcDNA3.1-GP5-P28.2、pcDNA3.1-GP5-P28.4、pcDNA3.1-GP5-P28.6);通过检测小鼠血清中抗体、IL-4和IFN-γ的结果显示,抗体效价、IL-4和IFN-γ含量均比对照组高,且以pcDNA3.1-GP5-P28.6组的效果最好,与空白对照及PCDNA3.1-GP5组比较差异均显著(P<0.05)。【结论】构建了猪补体C3d-P28分子佐剂PRRSV GP5重组质粒,该质粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,补体C3d-P28分子佐剂能显著增强PRRSV GP5基因的免疫效果。
- 夏庆祥张德庆吴家强牛星王小龙牛钟相
- 关键词：PRRSV免疫效果
- 沙门氏菌invH基因融合蛋白表达及其免疫保护性研究
- (目的)本文旨在进行沙门氏菌invH基因融合蛋白表达的基础上，制备该融合蛋白的亚单位疫苗，研究invH基因表达蛋白的免疫保护功能。(方法)采用PCR技术对鼠伤寒沙门氏菌(DT104株)的入侵基因H进行扩增，将其克隆到原核...
- 王小龙牛钟相
- 关键词：沙门氏菌免疫保护性
- 不同来源沙门菌入侵基因invH的检测及序列分析
- 2011年
- 根据沙门菌invH基因序列设计1对引物,对9株沙门菌和4株常见病原菌进行PCR扩增,并将扩增出的in-vH基因进行克隆及序列分析,应用生物信息学方法预测invH蛋白的T细胞抗原表位。结果表明,9株沙门菌PCR均扩增出519bp的特异条带,4株非沙门菌均无特异带扩增;核苷酸序列分析证实,3株鼠伤寒沙门菌之间同源性为99.8%,与鸡白痢和鸡肠炎沙门菌之间的核苷酸序列同源性为98.6%,3株猪伤寒沙门菌和3株鸡源性沙门菌同源性较低,且不在同一支系统进化树上;invH蛋白有5个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位。
- 王小龙牛星张德庆夏庆祥牛钟相
- 关键词：沙门菌抗原表位
- 沙门氏菌invH基因的重组表达与免疫保护效果研究被引量：2
- 2011年
- 在沙门氏菌invH基因重组表达的基础上,研究invH基因表达蛋白的免疫保护功能。采用PCR技术对鼠伤寒沙门氏菌DT104株的入侵基因H进行扩增,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,将重组克隆进行融合蛋白表达、纯化和Western-blot检测,用油乳剂制备融合蛋白疫苗,将该疫苗通过3种不同剂量(40μg/只、60μg/只、80μg/只)免疫注射小鼠进行免疫保护效果测定,同时设油乳剂灭活疫苗组和PBS空白对照组,采用黏附与黏附抑制试验对抗血清的活性进行分析。结果表明,构建的重组克隆成功表达了44ku的融合蛋白GST-invH,且该蛋白具有良好的免疫原性。3种剂量重组蛋白疫苗间的免疫效果差异不显著,均能提高小鼠体内IL-4和IFN-γ的含量,与空白对照组差异显著(P<0.05);油乳剂灭活疫苗组的保护率为90%,3种剂量重组蛋白疫苗组的保护率均在60%以上,虽然重组蛋白疫苗的保护效果不及油乳剂灭活疫苗,但与空白对照组差异均极显著(P<0.01)。体外黏附抑制试验结果显示,抗融合蛋白GST-invH的抗体能抑制沙门氏菌对靶细胞的黏附。表明,GST-invH融合蛋白具有良好的免疫保护性。
- 王小龙张伟华牛钟相
- 关键词：沙门氏菌免疫保护
- 沙门氏菌invH基因亚单位疫苗和C3d分子佐剂核酸疫苗的制备与免疫效果研究
- 沙门氏菌是重要的肠道病原菌,根据抗原的不同分为2500个血清型,绝大多数沙门氏菌对人和动物都有致病性,并是人类食物中毒的主要病源之一,严重影响着人和动物的健康。因而,通过探讨沙门氏菌invH基因的免疫功能,对研制新型疫苗...
- 王小龙
- 关键词：沙门氏菌核酸疫苗
- 文献传递
