濮小英
- 作品数：35 被引量：137H指数：7
- 供职机构：杭州师范大学医学院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金杭州市卫生科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 杭州地区2011-2013年儿童呼吸道感染人偏肺病毒分子流行病学研究被引量：4
- 2014年
- 目的 了解杭州地区儿童人偏肺病毒（hMPV）的分子流行病学特点.方法 收集2011年1月至2013年12月杭州市2所哨点医院儿科呼吸道门诊和住院病例2 593例,门诊病例采集咽拭子1 676份,住院病例采集气管吸取物917份.用实时荧光定量PCR方法检测hMPV核酸,阳性样本用RT-PCR方法对hMPV融合蛋白（F）部分基因片段扩增和序列测定.所测基因序列与GenBank代表株核苷酸同源性比较,并构建基因进化树.结果采用描述性统计和样本率的x2检验.结果 杭州地区呼吸道患儿hMPV检出率为6.51％（169/2 593）.门诊检出率为6.62％（111/1 676）,住院检出率为6.32％（58/917）,检出率差异无统计学意义（x2=0.086,P=0.769）.2岁和3岁组检出率最高,分别为14.14％（28/198）、14.01％（22/158）,与其他组比较差异有统计学意义（x2=38.654,P=0.000）.冬春季检出高于夏秋季（x2=67.032,P=0.000）.测序的88株阳性基因序列与GenBank参考株核苷酸序列同源性为81.6％～ 100.0％,基因进化树分析显示分属于2个基因型的4个亚型.2011-2012年B1亚型占优势,2012年底至2013年A2型为流行.＜1岁组A基因型（67.56％,25/37）与≥1岁组（43.13％,22/51）检出率差异有统计学意义（x2=5.143,P=0.023）.结论 杭州地区儿童呼吸道感染hMPV存在4种基因型,＜1岁组A基因型感染较多,2、3岁组hMPV检出率最高.
- 寇宇潘劲草于新芬李钧杨旭辉文艳草周银燕濮小英孙昼谢立
- 关键词：人偏肺病毒呼吸道感染流行病学特征
- 2009～2013年杭州地区甲型流感病毒基质蛋白基因的遗传进化分析被引量：2
- 2015年
- 为调查2009年至2013年杭州地区甲型流感病毒基质蛋白基因(Matrix protein,M)的遗传进化特征,本文对5个连续的流行季中A(H1N1)pdm09亚型和季节性A(H3N2)亚型流行株的M基因序列进行了深入的研究分析。从两家当地三级甲等医院发热门诊室共收集5675份流感样病例样本。利用病毒分离与实时荧光定量PCR法对样本内所含病毒进行鉴定,发现流感病毒阳性率为20.46%,其中甲型流感病毒872株。从5个流行季的9个时间段内,随机选取了76株甲型流感病毒进行M基因全序列测定和遗传进化分析。研究发现,杭州地区甲型流感病毒烷胺类耐药相关位点M2蛋白的S31N突变率接近100%。两株A(H1N1)pdm09本地流行株还发生了V27A/S31N或V27I/S31N双位点耐药突变。另外,在一株季节性A(H3N2)亚型流行株上还观察到R45H/S31N双位点耐药突变。基于M基因序列进行系统发育分析发现,无论是病毒亚型间还是各流行季间,M基因进化速率明显低于血凝素蛋白基因(Haemagglutinin,HA)和神经胺酸酶蛋白基因(Neuraminidase,NA)。对M1和M2蛋白的变异进行正向选择压力分析发现,M2蛋白的编码区所受到的选择压力要远远高于M1蛋白,且A(H1N1)pdm09亚型流行株所受到的选择压力要高于季节性A(H3N2)亚型。甲型流感病毒M基因的遗传进化研究对判断病毒的进化方向、预防和控制病毒的暴发流行具有重要的参考价值。
- 邵铁娟李钧濮小英于新芬寇宇周银燕钱昕
- 关键词：甲型流感病毒基质蛋白进化突变
- 临床来源nct-CTXΦ样霍乱弧菌基因的多样性分析被引量：3
- 2007年
- 目的 了解临床来源霍乱弧菌nct-CTXΦ（不含霍乱毒素基因的CTXΦ）样基因特征。方法 对6株于2000-2004年自杭州散发腹泻患者分离的ctxA^-、tcpA^＋ 01群霍乱弧菌核糖体基因分型，PCR检测zot、noe、cep基因及串联CTXΦ基因组拷贝问的相邻片段；以zot、ace、cep基因探针South-ernblot分别检测nct-CTXΦ样基因的PstⅠ、HindⅢ、MluⅠ、BglⅡ酶切及HindⅢ、MluⅠ双酶切的限制性酶切长度多态性，结合拷贝间相邻片段HindⅢ酶切位点分析，构建nct-CTXΦ样基因组物理图谱。结果 6株01群霍乱弧菌中，核糖体基因分型为2种型别；1株无CTXΦ或nct-CTXΦ样基因组，5株存在nct-CTXΦ样基因组，且此5株菌株中存在3种类型nct-CTXΦ样基因组组成，分别为单拷贝长约6kb串联双拷贝、单拷贝长约5．8kb的串联双拷贝和串联4拷贝（2个单拷贝长约6kb，另2个单拷贝长约5．8kb）。结论 nct-CTXΦ霍乱弧菌可能具有引起腹泻的能力；临床和环境来源的霍乱弧菌中存在着一类多样性的nct-CTXΦ样噬菌体家族。
- 濮小英潘劲草孟冬梅叶榕黄志成
- 关键词：霍乱弧菌霍乱毒素
- 一种基于同源重组的细菌基因点突变分子克隆技术
- 本发明涉及一种基于同源重组的细菌基因点突变分子克隆技术，该技术通过在目的原始菌基因A与其相邻基因B间插入基因片段C，插入的基因片段的插入位点在目的基因A和其相邻基因B的启动子间，且不影响2个基因的表达再以质粒为载体，经双...
- 濮小英潘劲草张蔚郑伟汪皓秋
- 文献传递
- 杭州地区2009甲型H1N1流感重症患儿中人类偏肺病毒感染状况研究
- 2012年
- 目的了解杭州地区2009甲型H1N1流感(以下简称甲流)重症患儿中人类偏肺病毒(hMPV)的感染状况。方法采集2009年11月至2010年1月确诊为甲流重症患儿的呼吸道样本79份,用传统逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量RT-PCR方法检测hMPV及其他呼吸道病毒。选择hMPV阳性样本PCR扩增产物进行核苷酸测序,将所测序列与GenBank比对分析,并绘制基因进化树。结果 79份甲流病毒阳性样本中,hMPV及其它呼吸道病毒阳性率20.25%(16/79),hMPV阳性PCR扩增产物4份,占甲流重症病例的5.06%(4/79)。其中3份hMPV阳性PCR扩增产物核苷酸序列相似性为99.1%～99.5%,与广东省流行株GD-165,泰国株155N及B1代表株高度相似,并且被GenBank收录。结论杭州地区确诊感染的2009甲型H1N1流感重症病例中存在与hMPV共同感染状况,且hMPV均为B1基因型。
- 寇宇于新芬周银燕濮小英郑伟潘劲草
- 关键词：流感病毒A型H1N1亚型
- 埃可病毒9型的快速检测方法建立以及流行特征研究
- 邱晓枫张国忠黄志成于新芬潘劲草濮小英谢立考庆君王咪咪
- 无菌性脑炎是严重的中枢神经系统非细菌性感染。据报道在已经确定病原的无菌性脑膜炎病例中，肠道病毒占40%～80%，其中埃可病毒占了80%～90%[1]。埃可病毒9型(简称ECHO-9)是引起儿童夏季无菌性脑炎最常见的病原体...
- 关键词：
- 关键词：埃可病毒中枢神经系统脑炎
- 沙门菌H抗原的xTAG法鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的利用Luminex xTAG技术，建立能高通量鉴别沙门菌H抗原的xTAG悬浮芯片法，用于沙门菌的血清型别鉴定。方法以沙门菌编码H抗原的fliC和fljB基因为目标基因，选取其保守片段设计上游通用引物，选取可变片段设计下游特异性引物；合成时上游引物的5′端用生物素标记，下游引物的5′端连接特定的TAG序列；标本经多重PCR扩增并标记生物素和TAG序列后，与含anti-TAG序列的编码磁珠混合液杂交分型，通过生物素与链霉亲和素-藻红蛋白的反应报告结果。利用建立的xTAG悬浮芯片法鉴定145株沙门菌日常分离株的H抗原，并与传统的血清凝集试验比较。结果31种沙门菌H抗原经多重PCR扩增后，与xTAG磁珠杂交后可鉴别分型，各H抗原间无交叉反应，且重复性良好，与大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌及志贺菌DNA等亦无交叉反应。对145株沙门菌进行H抗原鉴定，与传统的血清凝集试验比较，其敏感度为95.1%，特异度为100%。结论利用xTAG悬浮芯片法鉴定沙门菌H抗原，特异准确，可在4～5 h内完成90多株常见血清型沙门菌的H抗原鉴定。
- 郑之北郑伟濮小英文艳苹潘劲草汪皓秋
- 关键词：沙门菌H抗原
- 日本偏远地区医疗卫生提供体制及其对我国的启示
- 2018年
- 总结归纳了日本无医地区制定准入标准、定期调整名单、实施偏远地区医疗服务专项计划、规范偏远地区医疗卫生提供体系、明确各级政府责任、设立自治医科大学、发挥社会团体作用等经验，并结合我国国情，提出了强化政府主体责任、精准公布和调整偏远无医地区名单、精准实施偏远地区“服务全覆盖”计划、完善筹资和支付机制、加强卫生队伍建设、优化区域资源统筹等建议。
- 濮小英顾亚明
- 关键词：资源分配
- 埃可病毒9型VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2015年
- 目的原核表达并纯化埃可病毒9型(ECHO9)VP1蛋白,免疫兔子制备多克隆抗体,鉴定重组蛋白的免疫活性,为ECHO9血清学检测试剂和疫苗研究提供依据。方法 PCR方法扩增VP1基因,构建原核表达质粒p ET28a-VP1并转化到大肠杆菌(E.coli BL21),诱导表达并纯化VP1重组蛋白,免疫兔子制备抗VP1多克隆抗体,ELISA检测抗VP1抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性。病毒中和试验鉴定抗体中和ECHO9病毒的能力。结果 VP1重组蛋白在大肠杆菌BL21中高效表达,制备的抗VP1抗体效价为1∶105。Western blot检测结果显示,抗VP1多克隆抗体可以识别原核表达的VP1蛋白。中和试验显示抗体对ECHO9病毒有中和作用,其效价为1∶10。结论本研究成功原核表达了ECHO9的VP1蛋白并制备出抗VP1多克隆抗体,有助于ECHO9的临床诊断、疫苗开发和分子病毒学研究。
- 邱晓枫黄志成张国忠濮小英潘劲草王咪咪
- 关键词：病毒性脑炎VP1基因多克隆抗体
- 杭州市肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析被引量：6
- 2011年
- 目的了解杭州市2008年和2011年肠道病毒71型(EV71)流行株VP1基因特征。方法手足口病患者咽拭子、粪便等样本先通过荧光RT-PCR方法初筛,然后选部分肠道病毒71型阳性样本进行病毒分离、培养;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定上述培养物,并扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建基因进化树。结果从2008年和2011年手足口样本中分离到EV71阳性毒株各4株,VP1基因全序列测定结果显示其与C4亚型代表株核苷酸和氨基酸的相似性最高,分别为93.8%～95.2%、99.0%～99.7%。结论杭州市手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型。
- 邱晓枫祝水芬濮小英叶榕张国忠李钧缪凡黄志成
- 关键词：手足口病肠道病毒71型VP1基因基因型
