温恬
- 作品数：25 被引量：93H指数：3
- 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省卫生厅资助项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2013年
- 目的:构建甲型H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并转染293T细胞以表达其编码的蛋白。方法:从南京分离株H7N9流感病毒[A/Nanjing/1/2013(H7N9)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T载体中构建pMD18-T-NS1质粒,以pMD18-T-NS1质粒为模板扩增NS1基因。双酶切NS1基因PCR产物与PXJ40-MYC后,连接构建真核表达载体PXJ40-MYC-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。Western blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功构建了H7N9非结构蛋白NS1真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究奠定基础。
- 温恬迟莹张黎张文帅彭海燕史智扬
- 关键词：NS1真核表达免疫印迹
- 一种高通量表达单克隆抗体的线性表达框
- 本发明公开了一种高通量表达单克隆抗体的线性表达框，所述抗体线性表达框包括顺次连接的以下几个表达原件：启动子、抗体信号肽编码序列、连接区编码序列、抗体重链可变区编码序列、抗体重链可变区编码序列、终止子。本发明利用该抗体线性...
- 张黎卢静温恬孟繁岳胡月梅朱凤才
- 文献传递
- 甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2011年
- 目的:构建甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏首例甲型H1N1流感病毒毒株(A/Nan jing/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-NS1质粒,双酶切pMD18-T-NS1与PXJ40-HA后,构建真核表达载体PXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。West-ern blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功克隆NS1全长基因,并构建了其真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究提供了材料。
- 张文帅卞倩温恬迟莹李燕焦永军
- 关键词：甲型H1N1流感病毒NS1真核表达免疫印迹
- 抗寨卡病毒包膜蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2021年
- 目的制备抗寨卡病毒(zika virus,ZIKV)包膜蛋白(envelope protein,E蛋白)单克隆抗体,检测其免疫反应特异性。方法将ZIKV重组E蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞用50%聚乙二醇(PEG)融合,经过含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基筛选出阳性克隆,采取有限稀释法获得单克隆细胞株。利用筛选到的单抗作为一抗,行间接免疫荧光实验和免疫转印试验,鉴定单抗的反应特异性。结果筛选出1株针对寨卡病毒E蛋白的单克隆抗体(命名为13E7-E9),间接免疫荧光实验和免疫转印试验结果表明,该单抗可与寨卡病毒E蛋白结合,且与登革病毒无交叉。结论成功筛选1株抗寨卡病毒E蛋白的特异性单克隆抗体,可为研发寨卡病毒的免疫诊断试剂奠定基础。
- 史凤娟刘静娴温恬曾晓燕郭喜玲焦永军
- 关键词：包膜蛋白单克隆抗体间接免疫荧光
- 一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒
- 本实用新型涉及一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。试剂盒包括：盒体及盒盖，所述盒体内有一个中间板，中间板上设置一个包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板凹槽；水平设置六个STXⅡ参考标准品试...
- 温恬黄超曾晓燕史凤娟焦永军郭喜玲
- 文献传递
- 基于上转化发光免疫层析技术建立发热伴血小板减少综合征病毒总抗体快速检测方法被引量：7
- 2015年
- 目的基于上转化发光(UPT)免疫层析技术,建立发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)总抗体的现场快速检测方法。方法将SFTSV重组NP蛋白与上转化发光颗粒(UCP)偶联,制备UCP-NP免疫层析试纸条,评价该试纸条检测SFTSV总抗体的灵敏性、特异性和稳定性,并检测SFTSV血清254份,与酶联免疫法(ELISA)比较。结果该方法可在15min内完成SFTSV总抗体检测,可检测1∶500稀释度的SFTSV阳性血清,与其他出血热病毒无交叉反应,加样14d内稳定性较高。UPT免疫层析法与ELISA法检测临床血清样品一致性极高(Kappa=0.967),约登指数为0.973。结论建立了基于UPT免疫层析技术的SFTSV总抗体快速检测方法,该方法灵敏、特异,且操作简便、快速,结果稳定,适合在基层门诊和体检现场推广。
- 黄超张文帅张黎温恬史凤娟曾晓燕迟莹史智扬焦永军
- 关键词：灵敏度特异性
- 甲型H1N1流感病毒血凝素HA1蛋白的真核表达与纯化
- 2011年
- 目的构建甲型SWH1N1流感病毒血凝素HA1蛋白的杆状病毒真核表达载体,转染sf9细胞表达并纯化其编码蛋白。方法从江苏甲型H1N1流感病毒毒株[A/Jiangsu/1/2009(H1N1)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA1基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/HA1质粒,双酶切pMD18-T/HA1与p-fast后,连接构建真核表达载体p-fast-HA1,转化DH10Bac细胞,转座构建杆状病毒HA1-Bacmid,经酶切及测序鉴定后将HA1-Bacmid转染到sf9细胞中,通过免疫印迹法鉴定HA1蛋白的表达,采用亲和层析法纯化HA1蛋白。结果经双酶切、测序鉴定证实HA1基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实HA1基因的表达;纯化获得了高纯度的HA1蛋白。结论成功克隆了HA1基因,并构建了其杆状病毒真核表达载体,该表达载体的构建为后期的流感快速检测以及基因工程疫苗制备奠定了良好的基础。
- 李燕迟莹卞倩温恬张文帅焦永军
- 关键词：HA1基因克隆蛋白纯化
- 江苏省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒血清流行病学调查被引量：67
- 2011年
- 目的调查江苏省人与动物发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)血清流行病学情况,为控制疫情提供流行病学线索。方法 2010年7-11月在江苏省南京江宁区、溧水县,常州溧阳市,无锡宜兴市,淮安盱眙县和连云港东海县共采集2853份血清,其中人血清1922份、动物(犬、羊、猪、牛、鹅、鼠和鸡)血清931份,运用双抗原夹心ELISA法检测血清中SFTSV总抗体,并进行不同地区SFTSV总抗体阳性率比较。结果本次调查2853份血清样本中SFTSV总抗体阳性血清121份,阳性率为4.24%,提示江苏省存在SFTSV的流行。在7种被调查的动物样本中,5种动物(犬、羊、牛、猪、鸡)血清样本SFTSV总抗体阳性,阳性率分别为6.40%、57.14%、31.82%、5.33%和0.98%;人血清中SFTSV总抗体阳性率为0.94%。血清中SFTSV总抗体阳性率存在地区差异。人群与动物SFTSV血清总抗体阳性率存在正相关关系。结论江苏省是SFTSV的流行区域,需加强SFTSV的预防意识及诊断能力。
- 张文帅曾晓燕周明浩焦永军温恬郭喜玲祁贤史智扬
- 关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒血清流行病学调查
- H7N9亚型禽流感病毒核蛋白NP原核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建甲型H7N9禽流感病毒NP基因的原核表达载体,并表达其编码重组蛋白。方法 RT-PCR法扩增H7N9病毒NP基因,克隆至原核表达载体PET28a(+)中,构建表达载体PET28a(+)-NP质粒;经PCR、双酶切、测序鉴定后,将PET28a(+)-NP质粒转化表达菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达NP重组蛋白。应用western blot法鉴定NP蛋白的表达。结果成功构建NP基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达出分子量为56kD的NP重组蛋白。结论实现了禽流感病毒H7N9NP重组蛋白在原核系统中的高效表达,为禽流感诊断试剂及单抗的研发工作奠定了基础。
- 张文帅张黎温恬迟莹黄超彭海燕焦永军史智扬
- 关键词：原核表达
- 一种I型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒
- 本实用新型为一种I型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒，其包括盒体，盒盖，其中所述盒体内设置一带孔硬质海绵，硬质海绵上部中央设置一个抗stxI单克隆抗体包被的96孔板凹槽；硬质海绵上下两侧边缘设置两个冰袋孔；凹槽上下两侧...
- 黄超温恬曾晓燕史凤娟彭海燕焦永军郭喜玲
- 文献传递
