涂继方
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 供职机构：浙江中医药大学更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 解毒祛瘀滋阴方对T淋巴细胞凋亡以及ERα/β的调节作用研究
- 目的研究解毒祛瘀滋阴方对T淋巴细胞凋亡以及ERα/β的调节作用,初步探索其治疗SLE的机理。方法制备解毒祛瘀滋阴方含药血清,通过HPLC同时测定含药血清中有效成分阿魏酸、异阿魏酸的浓度;分高、中、低含药血清组和空白对照组...
- 涂继方
- 关键词：含药血清凋亡转录活性
- 文献传递
- 基于系统生物学组学技术的糖尿病中医药研究思路被引量：6
- 2013年
- 系统生物学是一种整合型大科学,它从系统水平来理解和研究生物学系统,这与以往的以研究个别基因和蛋白为主要内容的经典分子生物学方法不同;我国的传统医学强调机体自身的整体平衡及与自然、社会的和谐统一,是统一的大整体系统观,蕴含着更丰富的系统论思想。基于两者本质的一致性,试对系统生物学的组学技术在糖尿病中医药研究中的应用现状进行阐述和对进一步研究的一些设想。
- 柴可夫齐方洲涂继方
- 关键词：系统生物学中医药糖尿病
- 基于HPLC-MS/NMR对畲药小香勾活性成分分离鉴定研究
- 尚建基吕惠卿尚滔陈学智李强居红珍聂文成叶一萍温成平陈帆谢志军潘君汉涂继方李昌海洪逸萍曹灵勇
- 小香勾是畲族民众的习用药材，具有明显的祛湿止痛作用。浙江省科技厅社会发展项目“基于HPLC-MS/NMR对畲药小香勾活性成分分离鉴定研究”，经过项目组一年多的研究，取得了预期的成果。基于HPLC/ESI-MS/NMR技术...
- 关键词：
- 关键词：畲药
- 中心组合设计优化小香勾总黄酮提取工艺研究被引量：8
- 2013年
- 目的:利用中心组合(Box-Benhnken)设计对小香勾总黄酮(XGTF)超声提取工艺进行优化。方法:根据Box-Benhnken设计原理,以XGTF得率(%)为响应值作响应面和等高线图,进行3因素3水平的响应面分析,依据回归分析确定各工艺条件的影响因子。结果:影响XGTF得率(%)因素由大到小的顺序为:乙醇浓度>超声时间>料液比。XGTF的最佳工艺条件为超声时间40.0min,乙醇浓度65%,液料比46:1,在此条件下,预测值为3.50%,通过反复验证试验,实测值可达3.41%。结论:本文所建立的数学模型极其显著(P<0.0001),可用来对XGTF的提取工艺进行分析和预测。
- 陈学智谢志军温成平涂继方吕惠卿
- 系统生物学在痛风中医药研究中的应用与设想被引量：3
- 2012年
- 系统生物学利用系统论的思维方法研究生命现象,与中医的整体观念不谋而合。因此,对系统生物学思维方法在痛风中医药研究中的应用进行了阐述并提出设想。
- 涂继方温成平谢志军林韬琦
- 关键词：系统生物学中医痛风
- 畲药小香勾对脾虚湿浊内阻型痛风相关差异蛋白的作用研究
- 陈学智温成平谢志军吕惠卿叶一萍尚滔潘君汉李强陈百春李昌海谷换朋季巾君余卫清涂继方
- 小香勾是畲族民众的习用药材，具有明显的祛湿止痛作用。浙江省科技厅社会发展项目“畲药小香勾对脾虚内阻型痛风相关差异蛋白的作用研究”，经过项目组二年多的研究，揭示了小香勾对脾虚湿浊内阻型原发性痛风差异表达蛋白的影响，明确了小...
- 关键词：
- 关键词：痛风
- SDH全基因的拼接及原核表达
- 2009年
- 目的:构建闭联异松树脂醇二脂脱氢酶(SDH)全基因片段与原核表达质粒载体,在大肠杆菌中进行表达。方法:将SDH3′端和5′端序列通过PCR方法拼接获得全基因后,然后将其插入到相应的原核表达质粒载体PGEX-6p-1中,形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导其表达蛋白,再用SDS-PAGE电泳检测表达结果。结果:成功的将SDH基因片段拼接成全基因,并将其构建入原核表达载体PGEX-6p-1中。测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变。经1.5mmol/LIPTG诱导后获得与预测大小(29.253kDa)完全一致的目的蛋白即闭联异松树脂醇二脂脱氢酶蛋白,并测得在37℃、250r/min的实验条件下的最佳诱导时间为4h。结论:成功获得了重组质粒并在大肠杆菌中较好的诱导表达得到了闭联异松树脂醇二脂脱氢酶的蛋白。
- 涂继方汪旭珍徐莉
- 关键词：原核表达原核载体
- GRα-GST融合蛋白的重组与表达
- 目的:构建GRα-GST融合蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具。方法:运用RT-PCR扩增得到包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体。以此重组载体为模板扩增含有BamH I与Xho I酶切...
- 涂继方温成平孙静徐莉季巾君谢志军
- 关键词：糖皮质激素受体Α融合蛋白原核表达基因重组
- 文献传递
- GRα-GST融合表达载体的构建及重组蛋白的表达被引量：1
- 2012年
- [目的]构建GRα-GST融合表达载体并获得重组蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具。[方法]运用RT-PCR扩增得到包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体。以此重组载体为模板扩增含有BamH I与Xho I酶切位点的GRαORF,插入pGEX-4T-1载体后形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达融合蛋白,再用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达。[结果]成功的将GRα-全基因构建入原核表达载体pGEX-4T-1中。测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变。经IPTG诱导后获得与预测大小(112kDa)完全一致的目的蛋白即GRα-GST融合蛋白。[结论]成功获得了含重组载体的大肠杆菌,并在IPTG诱导下较好的表达,得到了GRα-GST融合蛋白。
- 涂继方温成平孙静徐莉谢志军
- 关键词：糖皮质激素受体Α融合蛋白原核表达
- 双波长RP-HPLC测定解毒祛瘀滋阴方阿魏酸、异阿魏酸和芍药苷的含量被引量：5
- 2013年
- 目的:建立双波长反相高效液相色谱(RP-HPLC)同时测定解毒祛瘀滋阴方阿魏酸、异阿魏酸和芍药苷的含量。方法:色谱柱为Dionex C18柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),流动相A乙腈,流动相B为0.1%甲酸溶液(体积比),梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,检测波长:阿魏酸和异阿魏酸325 nm,芍药苷为275 nm,柱温25℃。结果:阿魏酸、异阿魏酸和芍药苷的质量浓度分别在0.15～15.0μg.mL-1(r=0.9999)、0.25～25.0μg.mL-1(r=0.9994)和1.50～60.0μg.mL-1(r=0.9999)内与峰面积呈良好的线性关系(n=5),平均回收率(n=9)分别为99.1%,98.3%,100.1%。结论:该法操作简单,灵敏度高,可用于解毒祛瘀滋阴方阿魏酸、异阿魏酸和芍药苷的同时测定。
- 吕惠卿张小平涂继方李祖光温成平
- 关键词：阿魏酸异阿魏酸芍药苷反相高效液相色谱
