杨光
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌FnbpA免疫优势片段的构建及免疫保护性研究被引量：2
- 2020年
- 目的构建金黄色葡萄球菌FnbpA蛋白免疫优势片段原核表达菌株并研究其重组蛋白免疫原性。方法根据预测确定N区优势片段,通过聚合酶链反应(PCR)法对目的片段进行基因扩增,转入表达载体pET-32a,并导入宿主菌大肠杆菌(E.coli)Rosstta中进行原核表达;将N区优势片段与重复区优势片段通过重叠延伸聚合酶链反应(overlap PCR)融合,原核表达;将蛋白FL纯化,分别免疫Balb/c小鼠,并检测小鼠IgG水平、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、免疫保护率。结果各重组蛋白在E.coli Rosstta中均获得表达,表达后FnbpA 301-430aa、FL蛋白大小分别约39.3×103,49.1×103;抗体水平检测结果表明重组蛋白FL抗体水平接近全蛋白FnbpA,高于FnbpA 301-430aa;重组FL组淋巴细胞分泌IL-4、IFN-γ、IL-17的能力与FnbpA 301-430aa比较差异有统计学意义(P<0.05);攻毒结果表明,全蛋白FnbpA实验组免疫保护性最好,FL实验组保护性效果优于FnbpA 301-430aa。结论成功构建了金黄色葡萄球菌FnbpA免疫优势截短体蛋白的原核表达菌株,重组蛋白FL具有良好的免疫保护性。
- 杨汐静陈晓婷刘道龙杨阳杨光
- 关键词：金黄色葡萄球菌重组蛋白免疫保护作用
- 靶向猪基因组单链向导RNA快速筛选以及利用图案微阵列收获单克隆细胞的研究
- 2021年
- 规律性短重复回文序列簇(CRISPR)和CRISPR辅助蛋白9(Cas9)构成的CRISPR/Cas9基因编辑技术快速推进了基因修饰猪作为医学研究模式动物的广泛应用。而高效的靶基因单链向导RNA(sgRNA)是利用CRISPR/Cas9技术进行基因编辑成功的关键,对于猪等繁殖周期较长的大动物,则需要在实施动物实验前,在体外筛选出高效的sgRNA以避免时间和资源成本浪费。另外,如何高效获得阳性基因编辑单克隆细胞是目前尚待解决的难题。本研究建立了靶向猪基因组的sgRNA快速筛选方法,利用荧光载体富集基因编辑细胞,同时探索利用图案微阵列培养技术快速获得单克隆细胞的方法,在此基础上高效获得延胡索酰乙酰乙酸酶(Fah)基因编辑细胞,为后续生产作为人类肝细胞生物反应器的Fah基因敲除猪奠定基础。
- 高孟雨朱星龙王诗盛张炳琪张芸琳何宇婷周燕燕李顺杨光廖光能包骥步宏
- 金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A r10-11截短体蛋白基因片段的原核表达与免疫原性被引量：2
- 2018年
- 目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基因组序列中进行PCR扩增,对扩增产物进行纯化,连接T载体后转入大肠杆菌DH5α中进行克隆,提取重组后的质粒进行双酶切鉴定,并回收目的片段连接到pET-32a质粒中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,采用HIS蛋白纯化柱纯化截短蛋白FnBPAr10-11,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定,纯化后的FnBPAr10-11用于免疫小鼠[分为无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组、FnBPA组、FnBPAr10-11组],检测小鼠血清免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)水平、细胞因子水平、免疫保护率。结果 SDS-PAGE分析显示,表达后的蛋白相对分子质量约为33.1×103。FnBPAr10-11组与FnBPA组IgG抗体效价达1∶128 000,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FnBPAr10-11组的细胞因子水平与FnBPA组比较差异无统计学意义(P>0.05),与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。攻毒试验中FnBPAr10-11组的免疫保护作用在50%以上。结论成功构建了金黄色葡萄球菌Fn BPAr10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株,该截短蛋白免疫原性良好。
- 杨汐静陈晓婷刘道龙杨阳杨光
- 关键词：金黄色葡萄球菌免疫原性
- 高脂高胆固醇饮食诱导恒河猴代谢综合征的研究
- 目的动物模型是研究代谢综合征病理生理过程和新药开发的重要手段,但目前代谢综合征的动物模型主要以啮齿类为主,急需开发更能模拟人类疾病发生发展过程的大动物模型。本研究以幼年恒河猴为研究对象,通过高脂高胆固醇饮食诱导其糖脂代谢...
- 李新丽陈又南刘敬平杨光赵久茗廖光能史梅梅袁玉佳陆燕蓉程惊秋
- 文献传递
- 利用CRISPR/Cas9技术繁育基因修饰猪在医学领域的研究进展被引量：2
- 2018年
- 猪在解剖学、生理病理学、营养代谢和疾病特征等方面都与人类相似度较高,基因修饰猪现已是疾病发生机制、病理毒理研究、治疗药物评估等众多领域所需的重要动物模型。但是大型基因修饰动物模型生产难度大、步骤繁琐、耗时长、成本高昂。随着基因编辑技术的突破,规律性短重复回文序列簇(CRISPR)和CRISPR相关蛋白9(Cas9)构成的CRISPR/Cas9技术大大提高了基因突变效率,降低了基因修饰动物模型的造模成本,同时简化了步骤,推进了基因修饰猪的广泛应用。本文主要综述了基因修饰猪的生产方法以及利用CRISPR/Cas9技术生产人类疾病动物模型猪的研究进展。
- 高孟雨杨光包骥
- 高脂高胆固醇饮食诱导恒河猴代谢综合征的研究
- 李新丽程惊秋陈又南刘敬平杨光赵久茗廖光能史梅梅袁玉佳陆燕蓉
- 基于循证医学方法对国内外动物实验伦理培训方法的分析与总结被引量：1
- 2023年
- 目的总结国内外动物实验伦理培训的方法与经验,分析目前伦理培训面临的机遇和问题,探索适合我国动物实验研究现况的相关医学研究人员的伦理培训方法。方法在PubMed、Embase、中国知网和万方数据库检索2012年1月-2022年2月与动物实验伦理培训相关的文献,由2名研究者独立筛选文献、提取资料后进行分析。结果经过筛选共纳入44篇文献,其中中文文献19篇、英文文献25篇,涉及44个机构。通过对文献的分析可知,美英等发达国家涉及实验动物福利和伦理的法律相对完善,如美国的《动物福利法》、英国的《动物(科学程序)法案》、德国的《动物福利法》、日本的《动物福利和管理法》等,而国内则以行政法规为主,大多以管理条例进行约束;国内外均有部分机构参与动物实验的人员存在伦理意识参差不齐的现象;国内部分机构的培训时间比国外少;国内培训方法及内容有待完善。基于上述结果,结合实际经验,四川大学华西医院对原有的动物实验伦理培训体系进行了完善。结论国内各单位需要改进动物实验伦理培训方法,更加系统、科学地提高各阶段参与动物实验人员的意识与认知,并且加强伦理审查。
- 廖光能陈正举陈蕾杨光
- 关键词：动物实验动物福利动物伦理
- 诱导建立猴Ⅰ型糖尿病疾病模型过程中并发症及死亡病例病理学研究
- 目的：单次大剂量静脉注射链脲菌素(Ⅰ组:100 mg/kg，Ⅱ组：120 mg/kg)靶向性损伤正常猕猴胰岛β细胞，造成猕猴胰岛分泌胰岛素不足，严重者丧失分泌胰岛素功能，产生类似Ⅰ型糖尿病疾病的临床症状和病理变化。
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- 杨光陆燕蓉陈又南
- 关键词：并发症病理变化
- 文献传递
