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SEN病毒D亚型部分基因的克隆、表达和鉴定: 2005年; 目的获得序列正确的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因,并进行表达。方法用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-D ORF1 C-端基因,测序验证后,构建pQE30-SD重组表达质粒,并转化E.coliM15,进行IPTG诱导表达及Western blot分析。结果获得的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因序列正确,表达蛋白相对分子质量约为38 000。经Western blot证实能与阳性血清发生抗原抗体反应。结论已成功获得了SENV-D ORF1 C-端蛋白,为今后进一步研究奠定了基础。; 陈蕤穆士杰杜娟王全立; 关键词：SEN病毒基因克隆基因表达基因序列

SEN病毒中国分离株基因克隆及序列分析: 2003年; 目的 :测定SENV_D亚型中国分离株的基因组序列 ,并对其进行初步分析。方法 :根据国外已发表的SEN病毒基因序列设计特异性引物 ,应用套式PCR方法从一份非甲_非戊型 (non_A_E)肝炎患者血清中 ,分段扩增了包括SENV_D型所有编码区 (ORFs)长 3175bp的DNA片段 ,将其克隆到T载体后测序。结果 :测序结果经BLAST软件分析 ,与国外发表的 3株D型SEN病毒SENV_D(AX0 2 5 730 ) ,SENV_D(AB0 5 935 2 ) ,TTV(AB0 2 86 6 8)的核苷酸序列同源性分别为 90 % ,88%和 91% ;与 2株D型SEN病毒SENV_D(AX0 2 5 730 ) ,TTV(AB0 2 86 6 8)ORF1所编码蛋白的氨基酸同源性分别为 93%和 92 %。ORF1蛋白中含有Rep蛋白 (在病毒复制中起作用的一种蛋白 )的两个保守基序 ,此外还有一个保守的ATP GTP结合基序 (P_loop)以及若干个高度保守的蛋白激酶磷酸化位点。结论 :测定得到了SENV_D亚型中国分离株的基因组序列 ,有助于其检测方法及致病性的研究 ,并为研究SEN病毒的进化地位提供方便。; 杜娟王海平孟庆华李娅詹林盛王全立; 关键词：基因组病毒 SEN病毒聚合酶链反应

乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞在病毒清除过程中的作用被引量：1: 2011年; 在乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中,适应性免疫与病毒的致病和清除密切相关。一般认为,体液免疫产生的抗体可以清除外周循环的病毒颗粒,从而阻止病毒在宿主体内的传播,细胞免疫主要清除被感染细胞中的病毒。HBV特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在抑制HBV复制过程中发挥着重要的作用。CTL在肝内主要通过分泌γ干扰素抑制病毒,同时,当CTL识别HBV抗原后,HBV特异性CTL募集抗原非特异性炎症细胞对肝组织浸润,造成肝细胞的损伤。对CTL抗病毒作用进行深入研究,将为乙型肝炎的治疗开辟新的途径。; 梁声强杜娟詹林盛; 关键词：乙型病毒性肝炎细胞毒性T淋巴细胞 Γ干扰素

腺病毒转染法构建表达乙型肝炎病毒核心蛋白小鼠肝癌细胞系及其在乙肝疫苗评价中的应用被引量：8: 2013年; 目的构建一种可高效表达乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）核心蛋白（HBc）C57BL／6小鼠来源肝癌细胞系，并以其作为靶细胞评价乙肝基因疫苗在C57BL／6小鼠体内所引起的HBe特异性细胞毒性T细胞（CTL）的活性。方法以HBV全基因组为模板，采用PCR方法扩增HBe基因，插入AdEasy腺病毒穿梭载体，构建携带HBe蛋白的腺病毒穿梭载体AD—HBe，电转携带有腺病毒骨架质粒（Ad—Easy）的EcoliBJ5183感受态细胞，获得重组腺病毒质粒AD-CMV．HBc，经Pme，线性化处理后转染HEK293细胞进行包装得到相关的重组腺病毒，再感染C57BL／6小鼠来源肝癌细胞系Hepal-6。结果成功构建表达HBc蛋白的重组腺病毒，在体外对Hepal一6细胞的感染率几乎为100％，并且HBc蛋白得到高效表达。以此为靶细胞用于pVAX1-HBe基因疫苗免疫C57BL／6小鼠产生的CTL活性的体外检测。结论我们成功构建HBe蛋白表达的靶细胞系，对研究乙肝病毒核心抗原（HBcAg）所引起的细胞免疫反应及乙肝发病机理等方面有重要意义。; 苑振楠周欠欠闫虎杜娟詹林盛吴德全; 关键词：重组腺病毒

报告基因标记的可视化HBV小鼠模型的建立及其应用: 目的建立HBV转录调控序列介导荧光素酶表达及荧光素酶标记的HBV全基因组表达小鼠模型,通过活体荧光成像实时监测HBV的表达,为开展肝细胞特异性转录因子、细胞因子以及结合蛋白等因素在模型动物体内对HBV增强子/启动子活性调...; 詹林盛杜娟周勇周欠欠

丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶瞬时表达小鼠模型的建立被引量：2: 2011年; 目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依赖于有活性的NS3/4A在NS4A/B位点的切割。将含融合基因的质粒NS3/4A(△4AB)SEAP通过水动力转染技术转染到小鼠体内,检测小鼠血清中SEAP的活性,高活性的SEAP是该评价体系成立的证据。结果与结论:在瞬时表达NS3/4A的小鼠血清中检测到了高活性的SEAP,建立了可用于评价抗NS3/4A的小鼠体内瞬时模型。; 闫虎路遥杜娟贾帅争付秋霞彭剑淳周勇詹林盛; 关键词：丙型肝炎病毒

体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用: 本发明公开了一种体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用。其构建方法包括以下步骤：1)载体构建：构建包括HBV启动子、报告基因和HBV全基因组的重组表达载体；2)将步骤1)构建的重组表达...; 詹林盛杜娟梁声强

HBV病毒特异性CTL在病毒清除过程中的作用: 在乙型肝炎病毒感染过程中,适应性免疫与病毒的致病和清除密切有关。一般认为,体液免疫产生的抗体可以清除外周循环的病毒颗粒从而阻止病毒在宿主体内的传播,细胞免疫主要是清除被感染细胞中的病毒,而HBV特异性的细胞毒性淋巴细胞(...; 梁声强杜娟詹林盛; 文献传递

不同肝炎患者及献血人员中SENV-D感染流行病学调查: 2006年; 目的:了解SEN病毒D亚型在我国不同肝炎患者和献血人员中的感染情况。方法:采用巢式聚合酶链反应对收集的健康献血者和各型肝炎患者(包括甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者)进行SENV-D亚型DNA检测。结果:无偿献血者中SENV-D感染率为25.9%,急性甲肝患者中的感染率为14.5%,慢性乙肝患者中的感染率为46%,丙肝患者中的感染率为65%,在非甲-非戊型肝炎患者中的感染率为51.2%。结论:SENV可能与HCV和HBV具有一样的传播方式,但并不是肝病发生的原因。; 穆士杰陈蕤杜娟张献清; 关键词：病毒性肝炎流行病学巢式聚合酶链反应

体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用: 本发明公开了一种体内监测HBV特异性CTLs功能的报告基因标记的小鼠模型及其构建方法与应用。其构建方法包括以下步骤：1)载体构建：构建包括HBV启动子、报告基因和HBV全基因组的重组表达载体；2)将步骤1)构建的重组表达...; 詹林盛杜娟梁声强; 文献传递

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杜娟