李海龙
- 作品数：17 被引量：18H指数：3
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 术前中性粒/淋巴细胞比率与非转移性肾癌术后生存的相关性研究被引量：2
- 2015年
- 目的：评价术前外周血中性粒／淋巴细胞比率（NLR）与非转移性肾癌（T1～T4N0M0）术后生存的相关性。方法：回顾性分析2005年12月～2011年12月间在徐州医学院附属医院接受手术治疗的327例非转移性肾癌患者的临床资料：患者术前1天行血常规检查，进而获得NLR值。以此分析NLR与非转移性肾癌术后生存的相关性。再按NLR最佳截点将患者分为高NLR组和低NLR组，以z。检验分析NLR与各临床病理因素的相关关系。通过Kaplan-Meier法比较NLR分组对生存时间的影响，应用Log-rank进行检验。应用单因素和多因素Cox回归模型检测NLR对于总生存率和无病生存率的独立预测的意义。结果：327例非转移性肾癌患者外周血NLR为2．72±2．25。根据受试者工作曲线（ROC），1．7为NLR最佳截点。NLR与肿瘤大小存在统计学相关（x2=5．050，P=0．025），与病理类型、pT分期均不存在统计学相关。NLR高低分组对于总生存率（x2=7．339，P=0．007）和无病生存率（x2=6．419，P=0．011）的影响均具有统计学意义。多因素分析显示术前NLR对于总生存率（HR=1．674，95％CI=1．103～2．539，P=0．015）及无病生存率（HR-1．714，95％CI-1．092～2．691，P=0．019）具有独立预测的意义。结论：术前高NLR提示非转移性肾癌患者生存较差，有助于评估患者预后，可为制订个体化治疗措施提供参考。
- 张义静李海龙白津陈颜夙温儒民
- 关键词：总生存率无病生存率
- 大鼠Fas shRNA真核表达质粒的构建及其生物活性的鉴定
- 2012年
- 目的构建大鼠FasshRNA真核表达重组质粒，并检测其对NRK-52E细胞（大鼠肾小管上皮细胞）Fas基因的沉默效率，筛选出一个最有效干扰质粒。方法按照siRNA设计原则，在大鼠Fas基因mRNA上挑选4个干扰靶序列，再根据靶序列分别设计并合成两端含有酶切位点的总长度为64bp的shRNA转录模板DNA正、反义寡核苷酸链，并将其退火后克隆至空载体pSliencerTM3．1～H1 neo siRNA Expression Vector中，对其进行鉴定。用Lipofectamine LTX Reagent将pSilencer Fas（1～4）4个重组质粒转染至大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）内，以pSilencer—EGFP shRNA和pEGFP—N1质粒共转染做阳性对照，经过G418压力性筛选后，使用RT—PCR和蛋白免疫印迹法分析针对Fas基因构建的4个重组质粒的有效性，筛选出最有效的干扰质粒。结果pSilencer-Fas（1～4）shRNA及pSilencer—EGFPshRNA重组质粒测序结果与预期序列相同。RT—PCR及蛋白免疫印迹结果显示pSilencer—Fas4shRNA对Fas基因在mRNA水平和蛋白水平的抑制率均最高，分别达到（78．9±3．2）％和（64．5±4．62）％。结论利用RNA干扰技术沉默大鼠Fas基因，可以降低大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）Fas的表达。
- 李海龙温儒民薛松肖永双孙晓青
- 关键词：SHRNA移植免疫耐受
- 含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白的表达及其生物活性
- 2009年
- 目的获得含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽的白细胞介素（IL）-24突变体（RGD—IL-24）蛋白，研究其生物活性。方法用重叠聚合酶链反应（PCR）技术在IL-24cDNA序列中引入甘氨酸密码子GGC，构建RGD—IL-24eDNA，将其克隆入质粒pET28a（＋）获得pET28a／RGD—IL-24。pET28a／RGD—IL-24转化菌株BL21（DE3），采用亲合层析纯化蛋白，透析复性。SDS—PAGE电泳和Western blot鉴定RGD—IL-24蛋白。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测RGD-IL-24刺激外周血单核细胞（PBMC）产生IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ的能力来测定RGD—IL-24免疫活性。细胞黏附实验检测RGD—IL-24与多种肿瘤细胞结合特性。结果成功获得RGD—IL-24基因，并构建表达质粒pET28a／RGD—IL-24。表达的RGD-IL-24蛋白约占菌体总蛋白的30％，纯化后蛋白纯度超过90％。RGD—IL-24处理的人PBMC培养上清IL-6、TNF-α和IFN-γ浓度（ng／L）分别为（780．5±98．3、2399．1±113．2、2130．1±98．6），显著高于IL-24处理组（551．0±52．1、1982．5±138．2、1762．9±119．8）。黏附实验证实RGD—IL-24能增强与肿瘤A549、HeLa和ACHN细胞靶向结合作用。结论含RGD肽的RGD—IL-24蛋白免疫生物活性及与肿瘤细胞靶向结合能力较IL-24明显增强。
- 符炜徐为顾玉明张宝福李海龙韩正祥高超刘俊杰郑骏年
- 关键词：白细胞介素-24突变体蛋白肿瘤
- 共刺激分子B7-H1在肾透明细胞癌中的表达及意义
- 2009年
- 目的探讨共刺激分子B7-H1在人透明细胞癌组织中的表达及其意义。方法运用免疫组织化学ABC法检测B7-H1在45例肾透明细胞癌组织中的表达,并对其表达水平与临床病理参数之间的关系进行相关性分析。结果B7-H1分子在肾透明细胞癌组织中的阳性表达显著高于癌旁正常肾组织(P<0.05);B7-H1在肾透明细胞癌组织中阳性表达率为68.9%,与患者性别、年龄无关(P>0.05),而与病理分级、临床分期及是否转移显著相关(P<0.05)。结论B7-H1在肾透明癌组织中高表达,可能在肿瘤的发生、发展中起到一定作用,有望成为肾透明细胞癌免疫治疗的一个新靶点。
- 薛松李望温儒民刘俊杰李海龙
- 关键词：B7-H1免疫组织化学
- 多层螺旋CT血管成像在后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术中的应用被引量：1
- 2013年
- 目的:评价多层螺旋CT血管成像(MSCTA)在后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术中的应用。方法:对3例术前超声诊断肾血管变异和2例未进行血管超声检查的乳糜尿患者,在后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术前行MSCTA肾血管扫描,比较MSCTA发现和术中所见,评价MSCTA检查对手术的指导意义。结果:5例MSCTA显示的血管数目、走行完全与术中所见一致。在MSCTA的指引下,2例患者肾脏的正常血管和3例患者的主要血管、变异血管被快速定位,血管周围淋巴管被顺利结扎。5例患者均顺利进行后腹腔镜手术治疗,无肾血管损伤。无血管畸形患者平均手术时间(67.5±17.7)min,肾血管畸形患者平均手术时间(91.7±22.5)min。术后乳糜尿消失。结论:MSCTA对后腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术有重要的指导意义,特别是在肾血管存在变异的患者。
- 张成静陈仁富朱海涛李望薛松温儒民孙晓磊李海龙陈家存孙晓青
- 关键词：多层螺旋CT血管成像腹腔镜术肾蒂淋巴管结扎术
- 肿瘤Ki-67抗原HLA—A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定
- 2009年
- 目的鉴定Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位，为制备肿瘤疫苗提供依据。方法根据BIMAS和SYFPEITHI数据库对人Ki-67抗原CTL表位综合评分结果，合成7条候选肽。通过T2-肽结合实验检测候选肽与HLA—A2分子亲和力；通过酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测HLA—A2阳性CTL细胞分泌IFN-γ能力，评价候选肽免疫原性。结果合成的候选肽及阳性对照肽HIV-1pol476484纯度均超过95％。T2-肽结合实验结果显示280—288位置Ki-67氨基酸序列LQGETQLLV与HLA-A2分子结合力较强，其能够诱导特异性CTL活化。结论LQGETQLLV（280～288）是Ki-67抗原的HLA—A2限制性CTL表位。
- 徐为郭贞宋文哲李海龙孙晓磊姚元虎张宝福刘俊杰刘斌顾玉明高超郑骏年
- 关键词：KI-67抗原细胞毒性T淋巴细胞表位
- 腹腔镜下乳头植入式输尿管膀胱再植术临床效果观察被引量：3
- 2015年
- 目的：观察腹腔镜下乳头植入式输尿管膀胱再植术治疗输尿管下段狭窄及先天性巨输尿管的临床效果。方法：2008年8月-2014年3月对12例输尿管下段狭窄及先天性巨输尿管患者实施腹腔镜下乳头植入式输尿管膀胱再植术。9例为单侧输尿管末端狭窄（左侧5例,右侧4例）;3例（4条）为先天性巨输尿管。观察手术时间、术中出血量、术后住院时间、并发症及手术疗效。结果：12例患者均成功完成腹腔镜下乳头植入式输尿管膀胱再植术,手术时间平均136min（58-250min）,术中出血量〈50ml,住院时间5-7d,术后1个月拔除双J管。术后患者腰痛症状即消失,随访3-48个月,B超及IVU提示肾积水消退,排空良好,未再发生狭窄;膀胱造影未见输尿管反流。结论：腹腔镜下乳头植入式输尿管膀胱再植术治疗输尿管末端狭窄及先天性巨输尿管是一种安全、有效的微创治疗方法。
- 李海龙陈家存陈仁富李望温儒民
- 关键词：腹腔镜输尿管膀胱再植
- 肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67-siRNA的增殖腺病毒的构建
- 2009年
- 目的构建一种受肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67基因小干扰RNA（Ki67-E1B55kDsiRNA）的新型增殖腺病毒。方法将含有H1启动子的Ki67-siRNA表达框插入E1B55kD缺失增殖腺病毒载体pZD55中，构建pZD55-Ki67质粒。用G250启动子取代pZD55-Ki67的E1A启动子，构建双调控增殖腺病毒载体pZD—G250-Ki67。将pZD—G250-Ki67与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞，9—12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应（PCR）鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD—G250-Ki67。鉴定、扩增、纯化、测病毒滴度。结果成功构建G250启动子调控E1B55kD蛋白编码基因缺失的表达Ki67-siRNA的双调控增殖型腺病毒ZD—G250-Ki67。病毒滴度为2×10^11PFU／ml。结论成功构建的ZD—G250-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肾癌治疗奠定基础。
- 禚保彪李海龙刘俊杰徐为高超郑骏年
- 关键词：肾癌腺病毒
- 后腹腔镜下重复肾病肾、输尿管切除术的策略
- 目的:探讨腹腔镜下重复肾病肾切除术的手术技巧及其疗效.方法:常规建立人工腹膜后腔隙,打开肾周筋膜及脂肪囊,游离出重复肾的病肾输尿管,根据Meyer-Weiger定律,腹腔镜下一般下位肾输尿管在患者背侧上方而上位肾输尿管在...
- 李海龙温儒民陈家存李望王军起
- 含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽的白细胞介素-24突变体真核表达载体的构建及其体外抗肝癌作用
- 2009年
- 目的构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽的白细胞介素（IL）-24突变体（RGD-IL-24）真核表达质粒，观察其对肝癌细胞的抑制作用。方法利用重叠PCR技术在IL-24cDNA中插入GGT三个碱基，获得RGD—IL-24cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建pcDNA3．1／RGD—IL-24。将pcDNA3．1／RGD—IL-24及作为对照的pcDNA3．1／IL-24转染肝癌细胞HepG2，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测IL-24mRNA表达；Westernblot检测IL-24蛋白表达；噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖；FITC-AnnexinV染色检测细胞凋亡；Westernblot检测bax、bcl-2表达。结果测序证明pcDNA3．1／RGD—IL-24构建成功。RT—PCR、Westernblot证实转染pcDNA3．1／RGD—IL-24的肝癌HepG2细胞表达IL-24。pcDNA3．1／RGD—IL-24、pcDNA3．1／IL-24处理组HepG2细胞存活率分别为（0．382±0．064、0．563±0．038），凋亡细胞阳性率分别为（0．346±0．049、0．163±0．087），两组差异均有统计学意义。Westernblot证实pcDNA3．1／RGD—IL-24促进bax表达、抑制bel-2表达作用强于pcDNA3．1／IL-24。结论RGD-IL-24真核表达质粒不仅不影响IL-24表达，且能显著增强IL-24诱导肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤生长作用。
- 徐为张宝福杨志霞邸洁慧李海龙孙晓磊高超刘俊杰顾玉明韩正祥李望郑骏年
- 关键词：IL-24突变体RGD肽肝癌治疗
