李杨
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肠隐窝上皮细胞Myd88稳定沉默体外模型的建立及早期凋亡研究被引量：3
- 2012年
- 肠道炎症性疾病临床常见,发病率逐年上升而病因不清。现已证实Toll样受体4(TLR4)信号通路与肠道炎性疾病密切相关。髓样分化蛋白88(Myd88)是TLR4炎症信号通路上游关键调控点,对肠道炎性疾病的研究具有重要价值,但目前尚缺乏Myd88稳定调控表达的体外模型。本实验利用慢病毒三质粒包装系统,构建特异靶向Myd88基因RNA干扰(RNAi)病毒载体。采用改良病毒离心法结合离心孵育法(MVC-S)行肠隐窝上皮细胞(IEC-6)转导,采用Real-time PCR及Western blot检测Myd88mRNA及蛋白水平,Annexin V染色、流式细胞术检测Myd88沉默后对IEC-6细胞早期凋亡影响。结果显示正确构建的慢病毒shRNA载体,可通过改良MVC-S法成功转导IEC-6细胞,转导后的IEC-6细胞Myd88表达明显下调,同时早期凋亡减少。本实验成功构建了慢病毒载体介导的RNAi的Myd88稳定沉默细胞系,并总结分享了实验中的关键技术条件及要点,同时描述了沉默Myd88后IEC-6细胞早期凋亡明显减少的特征,为肠道炎性疾病的发病机制及靶向治疗研究提供了一个新的、稳定的、可重复的细胞模型。
- 包平倩李杨陈珂玲周斌刘斌李园周总光
- 关键词：RNA干扰慢病毒表达载体凋亡
