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朱妍蓓
朱妍蓓
作品数:
1
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供职机构:
南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
朱明
江苏省肿瘤防治研究所
范怡梅
南京大学医学院江苏省医学分子技...
王亚平
南京大学医学院江苏省医学分子技...
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作者
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朱妍蓓
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王亚平
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范怡梅
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朱明
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2013
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hMSH2和hMSH6蛋白相互作用体系的建立与hMSH2基因错义突变的功能评估
2013年
目的建立hMSH2和hMSH6蛋白相互作用体系,以评估检出的hMSH2基因错义突变的功能意义。方法应用基因克隆技术构建重组质粒pGADT7-hMSH2、pGBKT7-hMSH6及7个不同hMSH6结构域的重组pGBKT7质粒。通过定点诱变技术构建10个pGADT7-hMSH2突变质粒。将重组质粒共转化酵母AH109菌株,观察转化子在组氨酸缺陷型培养基上的生长状况。结果hMSH6蛋白的MutSⅡ-V、MutSⅢ—V结构域分别与hMSH2蛋白在酵母AH109中具有双杂交作用。以pGBKT7-hMSH6-MutSⅡ—V和pGADT7-hMSH2在酵母AH109的相互作用为基础建立hMSH2/hMSH6相互作用平台。与野生型hMSH2相比较,c.505A〉G、C.1168C〉T、C.1255C〉A、C.126IC〉A突变体在组氨酸缺陷的培养基上生长正常;C.1223A〉G、C.1886A〉G、C.2108C〉A、c.2516A〉G突变体生长缓慢;C.518T〉G和c.1664delA突变体不生长。结合文献中病例对照、氨基酸改变分析,判定C.518T〉G为病理性突变;C.1223A〉G、C.1886A〉G、C.2108C〉A、C.2516A〉G为疑似病理性突变;C.505A〉G、C.1168C〉T、C.1255C〉A、C.1261C〉A为正常变异。结论初步建立了hMSH2、hMsH6蛋白相互作用功能分析平台,并将其用于hMSH2基因错义突变的功能评估。
朱明
范怡梅
朱妍蓓
王亚平
关键词:
HMSH2基因
错义突变
酵母双杂交
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