方瑞
- 作品数：9 被引量：29H指数：4
- 供职机构：中山大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结直肠癌组织中成纤维细胞激活蛋白的表达及临床意义被引量：3
- 2012年
- 目的探讨成纤维细胞激活蛋白（FAP）在结直肠癌组织中的表达及其与各病理学指标之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测55例结直肠癌组织和50例正常结直肠组织中FAP的表达，观察阳性细胞在不同组织中的分布数量，结合肿瘤分期、有无淋巴结转移及不同浸润深度等病理学指标，评价FAP表达与结直肠癌病理特征的相关性。结果正常结直肠组织中几乎无FAP表达，少数癌细胞有微弱表达。FAP阳性细胞主要为结直肠癌间质组织中的肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）。TNMⅢ～Ⅳ期标本中FAP阳性细胞为（40．1±15．9）个，多于Ⅰ-Ⅱ期的（18．3±7．7）个（P〈0.01）；且阳性细胞数量与分期程度相关（r=0．544，P〈0．01）。淋巴结转移组中阳性细胞为（44．4±13．3）个，多于无淋巴结转移的（18．5±8．1）个（P〈0．01）；且阳性细胞数量与有无淋巴结转移相关（r=0．793，P〈0．01）。不同浸润深度T2、T1和T4组标本中FAP阳性细胞数分别为（25．2±8．9）、（32．4±19．3）和（29．2±16．5）个（P〉0．05）；阳性细胞数量与浸润深度无关（r=0．003，P〉0．05）。结论FAP在正常结直肠组织中无表达．而主要表达于结直肠癌组织中的CAFs中。FAP阳性细胞与结直肠癌的TNM分期及淋巴结转移相关。
- 崔博王绮雯方瑞杜军张继民
- 关键词：结直肠肿瘤成纤维细胞激活蛋白肿瘤相关成纤维细胞
- 高表达Snail蛋白诱导黑色素瘤EMT细胞模型的构建及鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的:构建稳定表达Snail蛋白的可用于肿瘤上皮-间质化研究的肿瘤细胞模型。方法:采用亚克隆方法从质粒pCMV6-mSnail中PCR扩增小鼠Snail基因,连接至表达质粒pL-tdTomato-Neo,筛选重组质粒并经双酶切及测序鉴定。构建成功的重组质粒pL-tdTomato-mSnail转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选稳定细胞株。采用荧光定量PCR和Western blot技术检测胞内Snail及上皮/间质标志物的变化。建立裸小鼠皮下移植瘤模型,活体成像系统观测移植瘤。结果:重组质粒pL-tdTomato-mSnail成功构建,其稳定转染株B16/dT-mSN胞体发出强烈红色荧光。胞内Snaill水平显著上调,E-钙粘蛋白下调,波形蛋白表达上调,呈现典型的上皮-间质化表型。结论:成功获得稳定高表达小鼠Snail蛋白的EMT细胞模型,且可用于体内外荧光成像观测,为研究Snail蛋白在介导肿瘤EMT过程中的生物作用提供了重要的实验工具。
- 方瑞郭强杜军
- 关键词：SNAIL黑色素瘤上皮-间质转化
- 稳定表达重组小鼠FAPα蛋白细胞株的构建被引量：1
- 2012年
- 采用RT-PCR方法从BALB/c胚鼠成纤维细胞克隆FAPα基因,将其连接至表达载体pTd-FL-N,转化Stbl3感受态。筛选重组质粒,经酶切、PCR检测及测序鉴定,证实表达质粒构建正确。将表达载体转染HEK293细胞,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术证实稳定表达FAPα细胞株构建成功。通过流式细胞术确定FAPα蛋白可定位表达于细胞膜上。
- 张欢方瑞黄思超杨倩之杜军蔡绍晖
- 成纤维细胞激活蛋白α与肿瘤的靶向治疗被引量：8
- 2008年
- 成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)是肿瘤相关成纤维细胞特异性表达的一种表面抗原,具有二肽基肽酶和胶原酶活性,在肿瘤的生长、浸润、转移中发挥重要作用。故以FAPα作为肿瘤基质标志物的病理诊断、肿瘤基因治疗或免疫治疗将成为可能。就近年来对FAPα结构特点、活性作用及在肿瘤诊治中的研究进展进行综述。
- 方瑞杜军陈宏远蔡绍晖
- 关键词：肿瘤相关成纤维细胞肽链内切酶靶向治疗
- Nodal诱导小鼠黑色素瘤B16细胞上皮–间质转化及体外迁移和侵袭被引量：2
- 2013年
- 考察转化生长因子-β家族成员Nodal蛋白诱导小鼠黑色素瘤B16细胞发生上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)及促进其迁移和侵袭能力的作用。该研究采用活性重组Nodal蛋白刺激体外培养的B16细胞,观察细胞形态变化,利用蛋白免疫印迹法及免疫荧光染色法检测EMT标志物的表达及定位。通过Transwell小室实验分析Nodal对B16细胞迁移和侵袭的影响。检测Nodal刺激后,AKT、ERK相关信号通路的活化状态,并考察Nodal受体抑制剂SB431542对Nodal诱导的细胞EMT过程及信号活化的抑制作用。研究结果显示,Nodal可引起B16细胞发生EMT,并具有时间和浓度依赖性。Nodal刺激后的细胞其迁移和侵袭能力都明显增强。此外,Nodal还可引起AKT、ERK信号通路的活化。以上作用均能被SB431542所抑制。该研究为深入研究Nodal在黑色素瘤恶性转化过程中的生物学作用和分子机制奠定了工作基础。
- 方瑞郭强张帆由振源杜军
- 关键词：NODAL上皮间质转化黑色素瘤
- 人源Nodal成熟肽的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2011年
- 目的:表达人Nodal成熟肽,免疫小鼠制备其多克隆抗体。方法:构建原核表达质粒pReceiver-hNodal,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His6-hNodal融合蛋白,融合蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后,回收融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。通过间接ELISA、Westernblot和免疫细胞化学染色和间接免疫荧光等方法检测抗体的效价和特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了与预期理论值大小相符的Mr约13 000的人Nodal成熟肽的融合蛋白,通过免疫小鼠制备的多克隆抗体效价高、特异性强。结论:成功制备了抗人Nodal成熟肽多克隆抗体,为进一步深入研究Nodal在肿瘤发生发展过程中的生物学功能奠定了基础。
- 李玲玲江冠民张革王昊方瑞杜军
- 关键词：原核表达纯化多克隆抗体
- Nodal信号调控与肿瘤的研究现状被引量：6
- 2012年
- 目的:总结Nodal及其信号调控与肿瘤发生、发展的关系,并探讨针对Nodal的抑制策略在肿瘤治疗中的应用价值。方法:以"Nodal、信号通路和肿瘤"等为关键词,检索2000-01-2011-12PubMed及CNKI期刊全文数据库。纳入标准:1)Nodal结构及生物学作用;2)胚胎发育及肿瘤发生中Nodal信号调控的区别;3)Nodal与肿瘤恶性度的相关性;4)抑制Nodal信号通路的肿瘤治疗策略可行性。根据纳入标准,符合分析的文献40篇。结果:Nodal在肿瘤组织重新高表达,其信号参与了肿瘤发生、血管生成和侵袭转移等进程,并受到其他信号通路的调控。Nodal在肿瘤的发生、发展中扮演重要角色,但其机制有待明确。结论:深入探究Nodal在胚胎发育和肿瘤发生过程中功能上的区别及相似之处,阐明Nodal相关信号通路及其中的关键分子,可能会为恶性肿瘤的临床诊治提供新靶点和新思路。
- 方瑞杜军
- 关键词：肿瘤NODAL信号转导转化生长因子-Β
- 小鼠结直肠癌模型及其体内示踪技术研究进展被引量：1
- 2015年
- 小鼠结直肠癌(colorectal cancer,CRC)模型被广泛应用于CRC的病理机制与治疗策略研究以及抗癌新药筛选。体内示踪技术是CRC模型研究的前提条件,它能最大程度地实现对实验动物的无创监测,对于疾病的动态研究意义重大。目前,常用的小鼠CRC模型主要有3种:诱发型、移植型和基因修饰型。本文侧重于介绍移植型与近年来较为成功的Apc、Smad3和K-ras基因修饰模型。相应地,体内示踪技术也在不断改进,研发了一些新型的标记物,并且可以联用多种成像方式。本文对不同的成像方式结合标记物在小鼠CRC模型上的应用实例进行讨论,以期为相关的基础性研究提供参考。
- 陈奕杰方瑞杜军
- 关键词：结直肠肿瘤诊断显像小鼠
- 稳定高表达和干扰Nodal基因黑色素瘤细胞株构建及EMT表型鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的:构建稳定过表达及稳定干扰Nodal的黑色素瘤细胞B16细胞株,并鉴定其EMT表型,用于研究Nodal诱导黑色素瘤EMT的现象及机理。方法:将过表达小鼠Nodal基因的质粒pL-tdTomatomNodal,及携带有干扰Nodal基因序列的shRNA质粒pGFP-V-RS-Nodal,分别转染B16细胞。通过抗性筛选富集,阳性克隆挑选及扩大培养,获得稳定转染细胞株B16/dT-mNodal及B16/sh-Nodal。通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胞内Nodal的过表达及敲除情况和EMT标记物的表达情况。结果:两株细胞均构建成功,B16/dT-mNodal细胞株发出强烈红色荧光,胞内Nodal水平上调明显,并呈现间质细胞特性;B16/sh-Nodal细胞株发出强烈绿色荧光,胞内Nodal水平下调明显,并呈现上皮细胞特性。结论:成功构建稳定过表达Nodal及稳定干扰Nodal的B16细胞株,并构建Nodal影响B16细胞EMT过程的模型,为研究Nodal在黑色素瘤EMT过程中的作用提供了重要的实验工具。
- 权美玉郭强张坤水方瑞李翠琳杜军
- 关键词：NODAL黑色素瘤基因沉默EMT
