- 蛋白质结构与功能的统一及对人类的启示
- 1990年
- 一、相似的结构表现祖似的功能生物体内存在着成千上万种蛋白质,每一种蛋白质都担负着不同的功能,每一种蛋白质都具有其独特的结构基础,胰岛素在体内可促进葡萄糖进入细胞内,促进葡萄糖的代谢。当胰腺β细胞发生病变时,胰岛素的产生发生障碍,这种51个氨基酸构成的蛋白质所担负的功能。
- 张德震苏成芝
- 关键词：蛋白
- 重组人肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素αA(IFNαA)融合蛋白的构建及表达被引量：10
- 1991年
- 本文采用定位诱导缺失突变技术,经137个单核苷酸缺失,将串联的重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)和重组干扰素αA(rhIFNaA)基因融合成编码单一蛋白的基因。融合基因在大肠杆菌表达后,活性检测证实,存在一旣具有TNF抗肿瘤、又具有IFN抗病毒双重活性的蛋白质。融合蛋白的活性较TNF和IFNαA分别低24倍和15倍。分子筛分析证实,融合蛋白分子量大于25kD。
- 智刚侯云德张德震金奇周园李玉英张智清胡玉文苏成芝王克为
- 关键词：肿瘤坏死因子定位突变
- 采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子被引量：8
- 1990年
- 肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42×10~8u/L菌液。SDS-PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22.8%。抗肿瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。SD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。
- 张德震吴淑华张智清金奇赵新华赵小侠苏成芝侯云德
- 关键词：肿瘤坏死因子
- 人重组肿瘤坏死因子增强感染疟原虫小鼠腹腔渗出细胞的吞噬功能
- 1990年
- 单核巨噬细胞在疟疾细胞免疫中起着极为重要的作用。当单核巨噬细胞活化后,可释放单核因子,如IL—1,肿瘤坏死因子(TNF)。这些因子除了协同调节淋巴细胞功能,还可反馈作用于单核细胞,调节其免疫功能。本文目的是探讨TNF对感染疟原虫小鼠腹腔渗出细胞(PEC)吞噬功能的影响。 1 材料和方法 ICR小鼠,雌性。
- 何革李霖张德震
- 关键词：肿瘤坏死因子疟原虫
- 重组人r干扰素的纯化及其N端氨基酸序列分析被引量：4
- 1991年
- 本文对两个重组人γ干扰素高效表达株pIFN-γ及PBVIFN-γ的表达产物进行了纯化并对纯化的γ干扰素进行了活性鉴定及N端氨基酸序列分析。采用连续沉淀的方法对高表达菌株pBVIFN-γ及低表达菌株pIFN-γ,裂解液进行初步纯化,然后应用单克隆抗体亲和层析方法进行纯化,分别可纯化14倍与933倍,均达电泳纯,回收率分别为25％和30％,比活性达7.56×10~7U/mg蛋白。SDS-PAGE电泳上γ干扰素分子量约17.5kD。测定了纯化的γ干扰素N末端19个氨基酸序列,与由其DNA序列推导的氨基酸序列完全一致,确认了本研究所表达、纯化的γ干扰素达到了较高纯度。本方法为γ干扰素的批量生产奠定了基础。
- 张德震金冬雁吴淑华智刚张智清侯云德苏成芝
- 关键词：干扰素纯化氨基酸分析
- 两种寡核苷酸基因定位诱导突变方法的比较
- 1991年
- 作者对两种寡核苷酸基因定位诱导突变方法进行了比较.在192个单核苷酸缺失突变中,含U单链基因突变系统和经典噬菌体M13单链突变系统均准确完成缺失突变,两种方法的突变年率分别为6％和1％左右.比较可以发现,含U单链突变系统具有突变率高,易于筛选,突变位点准确等优点,但操作复杂,成本高,需特殊试剂和菌种;噬菌体M13单链突变系统则方法简便,成本低,周期可缩短至1 2d,易于一般实验室使用,缺点是突变率较低,筛选困难.
- 智刚张德震苏成芝
- 关键词：核苷酸基因
- 人肿瘤坏死因子与人γ干扰素重组双功能融合蛋白的研制被引量：1
- 1991年
- 肿瘤坏死因子与γ干扰素具有非常相似的生物学活性,并在一些主要的生物活性方面表现有较强的协同作用。本文采用寡核苷酸指导下的定位缺失-插入体外基因突变技术,删除了干扰素与肿瘤坏死因子串联基因之间的非编码区,去徐了γ干扰素的翻译终止信号,插入了一个人工设计的连接肽,使γ干扰素与肿瘤坏死因子基因在不改变读码框架的条件下融合起来,并在大肠杆菌表达系统中表述了兼有γ干扰素和肿瘤坏死因子功能的融合蛋白。
- 张德震吴淑华智刚张智清金奇金冬雁赵小侠侯云德苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子Γ干扰素
- 肿瘤坏死因子α的活性测定与放线菌素D的作用被引量：3
- 1991年
- 作者比较了检测肿瘤坏死因子α生物学活性的几种方法,认为直接在镜下观察肿瘤坏死因子α对L929细胞的杀伤作用最为简捷,但客观性较差。同位素标记法敏感准确,可靠安全,但操作较复杂且易受污染。中性红染色检测结果与实际细胞病变程度不相符。结晶紫染色法操作简单,能客观反映镜下所见的细胞病变情况,并与同位素标记法所得结果一致,可代替其它方法作为肿瘤坏死因子α的常规检测方法。放线菌素D可增加L929细胞对肿瘤坏死因子α细胞毒性的敏感性,在检测系统中加入微量放线菌素D(0.5mg/L),可使检测系统敏感性增加1000倍。
- 张德震智刚苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子活性检测放线菌素D
- 人α-型肿瘤坏死因子cDNA在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 1991年
- 人α-型肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)可以在体内或体外特异地杀伤多种肿瘤细胞,并同时具有抗病毒感染及免疫调节活性,是一种非常有前途的抗肿瘤及抗病毒生物制剂。最近,国外用基因工程技术将TNF-α基因克隆并在大肠杆菌及酵母细胞中表达成功。目前,人们正致力于提高其在大肠杆菌中表达产量的研究。据此,我们构建了P_L启动子控制的TNF-α cDNA表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高水平表达。
- 张劲翼陈苏民张德震王成济沈利群金伯泉黄传书
- 关键词：肿瘤坏死因子基因表达
- 重组人乙型肝炎核心抗原昆虫杆状病毒表达载体的构建
- 1990年
- 作者利用寡核苷酸定位诱导突变技术,将重组的人乙型肝炎核心抗原(HBcAg),插入丫蚊夜蛾核多角体蛋白病毒,表达载体pAc360的-35位BamH 酶切位点,经突变缺失多角体蛋白基因调控区和HBcAg起始码ATG间32个非编码核苷酸序列,获得一个与自然核多角体蛋白基因结构形式相同的表达载体,即核多角体蛋白基因调控区的-1位紧连核心抗原的起始码ATG.
- 智刚胡裕文张德震金奇侯云德容敏清苏成芝王克为
- 关键词：乙型肝炎核心抗原昆虫杆状病毒
