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Sanger测序法确证硫代修饰反义脱氧寡核苷酸的序列被引量：2: 2004年; 目的 :建立一种简便、可靠的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸序列确证方法 ,为反义药物的质量控制及新药研究与开发奠定基础。方法 :选择含有待测反义脱氧寡核苷酸序列在内的一段靶基因为模板 ,以待测序的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸作为下游引物 ,同时在其上游设计一条引物 ,进行PCR扩增 ,使待测序的反义序列以修饰形式掺入到PCR扩增产物中 ;以上述掺入反义序列的PCR扩增产物为模板 ,利用Sanger双脱氧链终止测序法对其进行自动序列分析。结果 :该方法可对不同长度硫代修饰的反义序列进行测定 ,并且可有效地检测出合成过程中产生的突变和缺失序列 ,与质谱法相比 ,仪器和试剂更普及 ,方法易于掌握且测序成本低 ,用样量少。结论 :该方法可用于硫代修饰反义脱氧寡核苷酸药物的序列确证。; 陈苏红鲁丹丹张嵬王升启; 关键词：反义寡核苷酸

硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的临床前研究: 以hTERTmRNA为靶点的反义核酸抗肿瘤候选药物癌泰得(序列为ACTCACTCAGGCCTCAGACT)在体内、外水平表现出良好的抗肿瘤活性。作为新药研发的候选化合物，其生产、体外活性评价和药代动力学研究是临床前研究必...; 张嵬; 关键词：硫代反义寡核苷酸癌泰得药物代谢动力学抗肿瘤药物; 文献传递

硫代反义寡核苷酸质量控制方法的研究进展被引量：1: 2005年; 综述了高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、质谱(MS)和核磁共振(NMR)在硫代反义寡核苷酸质量控制中的应用。硫代修饰的反义寡核苷酸可以抑制基因的表达,在病毒感染和癌症治疗方面有着重要用途。药物要用于临床,必须对活性成分和生产相关的杂质进行鉴别、检查。对于硫代寡核苷酸,由于其结构特殊,必须综合运用包括HPLC ,CE ,MS和NMR在内的多种分析手段控制其质量。HPLC和CE技术用于对杂质和活性成分进行定性、定量分析;NMR可以精确地确定硫代产物的含量;MS则能够在测定硫代寡核苷酸分子量的同时确认其序列的正确性。; 张嵬王升启; 关键词：硫代反义寡核苷酸高效液相色谱毛细管电泳质谱核磁共振

毛细管凝胶电泳法测定血浆中的癌泰得被引量：9: 2005年; 为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法.样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为内标,采用毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得的含量.结果表明,毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的线性范围为12.5～400 mg/L(r=0.999 8),日内、日间的相对标准偏差分别为0.398% ～2.46% 、2.75% ～6.07% ,回收率为99.53% ～102.1% .毛细管凝胶电泳法用于血浆中反义硫代寡核苷酸的含量测定具有良好的准确性、稳定性和重现性.; 张嵬杨秉呼梁乾德鲁丹丹林汝仙王升启; 关键词：反义寡核苷酸癌泰得药代动力学

重组SARS病毒N蛋白可与SARS患者血清发生特异反应被引量：2: 2004年; N蛋白是SARS CoV病毒基因组编码病毒核衣壳蛋白 ,它不同于现已知的任何蛋白质 .对它的深入研究对揭示SARS -CoV的致病机理和疫苗及诊断试剂的研制有重要意义 .灭活的病毒经逆转录后 ,用根据已知的病毒的基因组序列所设计的引物PCR扩增N蛋白基因 .扩增出的基因经序列分析表明和已知的序列完全一致 ,共编码 4 2 2个氨基酸残基 .将N蛋白基因克隆入原核表达载体pET2 8a构建成表达质粒pET2 8a N .表达质粒转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,并用IPTG诱导后 ,获得了高表达N蛋白的重组菌株 .目的蛋白经一步金属离子螯合层析纯化后获得了纯度超过 90 %的样品 .Western印迹及ELISA分析表明 ,SARS患者体内有特异性的针对N蛋白的抗体 ,并具有较高的特异性 .这为临床上诊断SARS患者提供了新方法。; 张士猛陈苏红张敏丽鲁丹丹张嵬杜清友王升启; 关键词：SARS 冠状病毒基因克隆核衣壳蛋白血清严重急性呼吸道综合症

硫代反义寡核苷酸药物癌泰得纯化工艺的建立: 2005年; 目的建立硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的大规模纯化方法。方法利用DMT的疏水性,在SOURCE15Q为填料的离子柱上预先用高盐缓冲液洗脱不带DMT基团的合成失败序列,然后直接在柱上用0.4%TFA切割,脱DMT保护后,使用盐浓度梯度分离硫代不完全片断和少量的(n-x)片断,从而获得纯品。结果以290nm为检测波长,流速为382cm·h-1,载量为12mg·g-1填料的条件下,平均产品收率为83.40%,质量平衡回收率为98.20%,产品终纯度可达98.23%。结论建立的方法能够有效纯化硫代反义寡核苷酸药物癌泰得,并可进行大规模纯化。; 张嵬梁乾德王晓博丁雨林汝仙王升启; 关键词：硫代反义寡核苷酸癌泰得高效液相色谱法

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张嵬