张克忠
- 作品数：13 被引量：105H指数：7
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科委科技攻关项目国家高技术研究发展计划上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 牛β-酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中的表达调控被引量：8
- 1998年
- 构建牛β 酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子 (hFⅨ )乳腺组织特异性表达载体pCⅨm,pCiⅨ ,pCⅨ和报告基因 (LacZ)乳腺表达载体 pCiLacZ ,pCLacZ ,利用Stearylamine(SA)阳离子脂质体包埋 5种载体 ,通过尾静脉注射的方法直接转染哺乳期母鼠的活体组织 .在DNA ,mRNA以及蛋白质水平对实验小鼠的检测结果表明 :转染处理后hFⅨ基因和LacZ基因在小鼠乳腺获得表达 ,hFⅨ蛋白在乳汁中的最高分泌表达量为 80 .2 8ng/mL ,其中 85 %以上已经羧基化并具有生物学活性 ;对 5种载体表达调控的研究证实牛β_酪蛋白基因 5′端 2 .0kb的片段能够驱动人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中分泌表达 ,β_酪蛋白基因内含子 1能够提高Ⅸ因子基因在乳腺组织中的表达水平 ,并能影响该基因表达的组织特异性 ;和hFⅨcDNA相比 ,hFⅨ基因自身的内含子 1能够提高该基因在活体乳腺组织中的表达水平
- 张克忠陈立卢大儒黄伟达薛京伦邱信芳
- 关键词：Β-酪蛋白基因乳腺组织血友病B
- 重组腺病毒介导的人凝血Ⅸ因子cDNA在奶山羊乳腺中的分泌表达被引量：2
- 1997年
- 利用含ｈＦＩＸｃＤＮＡ和腺病毒片段的质粒ｐＡｄＣＭＶｈＦＩＸ与质粒ｐＪＭ１７共转染２９３包装细胞，制备含ｈＦＩＸ的重组腺病毒颗粒，经纯化、浓缩后通过直接转染活体奶山羊乳腺小叶的方法，建立了ｈＦＩＸ蛋白的乳腺表达系统。转染处理４天后，ｈＦＩＸ蛋白在羊奶中的最高表达量为２１ｎｇ／ｍｌ乳汁，活性检测表明乳汁中的人凝血ＩＸ因子蛋白８０％以上具有生物学活性。此研究结果证实了人凝血ＩＸ因子全长ｃＤＮＡ在奶山羊乳汁中分泌表达的可行性，同时也为验证外源基因在奶山羊乳腺组织中的分泌表达提供了一个快速检测系统。
- 张克忠卢大儒王琪薛京伦邱信芳黄英李华李兵岩曾溢滔黄淑帧
- 关键词：重组腺病毒
- 乳腺生物反应器的基础研究──载体构建,检测及反应器的建立方法被引量：11
- 1997年
- 乳腺生物反应器的研究和开发是近年生物工程领域的研究热点。乳腺特异性表达调控的研究和表达载体的构建是该工作的基础和关键。本文介绍了乳腺蛋白基因表达调控的研究现状，外源基因乳腺特异性表达载体构建策略以及乳腺生物反应器建立方法的研究进展。
- 张克忠邱信芳
- 关键词：乳腺生物反应器生物工程
- 人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器的研制被引量：12
- 1998年
- 为了建立人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器，以MCK增强子，β－actin启动于控制hFIX小基因（minigene）表达顺序，反向插入G1Na框架，构建复制缺陷反转录病毒载体，并制备重组反转录病毒颗粒；以CMV启动子，hFIXcDNA和腺病毒框架构建腺病毒载体pAdCMVhFIX，与质粒pJM17共转染包装细胞制备合hFIX基因的重组腺病毒颗粒．两种病毒颗粒分别通过直接转染活体奶山羊乳腺组织，建立了hFIX蛋白的乳腺表达系统和快速检测系统．另外，利用小鼠MAR（matrixattachmentregion）元件，牛β－Casein基因，人凝血Ⅸ因子小基因和cDNA构建了乳腺组织特异性表达载体．以Stearylamine（SA）阳离子脂质体介导、尾静脉注射的方法转染哺乳期雌性小鼠的活体组织，建立Ⅸ因子表达的快速检测系统，并研究了β－casein基因，hFIX基因intron1对hFIX基因在乳腺组织中表达调控的作用．在此基础上将筛选得到的pMCIXm表达载体通过显微注射技术注人小鼠和奶山羊受精卵细胞，制备6只转基因小鼠和5只转基因奶山羊．其中在2只转基因小鼠和1头奶山羊乳汁中测得hFIX蛋白的表达并具有凝血活性．
- 邱信芳张克忠卢大儒薛京伦
- 关键词：乳腺生物反应器转基因动物
- 乳汁中分泌有活性的人凝血因子Ⅸ的转基因羊的研制被引量：32
- 1998年
- 黄淑帧陈美珏黄英张克忠李华卢大儒陆建英陈云弟邱信芳薛京伦曾溢滔
- 关键词：乳汁转基因羊血友病B
- 人凝血因子Ⅸ乳腺生物反应器研究
- 张克忠
- 关键词：乳腺生物反应器转基因动物
- 建立外源基因乳腺组织特异性表达快速检测系统的探索被引量：5
- 1997年
- 乳腺生物反应器研制是近年来生物工程领域的研究热点，有效的乳腺组织特异性表达载体的构建则是该工作的关键。为了验证外源基因乳腺组织特异性表达载体构建的合理性和有效性，我们实验室探索利用重组逆病毒（retrovirus）、重组腺病毒（adenovirus）和SA脂质体（SAliposome）为介导，将外源基因及其表达构件导入活体奶山羊的乳腺组织，建外源基因乳腺组织表达的快速检测系统；取得了较为理想的效果。
- 张克忠卢大儒邱信芳薛京伦
- 关键词：乳腺组织特异性表达遗传学技术生物工程
- 反转录病毒介导的人凝血因子IX小基因在奶山羊乳腺中的分泌表达被引量：7
- 1997年
- 通过受精卵显微注射胚胎移植建立哺乳动物乳腺生产系统是近年来生物工程领域的研究热点,但该工作周期长、成本高、难度和工作量都很大.1994年Johanna等人曾经报道以反转录病毒作载体将hGH(human growth hormone)cDNA导入山羊乳腺组织并获得表达.但是由于病毒LTR控制下的hGH基因的表达在活体动物乳腺组织内受到一定程度的抑制,因此表达水平比较低,持续时间短.我们以微小MCK(Muscle creatine kinase)增强子,β-actin启动子控制hFⅨ(human clotting factorⅨ)小基因(minigene)表达顺序反向插入GINa框架,构建为复制缺陷反转录病毒载体.首次通过反转录病毒直接转染活体奶山羊乳腺小叶和乳腺导管导入的方法建立了hFⅨ蛋白的乳腺表达系统.hFⅨ蛋白在羊奶中的最高表达量为47.9ng/mL乳汁,其中1头奶山羊2个月后表达量仍维持在12ng/mL乳汁.Western
- 张克忠包云卢大儒薛京伦邱信芳黄英李兵岩李华黄淑帧曾溢滔
- 关键词：人凝血因子IX反转录病毒乳腺山羊
- 人凝血Ⅸ因子乳腺特异性表达载体在离体细胞和小鼠乳腺组织中表达的初步研究被引量：6
- 1998年
- 以小鼠MAR（matrixattachmentregion）元件，牛β－酪蛋白（β－casein）基因5＇端2．0kb调控顺序，人凝血Ⅸ因子小基因（hFIXminigene）构建乳腺组织特异性表达载体，表达载体和质粒pSV－neo共转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO），兔皮肤纤维细胞（RSF）和人胚肾上皮细胞（293细胞）．发现hFIX基因在CHO细胞中获得低水平表达，最高表达量为7．2ng／ml．在皮肤成纤维细胞中的表达量低于2ng／ml．在293细胞中没有表达．表达载体用stearylamine（SA）脂质体包埋后尾静脉注射哺乳期小鼠，hFIX蛋白在小鼠乳汁中表达水平高达87．34ng／ml．
- 张克忠崇松陈立卢大儒薛京伦邱信芳
- 关键词：乳腺组织基因表达
- 恩他卡朋添加治疗症状波动的帕金森病的随机、双盲、安慰剂对照临床研究被引量：6
- 2005年
- 目的:探讨添加恩他卡朋治疗PD患者剂末现象的疗效和安全性。方法:40例伴有剂末现象的PD患者进行随机、双盲、安慰剂、平行分组临床对照试验。根据患者日记记录的"开"、"关"期时间、UPDRS各部分评分、研究者总体评估变化量表和左旋多巴每日剂量来评定疗效。结果:恩他卡朋治疗12周时能显著延长"开"期时间、缩短"关"期时间,降低UPDRS评分,减少每日左旋多巴用量,研究者主观感觉65%的患者病情好转,与安慰剂组相比差异有显著意义。不良事件的发生率与安慰剂组相比差异无显著意义。结论:添加恩他卡朋治疗伴有剂末现象的PD患者安全、有效。
- 丁正同王坚邬剑军蒋雨平刘楠张克忠
- 关键词：双盲UPDRS帕金森病左旋多巴
