孔聪聪
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。
- 赵妍孔聪聪张晓敏崔红玉石星明赵晓岩薛美胡顺磊闫帅牛秀杰李巧玲王玫王云峰
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒GB基因TAQMANREAL-TIMEPCR
- 鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白多克隆抗体的制备及初步应用被引量：2
- 2014年
- 以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。用ELISA检测抗体效价为1∶104。Western-blot分析结果表明,制备的家兔抗-ILTV gG抗体能与纯化的gG蛋白发生特异性反应,且能检测到内源性gG蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,制备的家兔抗ILTV-LJS09gG蛋白的多克隆抗体分别能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298株反应,特异性良好。
- 孙永珍赵妍孔聪聪崔红玉王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒原核表达多克隆抗体间接免疫荧光试验
- 三株传染性喉气管炎病毒全基因组序列测定及分析
- 鸡传染性喉气管炎（ILT）是由鸡传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）引起的鸡的急性上呼吸道传染病，感染鸡的死亡和产蛋下降可造成严重的经济损失。ILT呈世界范...
- 孔聪聪
- 关键词：传染性喉气管炎病毒全基因组
- 文献传递
- 一株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及TK基因分析被引量：8
- 2012年
- 黑龙江省牡丹江市某养鸡场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。本研究利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的567 bp大小片段;将发病鸡喉头及分泌物处理后接种鸡胚,在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上形成痘斑。病毒接种鸡胚肾细胞48 h后电镜下可以观察到典型的疱疹病毒粒子形态,并且该分离株能够与ILTV单克隆抗体发生特异性反应。动物回归试验显示,感染的SPF鸡出现典型ILT症状,并能够从发病鸡体内重新分离到ILTV,由此判定该分离株为ILTV,并将其命名为MDJ0442。根据NCBI登录的ILTV序列(HQ630064)设计引物,以MDJ0442基因组为模板,PCR扩增TK的基因片段,进行测序和序列分析。结果表明,与其他ILTV参考病毒株相比,TK基因的核酸同源性为99.62%。本研究可以为ILTV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。
- 孔聪聪赵妍张晓敏崔红玉薛美胡顺磊闫帅李巧玲牛秀杰王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒TK基因
- 禽传染性喉气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 为制备抗鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gD的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达gD重组蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合筛选获得一株稳定分泌抗ILTV gD蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚型经鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够识别ILTV。ILTV gD蛋白的MAb的制备,为ILTV检测方法的建立奠定了基础。
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- 关键词：传染性喉气管炎病毒原核表达单克隆抗体
- 鸡传染性喉气管炎病毒(江苏株)的分离与初步鉴定被引量：3
- 2012年
- 本研究从江苏省某养鸡场采集临床疑似鸡传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis,ILT)的病鸡喉头气管,接种鸡胚绒毛尿囊膜分离病毒,命名为LJS091151。以分离毒人工感染SPF鸡,于攻毒后d3出现了ILT的典型临床症状,剖检亦可见喉头气管黏膜充血肿胀、消化道空虚、黏膜充血等病理变化。根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitis virus,ILT)gB、TK基因保守序列设计2对引物对分离株基因组DNA进行扩增和序列测定。序列分析表明,获得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank发表的序列相似性均在99%以上,证明了分离株LJS091151为鸡传染性喉气管炎病毒。
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- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒基因分析
