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截短形式弓形虫SAG1抗原在大肠杆菌中的可溶性高效表达、纯化及免疫反应性鉴定被引量：15: 2004年; 目的在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫SAG1基因的截短片段,并进行纯化及免疫反应性鉴定。方法利用NcoⅠ、HindⅢ双酶切,从本室建立的pET-30a(+)-SAG1重组质粒中获取SAG1基因的截短片段,并将目的片段连接到经同样双酶切的质粒pET32a中,构建表达重组质粒pET-32a(+)-trSAG1。将重组质粒转入E.coliBL21中并进行诱导表达。表达蛋白经Ni-NTA agarose纯化后, Western-blotting分析其免疫反应性。结果成功构建重组质粒pET-32a(+)-trSAG1 ,通过IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组SAG1蛋白,相对分子质量40 000,Western-blotting结果显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性,ELISA试验表明重组SAG1蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别。结论在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达了弓形虫SAG1基因的截短片段,表达蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别,有望成为一种有价值的诊断抗原。; 言慧李华周晓红吴昆陈晓光; 关键词：弓形虫大肠杆菌可溶性纯化

弓形虫ROP2基因的体外扩增、克隆及在大肠杆菌中的表达: ＜正＞目的构建弓形虫棒状体蛋白（ROP2）基因重组质粒并在大肠杆菌中表达,用于寻找弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,将上、下游引物分别引入EcoR I,SalI酶切位点,...; 吴昆陈晓光李华彭鸿娟; 文献传递

弓形虫ROP2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2004年; 目的 :构建弓形虫棒状体蛋白 (ROP2 )基因重组质粒并在大肠杆菌中表达 ,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法 :根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段 ,再克隆到pGEX 4T 1质粒 ,重组质粒经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序 ;重组质粒在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行ITPG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE及WesternBlot分析。结果 :ROP2基因PCR产物大小与预期相符 ,约 1 0 4 3bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合 ;SDS PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为 5 5kDa ,表达产物约占菌体总蛋白1 7% ,具有一定的免疫反应性。结论 :克隆并表达了弓形虫ROP2基因。; 吴昆陈晓光支国舟; 关键词：刚地弓形虫基因克隆大肠杆菌 ROP2

弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建被引量：10: 2002年; 目的　构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR　I、Not　I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果　ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。; 吴昆陈晓光李华支国舟; 关键词：弓形虫体外扩增真核表达重组质粒 DNA疫苗

弓形虫ROP2基因的体外扩增及克隆被引量：1: 2001年; 目的　构建弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )基因重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段 ,插入pGEX 4T 1质粒 ,转化大肠杆菌TG1感受态细胞 ,经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序。结果　ROP2基因体外扩增产物大小约 10 43bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究打下了基础。; 吴昆陈晓光李华彭鸿娟; 关键词：刚地弓形虫克隆 PCR

弓形虫SAG1基因截短片段的克隆、可溶性表达及活性鉴定: ＜正＞目的:获取弓形虫主要表面抗原SAG1的重组表达质粒及菌株,使SAG1基因片断在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,并对表达蛋白进行初步纯化和鉴定。方法:本室已建立了弓形虫主要表面抗原SAG1的pET-30a-SAG1重...; 言慧陈晓光李华周晓红吴昆; 关键词：弓形虫纯化; 文献传递

紫外线照射前后日本血吸虫尾蚴抗原的初步分析被引量：9: 2002年; 目的探讨日本血吸虫尾蚴经紫外线(UV)照射后抗原成分的改变。方法日本血吸虫尾蚴经UV(400 μW/cm2)照射1 min 后,取其可溶性抗原经照射尾蚴抗原(UVCA)与未经照射的尾蚴可溶性抗原(NCA)同步进行SDS-PAGE和免疫印迹试验。结果经UV照射后,日本血吸虫尾蚴新出现了Mr 212 000和82 000抗原带,Mr 116 000、26 000和16 000抗原带浓度明显升高;NCA的Mr 67 000分子仅能被UVCA免疫猪血清识别,而不能被感染猪血清识别,Mr 79 000和94 000与免疫猪血清的反应也明显强于感染猪血清。结论UV照射后新出现或含量增加的抗原成分以及仅免疫猪血清所识别的抗原分子可能是照射尾蚴激发高度保护性免疫的主要因素。; 李华陈晓光杨培梁周晓红沈树满彭鸿娟吴昆; 关键词：紫外线日本血吸虫尾蚴抗原血吸虫病

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