刘小强
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：安徽大学生命科学学院安徽省生态工程与生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 溴化氰切割融合蛋白条件的研究
- 2009年
- 目的研究不同因素对溴化氰切割融合蛋白的影响。方法将含有pThioHisA-G13重组质粒的BL21工程菌,经IPTG诱导后,超声破碎,分离并溶解包涵体,再选择不同量的溴化氰、酸浓度及不同溶剂等条件进行溴化氰切割试验,Tricine-SDS-PAGE检测切割效果。结果溴化氰的量,酸浓度及不同溶剂对溴化氰切割包涵体的效果均有影响。结论高效率的切割需要在酸性条件下进行;以尿素作为促溶剂比70%的甲酸更有利于小肽的切割。
- 刘小强查向东张部昌徐康森徐佩佩
- 关键词：融合蛋白
- 融合头的改变对抑制重组抗菌肽毒性的影响(英文)被引量：1
- 2010年
- 为进一步完善G13结构域的原核表达系统,人工合成编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pET28a中,构建的重组质粒pET28a-G13转化于E.coli BL21(DE3)中。另外对pET28a-G13进行突变,改变其G13片段N端上游处的融合头的电荷数,转化于E.coli BL21(DE3)中。构建pThiohisA突变体并与pET28a-G13共转化于E.coli BL21(DE3)中。用诱导剂诱导所构建的各个工程菌,然后比较A600值变化及蛋白表达量,分析不同的融合头对G13毒性抑制效果,发现融合头对G13毒性抑制效果与其净负电荷数及酸性氨基酸的相对位置有关。
- 王作利查向东周鹏刘小强杨金环方红
- 关键词：阳离子抗菌肽共表达
- 颗粒裂解肽G13结构域的重组表达及蛋白质结构预测被引量：2
- 2009年
- 基因工程构建表达是获得抗菌肽的一种成本较低的方法,本实验人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T-A克隆法与pBAD/TOPO ThioFusion表达载体连接,通过PCR鉴定筛选出正确重组质粒,在大肠杆菌Top10中对目的蛋白进行表达,大肠杆菌工程菌经阿拉伯糖诱导后取样,用SDS-PAGE检测表达情况,采用生物信息学方法对表达蛋白的结构特征进行模拟分析。结果显示:目的蛋白在原核系统中实现了高效表达,表达量高达67%以上,主要以包涵体形式表达。蛋白结构预测结果显示,目的蛋白原有的α螺旋活性结构无改变,从而为抗菌肽高效生产提供了有效可靠的研究途径。
- 方红查向东杨金环刘小强屈满意
- 关键词：颗粒裂解肽蛋白质结构
- 颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达
- 抗菌肽(Antimicrobial peptide)是生物体内产生的一种阳离子小分子多肽,广泛存在于植物和动物体内,是天然免疫防御系统的一部分。当前,抗生素的大量使用导致耐药性菌株的产生,因而开发新型抗生素显得越来越重要...
- 刘小强
- 关键词：颗粒裂解肽结构域大肠杆菌抗菌肽
- 文献传递
- 颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达被引量：7
- 2009年
- 为高效表达颗粒裂解肽G13结构域并避免G13对宿主菌的毒性,将人工合成的编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pThioHisA中,构建了重组表达载体pThioHisA-G13,将其转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白Trx-G13,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量约占细菌总蛋白的58%。包涵体蛋白经8 mol/L尿素溶解后,再经CNBr切割,阳离子交换层析,得到纯化的重组G13结构域。琼脂糖扩散法检测表明重组G13结构域多肽具有抗菌活性。
- 刘小强查向东肖亚中杨金环李能树
- 关键词：颗粒裂解肽阳离子抗菌肽
- 颗粒裂解肽G13结构域的表达及其对大肠杆菌活力的影响被引量：9
- 2008年
- 目的构建携带颗粒裂解肽G13结构域的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的蛋白,并检测其对大肠杆菌活力的影响。方法人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T-A克隆法与pBAD/TOPOThioFusion表达载体连接。通过PCR鉴定及测序筛选阳性重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况,同时监测诱导表达前后工程菌A600值的变化及菌液中的突变体。结果工程菌经诱导,表达出相对分子质量约15000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的3%左右。随着外源蛋白的表达,菌液A600值下降,随后又缓慢上升。提取的质粒测序结果表明,其启动子的-35区和-10区均发生了突变,随着诱导时间的增加,突变细胞的比例不断增加。结论已成功构建了G13结构域原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出G13融合蛋白。该异源蛋白的表达导致工程菌的活力降低。
- 杨金环查向东方红刘小强屈满义
- 关键词：颗粒裂解肽原核表达大肠杆菌
