刘农乐
- 作品数：53 被引量：164H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表皮生长因子的发光免疫测定法——吖啶酯标记抗体的应用被引量：4
- 1993年
- 介绍了吖啶酯标记抗体应用于表皮生长因子的发光免疫测定法.吖啶酯类发光剂标记抗体的优点是标记方法简便、抗体用量少、发光强度大.所述方法其标准曲线范围是400pg/ml—25ng/ml.表皮生长因子浓度与发光值之间的线性关系良好.批内及批间变异系数分别为7.3%及11%.灵敏度与使用^(125)I 标记同一抗体的放免法同属 pg 水平.加入保护剂低温保存,使标记物的使用期由原来的1个月延长到6个月.
- 刘农乐蒋滋慧赵明王会信赵强周廷冲
- 关键词：表皮生长因子荧光免疫法
- 组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用被引量：2
- 1991年
- 本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。
- 蒋滋慧王会信谢支光王芳刘农乐徐秀英周廷冲
- 关键词：组织型
- 成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒质粒的构建与鉴定被引量：6
- 2014年
- 目的:构建成骨细胞特异性转录因子——核心结合因子α1(Cbfa1)重组腺病毒载体,为后期应用Cbfa1基因治疗股骨头坏死、骨折和骨缺损等疾病奠定基础。方法:以目的基因Cbfa1全长cDNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pShuttle-CMV载体的相应酶切位点,获得目的基因载体pShuttle-CMV-Cbfa1,在大肠杆菌BJ5183中和pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,经酶切、PCR及测序鉴定,线性化后用脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,酚氯仿抽提纯化病毒,AdEasy1/Cbfa1感染间充质干细胞(MSC)后检测Cbfa1的表达。结果:测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功,AdEasy1/Cbfa1感染MSC后Cbfa1的表达显著升高。结论:构建了含Cbfa1基因的重组腺病毒载体,该基因能促进MSC向成骨细胞分化,预示其可作为治疗基因应用于股骨头坏死、骨折和骨缺损的治疗。
- 李章华赵强唐欢许海甲廖文潘峰刘农乐
- 关键词：核心结合因子Α1腺病毒
- 神经生长因子的发光免疫分析法被引量：1
- 1994年
- 介绍了一种灵敏的神经生长因子化学发光免疫测定方法。小鼠神经生长因子（ｍＮＧＦ）的抗体ＩｇＧ用亲和层析纯化并用吖啶酯标记。该法可用于大鼠组织中ＮＧＦ含量的测定。方法的灵敏度为１０ｐｇ／ｍＬＮＧＦ；批内批间变异系数分别为８．７％及１３．２％；回收率平均为１０３％。ｍＮＧＦ抗体对人的ＮＧＦ也有极强的交叉反应，故本方法也可能用于病人血清或脑脊液中ＮＧＦ含量的测定。
- 刘农乐蒋滋慧柳川赵强陈艾李美佳王会信周廷冲
- 关键词：神经生长因子化学发光免疫测定
- 小鼠sidt2基因的可变剪接验证
- 2008年
- 目的:验证小鼠基因sidt2中sidt2(l)和sidt2(s)为同一基因经可变剪接所得的结果。方法:对小鼠sidt2基因进行生物信息学分析及基因组PCR,确定其基因组定位情况;通过提取总RNA、RT-PCR,了解sidt2在小鼠多种组织中的表达情况;构建可变剪接报告载体,转染小鼠肝癌细胞Hepa1-6,并提取细胞总RNA、RT-PCR,检测其在细胞中的剪接行为,验证该基因存在可变剪接。结果及结论:证实小鼠sidt2存在可变剪接,其两条序列sidt2(l)和sidt2(s)为可变剪接的产物。
- 刘舒云李洁陈留存曹国军李少华赵强丁红梅高亚萍刘农乐王芳杨光邵宁生
- 关键词：可变剪接组织表达谱
- 猪骨-rhBMP-2复合重组人工骨的研制及临床应用研究被引量：2
- 2001年
- 目的 选择猪骨作为rhBMP 2的载体 ,经去抗原处理 ,复合重组人工骨 ,观察该种人工骨临床应用骨缺损修复 ,促进骨折愈合及诱导成骨的能力。方法 选择猪骨经透析冻干法脱脂、脱蛋白及部分脱钙处理后与成品rhBMP 2按一定比例组成具有生物活性的猪骨 -rhBMP 2复合人工骨 ,先行动物模型实验 ,随后以自愿随机的原则 ,临床应用 32例 ,术后 1,4,8,12周进行X线检查 ,观察临床表现 ,功能恢复情况。结果 临床 32例 ,34块骨 ,35处植入。随访 31例 ,随访率 96 7% ,最长 2 4个月 ,最短3个月 ;骨的愈合及缺损修复满意 ,临床无不良反应。结论 经透析冻干法处理的猪骨能成为rhBMP 2的理想载体 ,与rhBMP 2复合后具有良好的成骨诱导活性 ,无免疫排斥反应 ,具有广泛的临床应用前景。
- 李万民赵明徐杰刘农乐周丙怀王会信马立志赵怀川苏维成
- 关键词：骨移植异种基因猪骨RHBMP-2重组人工骨
- 人酸性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备被引量：3
- 1993年
- 以纯化的重组人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得一株稳定分泌抗haFGF的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其DNA含量为脾细胞与SP2/0细胞DNA含量之和,所分泌抗体为小鼠IgG_1亚类。免疫印迹显示:此单抗只与大肠杆菌中的haFGF有结合,与牛aFGF则没有结合反应。
- 王芳薛沿宁王会信徐秀英刘农乐邵宁生周廷冲
- 关键词：细胞生长因子杂交瘤单克隆抗体
- 脑脊液髓鞘碱性蛋白自身抗体在脱髓鞘疾病的研究
- 1992年
- 脑脊液髓鞘碱性蛋白(MBP)自身抗体固相发光免疫分析法,是一项免疫检测新技术,目前国外尚未见到对脱髓病研究的报道。本文作者于1988.5～1989.3首先采用本法并证实其可靠性后,进入临床研究,对36例脱髓鞘病及20例其他CNS疾病者的对照组,用三项免疫指标行对比分析。CSFMBP自身抗体含量及其和同量IgG自身抗体的百分比值分别为69.23±11.95ng/ml及3.24±0.52ug/mg±gG和对照组相比,P值分别为<0.05及<0.001,有显著差异,对本病诊断有意义。
- 曹起龙杨左廉尹玲朱克王国平于国平沈文梅蒋滋慧王会信刘农乐赵强周廷冲李春梅
- 关键词：自身抗体免疫法脱髓鞘疾病MBP
- tRNA体外抑制L929细胞生长的作用观察
- 2008年
- 目的:探讨tRNA对不同哺乳动物细胞生长的影响。方法:L929细胞、NIH3T3细胞、MCF-7细胞和PC12细胞接种96孔板,37℃,5%CO2细胞培养箱中培养4h后,直接加入酵母tRNA,继续培养一定时间后采用MTT法检测细胞生长情况;将200μg/ml酵母tRNA加入至L929细胞中,在不同时间点观察细胞形态并收集细胞进行细胞流式分析。结果:tRNA对L929细胞有特异的抑制作用,并且表现出一定的剂量依赖性;tRNA处理后L929细胞与正常细胞相比,形态明显变大,而且突起增长;流式细胞仪分析进一步发现tRNA使细胞阻滞于S期。结论:tRNA的这种细胞生长的抑制效应可能是通过其一些小的降解片段发挥的,提示tRNA或者其降解片段可能具有调控L929细胞增殖的重要作用。
- 丁红梅杨光程辉彩刘朝晖曹国军刘农乐赵强范明沈倍奋邵宁生
- 关键词：TRNAL929细胞
- 一种利用具有茎环样结构引物通过PCR制备单链DNA的方法
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种利用茎环样结构的引物经PCR制备不同长度的正、负链产物，切胶回收制备单链DNA的方法。通过针对不同的DNA模板设计的下游茎环结构引物，改进PCR条件，证实PCR产物均为预期的长、短两条链，...
- 李少华邵宁生曹晓晓丁红梅刘农乐沈倍奋
- 文献传递
