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复旦大学附属儿科医院小儿呼吸与危重病实验室: 作品数：12 被引量：70H指数：5; 相关作者：吴盼盼徐艳更多>>; 相关机构：上海交通大学上海儿童医学中心重庆医科大学儿科学院更多>>; 发文基金：美国中华医学基金国家自然科学基金上海市医学领军人才项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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建立pEGFP—N1-TGF-β1重组质粒和脂质体介导转染原代培养新生猪AEC-Ⅱ方法: 2016年; 目的构建pEGFP—N1—TGF-β1重组质粒，利用脂质体介导方法将重组质粒转染入原代培养的新生猪肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC-Ⅱ）中，为构建实验性干预急性肺损伤的真核表达载体及转染原代培养AEC-Ⅱ提供方法学基础。方法应用含人TGF—β1CDS的质粒，设计PCR引物扩增出其CDS片段，将其与空质粒pEGFP—N1用Xhol和EcoRI双酶切，T4DNA Ligase连接双酶切产物，将连接产物转化入DH5α中，培养16h后抽提质粒，PCR法鉴定和测序证实TGF—β1 CDS序列正确。采用Lipofectamine 2000脂质体介导转染，将新生猪AEC—Ⅱ原代培养48h至细胞融合80％-90％，换为无血清培养液；将质粒DNA（pEGFP—N1-TGF—β1重组质粒）和Lipofectamine 2000加至DMEM培养液中混匀，置于培养箱中培养4—6h，更换为完全培养液；转染24—48h后，荧光显微镜下观察细胞EGFP表达水平。结果PCR法及测序鉴定证实TGF—β1 CDS序列正确，重组质粒构建成功，采用Nanovue超微量分光光度计测浓度质粒浓度为195．5μg/mL，转染后48h在荧光显微镜下可见细胞有绿色荧光表达，证实已将其成功转染入原代培养的AEC—Ⅱ中。结论成功构建了pEGFP-N1—TGF-β1真核表达载体，并首次采用脂质体介导方法将重组质粒转染入原代培养的新生猪AEC—Ⅱ中，为开展其他实验性干预ALI的基因转染并进一步研究其修复作用及转归提供方法学基础。; 徐艳孙波; 关键词：原代培养

定制体外生命支持系统的实验研究被引量：2: 2018年; 目的通过离体和在体实验，评估一台定制体外生命支持系统的可行性、稳定性、安全性。方法由储血罐（模拟患者）、储血囊、氧合器、内径1/4 英寸（1 英寸=2.54 cm）连接管、水箱等建立离体测试模型。每天记录滚轴泵、水箱工作情况，分别以超声流量仪、温度计检测滚轴泵流量、水箱温度读数是否精确。将压力监测系统与美敦力体外膜肺氧合（ECMO）系统对同样压力的测量结果进行比较，评估其准确性及稳定性。满足监测系统报警条件，观察报警及停泵情况。将定制系统应用于4头健康幼猪和2头轻度ARDS幼猪24 h，记录幼猪的血流动力学、呼吸力学、气体交换、血液学参数，并观察定制系统工作情况。定制系统与超声流量仪、温度计等之间的一致性评估采用Bland-Altman 分析的方法。结果滚轴泵、监测系统、水箱均运行稳定。泵流量、泵前压、泵后压、膜后压、温度测量结果的95%一致性界限分别为：（-0.04 L/min，0.03L/min）、（-3 mmHg，3 mmHg）、（-5 mmHg，6 mmHg）、（-6 mmHg，6 mmHg）。泵前压、泵后压、膜后压、气泡监测、储血囊均进行了100次测试，压力监测及储血囊报警均灵敏，停泵迅速，气泡监测仅60次报警并停泵。水箱报警温度为（42.3±0.2） ℃。在体实验中定制系统工作平稳，健康幼猪接入定制系统后顺应性（Cdyn）有一过性下降，肺泡-动脉氧分压差（A-aDO2）和氧合指数（OI）有一过性升高，而ARDS幼猪接入定制系统后Cdyn呈上升趋势，A-aDO2和OI呈下降趋势。幼猪接入定制系统后平均动脉压相对稳定，血红蛋白及血小板呈下降趋势。结论离体及在体实验显示该定制系统的滚轴泵、压力监测系统、水箱性能较好，初步证实该系统具有一定的可行性、稳定性、安全性。; 葛润生何丽明王秀华陆铸今陆国平孙波; 关键词：体外生命支持定制离体在体一致性

吸入一氧化氮对感染性急性肺损伤时红细胞变形能力的影响: 2008年; 目的研究吸入一氧化氮（NO）对红细胞变形能力的影响及其可能机制。方法将3～4周龄健康雄性幼猪30只麻醉后经口气管插管进行机械通气，随机分为4组。（1）正常组（C，n=6）单纯机械通气；（2）正常幼猪加吸入NO（CNO，n=4）；（3）模型组（M，n=10）单纯机械通气；（4）模型制备加吸入NO（MNO．n=10）。M和MNO组动物经腹腔注射标准大肠杆菌诱发急性肺损伤（ALI），C及CNO组用无菌生理盐水替代。MNO组出现ALI后进行吸入NO（10×10^-6），治疗24h，CNO组则机械通气4h后（0h）开始吸入NO并维持24h。在实验基础状态、ALI时（0h）、ALI后12以及24h测血细胞比容、全血黏度、红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性及红细胞内丙二醛（MDA）浓度。结果CNO组吸入NO后12、24h高切率下血液黏度（反映红细胞变形能力）、红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性及红细胞内MDA浓度变化不大。动物出现ALI时其红细胞变形能力降低，红细胞膜Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶、Na^＋-K^＋-ATP酶活性均下降，红细胞内MDA浓度升高（P〈0．05）。MNO组在吸入NO12h时红细胞变形能力改善，红细胞膜Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶、Na^＋-K^＋-ATP酶活性均较M组高（P〈0．05），红细胞内MDA浓度则低于M组（P〈0．05）；但这些参数在吸入NO24h与C组比较差异均无显著性（P〉0．05）。结论ALI时红细胞变形能力显著下降，可以因吸入NO而改善，但作用不持久。; 吕勇朱友荣孙波; 关键词：一氧化氮血液黏度红细胞

新生儿低氧耐受的生理与病理生理研究: <正>早产新生儿出生前、出生时和出生后经历母体宫内低氧、产时头部胸部受产道挤压、脐带受挤压和血流阻断、出生后自主呼吸弱等一系列因素影响,可以出现与肺发育不成熟同时相伴的严重低氧性呼吸衰竭,导致肺阻力性血管反应性收缩,肺循...; 孙波; 文献传递

低氧性呼吸衰竭新生儿呼出气一氧化氮的测定被引量：5: 2011年; 目的对气管插管机械通气和自主呼吸新生儿进行呼出气一氧化氮（eNO）检测，探讨低氧性呼吸衰竭（HRF）患儿eNO的变化特点。方法HRF组为2009年12月至2010年1月，湖南省儿童医院NICU病房收治的HRF患儿，共22例，胎龄（34．8±4．2）周，出生体质量（2490±1039）g。纳入标准：出生24h内，出现与呼吸衰竭相关典型的临床生理、病理及放射影像学表现，需要气管插管机械通气治疗的患儿。对照组为2010年5～6月入住复旦大学附属儿科医院新生儿科，出生24h内，不吸氧下脉搏血氧饱和度在正常范围，无肺部弥漫性病变的新生儿，共26例；胎龄（35．6±3．6）周，出生体质量（2238±757）g。排除标准：所有病情不稳定的先天性疾病。用化学发光法测定HRF新生儿和对照组新生儿出生后1周内每日eNO，同时监测脉搏血氧饱和度（SpO2）、吸入氧分数（FiO2）等反映呼吸力学及气体交换效率的参数。两组eNO、SpO2／FiO2与eNO／（SpO2／FiO2×100）比较用Wileoxon Mann—WhitneyU检验，两变量间相关分析采用Pearson相关分析。结果出生后最初2d，HRF患儿的eNO高于对照组新生儿[第1天，（7．94-3．2）×10^-9vs．（5．8±1．8）×10^-9，P〈0．05；第2天，（8．8±3．2）×10^-9 vs．（6．0±2．4）×10^-9，P〈0．05]第3—7天，两组eNO则差异无统计学意义。SpO2／FiO2与PaO2／FiO2呈正相关（r=0．72，P〈0．01，回归方程SpO2／FiO2=160＋0．73×PaO2／FiO2）。eNO与SpO2／FiO2具有相关性（r=-0．228，P〈0．05），随着SpO2／FiO2升高，氧合功能改善，HRF新生儿的eNO下降，接近于同日龄对照组新生儿的eNO值，但是，经修正的eNO／（SpO2／FiO2×100）比值在第5—7天仍然有2倍差别。结论通过对气管插管机械通气新生儿和自主呼吸新生儿eNO检测技术应用，发现HRF患儿与非HRF新生儿的eNO水平有差异，且随着氧合改善而缩小，可以反映; 刘丽娟高喜容吴盼盼钱莉玲陈超孙波; 关键词：新生儿呼吸衰竭一氧化氮呼吸生理脉搏血氧饱和度一氧化氮合酶

急性呼吸窘迫综合征中的肺复张策略被引量：15: 2005年; 喻文亮孙波; 关键词：肺复张手法急性呼吸窘迫综合征最佳PEEP 通气模式 CPAP

小儿危重呼吸衰竭临床协作研究的经验及问题: 小儿急诊医学(EM)、重症监护病房(ICU)或危重病救治医学(CCM,急救与重症监护医疗)对于各个儿科专业学科发展日益发挥重要影响,决定内外科救治危重复杂疾病的成功与否。医院对于此专业的投入迅速上升,同时对于专业医师素质...; 孙波; 关键词：急诊医学重症监护; 文献传递

早产儿出生早期呼吸治疗与肺脑发育及损害的关系研究被引量：3: 2009年; 孙波; 关键词：支气管肺发育不良早产儿视网膜病脑发育超低出生体重儿高危因素

一氧化氮辅助鼻塞持续气道正压通气治疗早产儿肺发育不良一例: 2010年; 患儿男，第2胎第1产，胎龄30^＋5周，2008年9月因母“子痢前期（重度），胎儿窘迫”剖宫产娩出，Apgar评分1min2分，5min和10min均7分，出生体重830g，羊水Ⅱ度污染。以“早产儿，超低出生体重儿，重度窒息”收入院。患儿入院后予暖箱保暖，禁食补液，气管内应用肺表面活性物质（固尔苏，120mg），; 徐茵施婴婴孙波; 关键词：正压通气治疗早产儿肺发育不良持续气道一氧化氮

危重呼吸衰竭患儿的救治与转归被引量：7: 2011年; 目的分析比较我国小儿重症监护室（PICU）危重呼吸衰竭患儿病死率及呼吸支持治疗的发展状况。方法前瞻陛临床多中心流行病学调查，共有20个PICU参加此次研究，研究时间为2004及2006年度，研究对象为29d至15周岁的PICU患儿，同时调查每个PICU的基本配置情况。比较不同年份PICU配置、患儿预后及呼吸治疗的差异，对患儿预后相关因素进行多元回归分析。结果与2004年度相比，2006年度PICU的床位总数及呼吸机数均有增长；但床单位面积无增长；收治的患儿中危重患儿比例有明显提高（69．0％VS．57．5％，X^2=318，P〈0．01）；危重病例总病死率差异无统计学意义。多元回归分析发现，医师工作量大的PICU，其患儿病死率要低，线性趋势检验P=0．013。2006年度，急性呼吸窘迫综合征病死率有了明显的下降（39．7％vs．55．8％，X^2=6．59，P〈0．01），但通气比例及呼吸机参数差异无统计学意义。结论我国PICU小儿呼吸危重症的救治水平与科室规模及设施的增长同步发展。PICU危重病例的预后与PICU规模及医生工作量存在正相关关系。; 胡晓光喻文亮钱素云许峰王莹祝益民甘小庄樊寻梅孙波; 关键词：呼吸衰竭重症监护病死率呼吸支持治疗

复旦大学附属儿科医院小儿呼吸与危重病实验室

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