北京协和医学院基础医学院生物化学与分子生物学系
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 相关作者：陈梅红朱宁闫雪静熊霞辉卢雅彬更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所中国医学科学院北京协和医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 红细胞生成素对人单核细胞前炎症因子的影响及机理
- 2011年
- 红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是治疗慢性病贫血(anemia of chronic disease,ACD)的主要药物,通过刺激造血、抑制hepcidin和前炎症因子而改善贫血。近来发现单核细胞是hepcidin的另一来源,EPO能降低IL-6诱导的hepcidin,推测EPO可能通过降低IL-6进而抑制hepcidin的间接途径。然而,EPO降低单核细胞IL-6相应的分子生物学机制还不清楚。本研究探讨EPO对单核细胞前炎症因子的作用及其分子学机制。采用实时定量PCR检测IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达,Western blot方法检测PARP-1信号分子的蛋白水平。采用1μg/ml脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激THP-1单核细胞,观察EPO不同浓度(0.5,1,2,5,10 U/ml)和作用时间(0,3,6,12,24小时)对THP-1单核细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA以及PARP-1蛋白的抑制作用。加用1μg/ml或5μg/mlEPO受体(EPOR)抗体和/或3-氨基苯甲酰胺(3AB,PARP-1抑制剂),观察其对EPO的拮抗作用以及对PARP-1信号分子的影响。结果表明,1μg/ml LPS可以明显促进THP-1单核细胞IL-6和TNF-αmRNA表达。EPO可抑制LPS诱导的IL-6和TNF-αmRNA表达,且呈浓度和时间依赖性:对于IL-6 mRNA,2 U/ml EPO作用6小时的抑制作用最明显;对于TNF-αmRNA,10 U/ml EPO作用3小时的抑制作用最明显。研究发现,LPS诱导IL-6 mRNA表达升高的同时PARP-1蛋白水平也明显增加,EPO抑制IL-6 mRNA表达的同时PARP-1蛋白也下降,且2 U/ml EPO作用6小时对IL-6和PARP-1蛋白均有明显抑制。3AB是PARP-1的直接抑制剂,EPO受体的抗体与3AB相似,可拮抗EPO对IL-6的抑制作用。结论 :EPO能够抑制单核细胞IL-6和TNF-α表达,EPO可能通过降低PARP-1水平抑制IL-6的表达。
- 韩潇周道斌许彩民杨洋段明辉汪玄张洁萍赵永强沈悌武永吉
- 关键词：慢性病贫血白介素-6红细胞生成素单核细胞
- NR2F2促进小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖被引量：1
- 2011年
- 目的探讨NR2F2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响。方法用实时定量PCR检测mRNA表达量,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,ELISA-Brdu法检测细胞DNA合成速度。结果在小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖速度加快时,NR2F2基因的表达增高至对照的4.57±0.30倍(P<0.01)。过表达NR2F2基因促使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,细胞数量增加(P<0.01),细胞周期中S期细胞比例明显升高,为对照组的2倍,G2/M期比例也有增加(P<0.05)。过表达NR2F2基因使MC3T3-E1细胞的Brdu掺入率增高,DNA的合成加速(P<0.01)。结论 NR2F2使S期细胞比例增加,促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖速度。
- 王崧熊霞辉朱宁陈梅红
- 关键词：MC3T3-E1细胞细胞增殖
- 基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建被引量：2
- 2017年
- 目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率。在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA(miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果。基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结果由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录。基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率。构建了一个容量为1.8×10~7的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结论构建了一个大容量的新型随机shRNA文库。
- 郭倩朱宁卜萌萌郭思超闫雪静陈倩陈梅红
- 关键词：微小RNA短发夹RNA
- Tmed2促进体外小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖被引量：1
- 2012年
- 目的研究Tmed2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响。方法 1)分别在小鼠MC3T3-E1细胞中过表达和抑制Tmed2,检测细胞增殖情况。2)用雌激素处理细胞后,检测细胞的增殖及Tmed2基因的表达量。荧光实时定量PCR检测mRNA水平,MTS法检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测蛋白水平。结果过表达Tmed2使MC3T3-E1细胞的增殖速度加快,细胞周期中S期细胞比例明显增加,且Cyclin A的表达升高。而抑制Tmed2基因表达使MC3T3-E1细胞的增殖速度减慢。雌激素处理使细胞增殖速度加快的同时,Tmed2基因的表达显著增高。结论 Tmed2通过上调Cyclin A的表达,使S期细胞比例增加,加快小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖。此外,Tmed2的表达受雌激素的调控,可能参与雌激素促进MC3T3-E1细胞增殖的作用。
- 熊元熊霞辉卢雅彬朱宁陈梅红
- 关键词：MC3T3-E1细胞细胞增殖雌激素
- Txndc5介导雌激素诱导的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖加快
- 2012年
- 目的研究Txndc5基因在小鼠前成骨细胞增殖中的作用。方法用雌激素诱导小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1,或在MC3T3-E1细胞中分别用质粒载体过表达Txndc5和用siRNA抑制Txndc5的表达后,Western blot检测Txndc5和细胞周期蛋白水平,荧光实时定量PCR检测Cyclin A的mRNA水平,MTS法和细胞计数法检测细胞增殖速度,流式细胞术检测细胞周期。结果雌激素诱导MC3T3-E1增殖加快时,Txndc5的蛋白水平亦上升。抑制Txndc5的表达阻止雌激素的促细胞增殖作用。过表达Txndc5使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,S期细胞比例增加,同步化细胞进入细胞周期18 h时,过表达Txndc5组Cyclin A的表达升高,且S期细胞比例为18.69%±4.08%,而对照组仅为8.15%±3.68%。抑制Txndc5的表达则使MC3T3-E1细胞增殖速度减慢,S期细胞比例减少,Cyclin A的表达下降。抑制Cyclin A的表达减弱Txndc5的促细胞增殖作用。结论 Txndc5通过上调Cyclin A的表达介导雌激素的促前成骨细胞增殖作用。
- 王乐卢雅彬熊霞辉朱宁陈梅红
- 关键词：MC3T3-E1细胞雌激素
- SLC30A3促进人髓性白血病细胞K562向早期红系分化被引量：1
- 2012年
- 目的研究SLC30A3在红系分化中的作用。方法在人髓性白血病K562细胞系中用质粒载体过表达SLC30A3后,检测细胞红系分化指标CD235、ε-、γ-和β-珠蛋白的表达量及细胞增殖速度。流式细胞术检测CD235的表达,荧光实时定量PCR检测珠蛋白mRNA水平,Western blot法检测转录因子GATA-2蛋白水平,MTS法检测细胞增殖速度。结果过表达SLC30A3使K562细胞的红系分化特异标志CD235的表达升高,CD235阳性细胞率由对照组的34.25%±16.89%增加至95.7%±0.14%(P<0.01),ε-、γ-和β-珠蛋白的表达明显升高,红系分化相关转录因子GATA-2的表达降低,细胞增殖速度加快。结论 SLC30A3促进人髓性白血病K562细胞系向早期红系分化。
- 董林范翠青朱宁陈梅红
- 关键词：红系分化K562细胞
