北华大学医学技术学院
- 作品数：211 被引量：486H指数：10
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- 基于CaCC的P2ry2调节剂细胞筛选模型的建立及应用
- 2020年
- 目的:构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的高通量P2Y2嘌呤受体(P2ry2)调节剂细胞筛选模型。方法:采用RT-PCR方法验证Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRT细胞)中P2ry2的mRNA表达水平,切胶回收PCR扩增产物并进行序列测序和比对,进一步应用Western blot检测FRT细胞的P2ry2蛋白表达水平。构建钙激活氯离子通道ANO1和对卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染、抗生素筛选和有限稀释,获取共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。采用倒置荧光显微镜观察共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L细胞的情况,并应用荧光淬灭动力学实验验证模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型是否可筛选P2ry2调节剂,并应用Fura-2/AM荧光探针法检测细胞内游离钙的变化,探究胞内Ca2+浓度与P2ry2调节剂的剂量依赖关系;用Z'因子评价本模型的稳定性和可重复性。结果:FRT细胞内源性表达P2ry2;倒置荧光显微镜中观察到ANO1在细胞膜上表达绿色荧光,YFP-H148Q/I152L在胞浆中表达绿色荧光,成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的细胞模型;荧光淬灭动力学实验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂,应用Fura-2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca2+浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系;Z'因子为0.75,说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。结论:成功构建了一种经济简便快捷高效的P2ry2调节剂细胞筛选模型,适用于P2ry2调节剂的发现与评价。
- 郭佳琦肖云萍丁旭解宇浩张嘉琪郝峰
- 关键词：高通量筛选
- 基于PCR-核酸试纸条快速鉴定鹿茸及其伪品的实验研究被引量：3
- 2022年
- 目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^(-1)。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。
- 徐宁邵博宇于文莹迟凯月马玉贺马秋贺艾金霞李明成高丽君夏薇
- 关键词：聚合酶链式反应鹿茸可视化DNA指纹
- CKMT2在结直肠癌中的表达及意义被引量：2
- 2022年
- 结直肠癌(CRC)的发病率高,起病隐匿,诊断时常已处于中晚期。CRC的早期诊断对提高患者生存率及改善预后至关重要,因此筛选能用于CRC诊断筛查的生物标志物的需求日益增长[1-3]。肌酸激酶线粒体2(CKMT2),又称肌节型肌酸激酶(sMtCK),是一种线粒体肌酸激酶(MtCK),属于肌酸激酶(CK)同工酶成员之一[4-5]。本研究旨在探究CKMT2在结直肠癌和癌旁组织中的表达及意义,探讨CKMT2与肿瘤的发生发展间的关系,以期为临床早期诊断提供依据。
- 刘金华于晟曼薛菲李婷淼何成彦时景伟
- 关键词：临床早期诊断表达及意义结直肠癌线粒体肌酸激酶改善预后CKM
- 新型杂合肽DY-CA的构建及抑菌活性评价被引量：1
- 2022年
- 目的:构建高活性、低毒性的新型杂合肽,对其抗肺炎克雷伯菌活性进行评价,探讨其在防治肺炎克雷伯菌引起的呼吸道感染的潜在应用价值。方法:通过生物信息学软件分析亲本肽dyskinbow-1ST的理化性质,预测杂合肽活性区域,确定与天蚕素Cecropin A的构建策略;应用生物信息学软件分预测杂合肽的理化性质及抑菌活性;通过固相法合成杂合肽DY-CA,用杂合肽对肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度(MIC)试验,杂合肽对肺炎克雷伯菌的时间生长曲线,羊血红细胞溶血试验,分析DY-CA的抑菌活性及生物相容性;通过结晶紫染色定量法观察生物膜的改变,研究杂合肽对肺炎克雷伯菌生物膜的抑制与清除效率。结果:经在线软件预测分析,杂合肽DY-CA为稳定的带正电荷疏水性抗菌肽,试验测得杂合肽的MIC为64μg·mL^(-1);对肺炎克雷伯菌的抑菌作用具有时间和浓度依赖性,杂合肽在3 h后表现出明显的抑制作用,2MIC、1MIC的杂合肽A基本上没有变化,肺炎克雷伯菌的生长完全被抑制;在有效浓度下,羊血红细胞溶血率为4.23%(<5%)为阴性;0.5MIC(t_(0.5MIC)=11.10,P<0.05)、1MIC(t_(1MIC)=17.96,P<0.05)、2MIC(t_(2MIC)=14.18,P<0.05)的杂合肽DY-CA均可抑制肺炎克雷伯菌生物膜的形成;0.5MIC(t_(0.5MIC)=11.10,P<0.05)的杂合肽DY-CA对肺炎克雷伯菌成熟生物膜清除效果不明显,1MIC(t_(1MIC)=17.96,P<0.05,)、2MIC(t_(2MIC)=14.18,P<0.05)的杂合肽DY-CA可显著破坏肺炎克雷伯菌成熟生物膜。结论:本试验设计构建并筛选了具有高活性、低毒性的新型杂合肽DY-CA,对肺炎克雷伯菌具有高效、快速的抑菌作用,有望成为防治肺炎克雷伯菌引起的呼吸道疾病的新型药物。
- 邵学超赵潇颖王丹马嘉辉赵远宋顺佳贾慧建孙丽媛赵云冬
- 关键词：天蚕素生物信息学抑菌活性生物膜
- 驴源性DNA检测试剂盒的研制与评价被引量：3
- 2018年
- 本实验旨在研究开发常见肉样DNA提取及驴源性DNA检测试剂盒。应用分子生物学技术,提取常见肉样DNA并进行PCR鉴定,克隆种属特异性DNA片段,并组装驴源性DNA提取及检测试剂盒;对试剂盒的特异性、稳定性和重复性进行评价。结果表明:驴源性DNA检测试剂盒能在6 h内准确检测出样品中的驴源性成分,试剂盒反复冻融5、10、20次后依然有效,可于-20℃保存1年。综上可知,驴源性DNA检测试剂盒对驴肉制品检测简单方便、准确有效,适用于驴肉及驴肉制品的快速鉴别。
- 陈思秀刘玟妍高秋月张馨方艾金霞孙丽媛
- 关键词：DNAPCR克隆试剂盒
- 基于杂合肽H5LL活性的生物信息学分析和重组乳酸菌表达载体的构建
- 2023年
- 目的:以人源性抗菌肽(AMPs)富组蛋白5 (Hst5)和LL-37为亲本,设计新型杂合肽H5LL,并通过基因工程技术构建重组乳酸菌表达载体,实现AMPs的高效和安全表达。方法:采用生物信息学方法对H5LL进行理化参数、亲/疏水性、剪切位点、磷酸化位点、信号肽、跨膜区域、亚细胞定位和二级结构预测;将目的序列和空载质粒pMG36e经HindⅢ及KpnⅠ双酶切后,构建乳酸菌重组表达载体pMG36e-H5LL,克隆转化获得含目的基因的重组质粒。结果:H5LL成为AMPs的可能性较高,含36个氨基酸,相对分子质量为4 625 380,总电荷数为+10,具有亲水性;有3个磷酸化位点,无糖基化位点;属于膜内蛋白,无跨膜区域,无信号肽;亚细胞定位预测,线粒体靶向肽的可能性为0.333。二级结构中α-螺旋结构和β-转角占比分别52.78%及22.22%,三级结构中α-螺旋数量较多。含目的基因的重组质粒PCR电泳,于138 bp处有单一特异性条带;双酶切电泳,重组质粒在136和3 500 bp处有清晰条带。结论:设计并合成的新型杂合肽H5LL具有较高稳定性、抑菌活性和低毒性;成功构建重组乳酸菌表达载体pMG36e-H5LL。
- 赵潇颖宿建胜马嘉辉王岳峰王丹孙丽媛
- 关键词：抗菌肽生物信息学乳酸菌
- 药物生产车间污染微生物的快速鉴定和污染微生物资源及信息库的建立被引量：6
- 2021年
- 目的:利用分子生物学方法快速检测无菌药品生产企业生产过程中的污染微生物,并建立污染微生物资源及信息库,为药品生产企业追寻污染溯源提供相应的技术指导。方法:对某家药厂口服固体制剂、制药用水、工作人员及生产环境等环节进行为时半年的微生物监控。应用传统法及分子生物学法16Sr DNA序列比对鉴定污染微生物,并对结果进行分析与整理,初步建立药物污染微生物资源及信息库。结果:共收集294株微生物,其中生产环境微生物污染率最高,占全部污染源的92.5%;其次是口服固体制剂(3.7%)、制药用水(2.0%)、工作人员(1.7%)。污染微生物主要分布于20个属,35个种,其中葡萄球菌污染率最高达到56.3%;其次为芽胞杆菌(Bacillus)(17.6%)、微球菌(Micrococcus)(15.8%)和微细菌(Microbacteria)(4.0%)。根据鉴定结果从污染来源、培养特性、形态染色及菌株登录号四方面进行归纳总结,并用Excel及Word电子文档建立药物污染微生物资源库。结论:本研究在多个药物生产环节检测到种类繁杂的污染微生物。因此,建立制药企业污染微生物资源及信息库,能够为今后开展污染水平的风险评估和不良事件调查提供技术平台。
- 李南孙丽媛关奕泽赵远王鑫莹刘悦赵云冬
- 关键词：无菌药品沉降菌微生物污染
- 人参皂苷F2干预NF-κB通路抑制H2O2诱导的细胞凋亡被引量：5
- 2020年
- 本研究通过测定人参皂苷F2对凋亡细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率和线粒体膜电位的影响,运用q RT-PCR和Western blot检测F2对NF-κB凋亡信号通路中p65蛋白的影响。发现H2O2损伤细胞的LDH释放率较对照组的有明显提高42.72%;线粒体膜电位下降,损伤组的相对荧光值较对照组降低44.03%;NF-κB p65的蛋白和mRNA表达量分别为122.73%、1.66,明显高于对照组(p<0.05)。1.25、5、20μmol/LF2预处理损伤细胞后,LDH释放率较损伤组显著降低(p<0.05),分别降至82.71%、75.69%、69.61%;线粒体膜电位较损伤组显著提高,不同浓度F2的相对荧光值分别为:60.22%、62.76%、70.96%,(p<0.05);随着F2浓度的升高,NF-κB通路中p65的蛋白表达分别下降到79.49%、71.92%、58.39%,(p<0.05),mRNA表达下调至1.30、1.18、1.01,(p<0.05)。结果表明,人参皂苷F2能通过降低凋亡细胞的LDH释放率、升高线粒体膜电位、抑制NF-κB信号通路激活发挥抗凋亡作用,为人参皂苷抗氧化应激诱导的细胞凋亡提供实验依据。
- 刘迪于子翔张浩张寒雪孔繁利冯宪敏
- 关键词：人参皂苷抗凋亡人参
- 利伐沙班所致PLT计数和功能变化研究进展
- 2024年
- 血栓性疾病严重威胁着人类的生命健康。目前,临床治疗血栓性疾病以抑制凝血机制启动、阻断凝血酶活化为主要策略。利伐沙班作为一种新型口服抗凝药物,可以高效、准确地阻断血栓瀑布形成,具有靶向、低副作用、低出血风险的优势。随着利伐沙班的临床广泛使用,其对血小板(PLT)数量和功能的影响开始显现。文章就利伐沙班临床应用中引起的PLT计数和功能变化及其机制的相关研究进行综述,以期对用药期间患者凝血功能的合理评价提供参考。
- 熊天慧柴可宁夏薇曲林琳
- 关键词：血小板计数血小板聚集血小板活化P-选择素利伐沙班
- 多重PCR检测唾液标本中的幽门螺杆菌16S rRNA及cagA基因被引量：9
- 2021年
- 目的检测唾液标本幽门螺杆菌(Hp)的16S rRNA基因及cagA基因,了解消化道疾病患者口腔中Hp存在情况及致病情况。方法利用生物学信息技术,设计Hp 16S rRNA、cagA基因特异性引物,建立检测Hp 16S rRNA、cagA基因的多重PCR方法;重组克隆质粒构建标准阳性对照品;收集156例消化道疾病患者的唾液标本,提取唾液标本中细菌DNA,应用建立的多重PCR方法,检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因,并对结果进行分析。结果建立的检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因的多重PCR方法特异性强,灵敏性较高,最低检测线为10^(3) copies·μL^(-1);重组质粒pGMT-16s和pGMT-cagA,可作为鉴定Hp的标准阳性对照品;检测Hp感染的消化道疾病患者的唾液标本,口腔携带Hp 16S rRNA基因的阳性率为87.2%,cagA基因阳性率为23.1%。结论Hp感染的消化道疾病患者口腔唾液标本中存在Hp,口腔中存在Hp可能是诱发消化道Hp感染及治疗后复发的一个重要原因。
- 王鑫莹孙丽媛杨志平宋顺佳李南刘悦田婉佳赵云冬
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA基因唾液
