泰山医学院基础医学院神经生物学实验室
- 作品数：19 被引量：72H指数：5
- 相关机构：山东农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 生物发光共振能量转移技术及其应用被引量：10
- 2009年
- 生物发光共振能量转移(BRET)技术是近10年来出现的一种新的检测蛋白质-蛋白质相互作用的技术.它的最大优势是能在活细胞中实时进行检测,因此能够进行相互作用动力学的研究.本文系统阐述了BRET的原理和方法,综述了BRET技术的最新进展,以及该技术在G蛋白偶联受体(GPCRs)信号转导及药物发现中的应用.
- 李雅林白波陈京
- 关键词：蛋白质-蛋白质相互作用G蛋白偶联受体药物发现
- Apelin/APJ系统研究进展被引量：5
- 2009年
- Apelin肽家族是由单个基因编码并能够激活7次跨膜G蛋白偶联受体APJ的一组内源性活性肽.Apelin/APJ系统在心血管调节中具有降低血压、强的心脏收缩作用;在中枢神经系统中具有调节垂体激素释放、调节摄食、摄水、体液平衡等作用;作为脂肪细胞分泌的一个新的脂肪因子(adipo-kine),可调节胰岛素的分泌;而且,最新的研究表明,apelin能够促进血管的生成.Apelin/APJ系统有望成为心衰、高血压等心血管疾病以及肥胖相关疾病的治疗靶点.这篇综述的目的是总结apelin/APJ系统的特点及功能,为进一步研究该系统提供理论依据和线索,为开发新的治疗性的药物提供有吸引力的靶点.
- 李雅林白波陈京刘有旺
- 关键词：APELIN脂肪因子血管生成心血管系统中枢神经系统
- 局灶性脑缺血及脑缺血再灌注动物模型的制作被引量：23
- 2006年
- 目的:介绍一种简便易行的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备方法。方法:实验于2003-03/2005-03在泰山医学院神经生物学实验室完成。选择健康成年清洁级SD大鼠48只,随机数字表法分为假手术组6只,脑缺血组24只,脑缺血再灌注组18只。选择韩国产的3号圆柱形尼龙钓鱼线,直径0.2864mm,剪成长30mm若干段,将其一端粘少许用乙醇稀释合适浓度的指甲油,可形成一薄层保护膜,使插线前端光滑无锐缘,且插线前端无明显膨大,然后垂直倒放,自然凉干,于距处理端18,20mm处做黑色标记备用。自制插线从颈外动脉经颈内动脉插入,栓塞大脑中动脉,形成脑缺血状态,分别缺血30min,24h,2,3d,每个时相点6只。精确控制栓塞时间30min,拔出插线,形成脑缺血再灌注状态,分别再灌注24h,2,3d,每个时相点6只。观察动物模型的成功率,大鼠脑组织溴化2,3,5-氯化三苯基四氮唑红染色结果,光镜下脑组织尼氏小体的显示结果,脑细胞电镜观察结果,凋亡细胞观察结果。结果:①假手术组动物模型成功率为100%,脑缺血组动物模型成功率为91.7%,脑缺血再灌注组动物模型成功率为94.4%。②溴化2,3,5-氯化三苯基四氮唑红染色结果:脑缺血30min肉眼几乎分辨不出梗死灶;脑缺血24h梗死灶主要累及大脑皮质额叶颞侧及其纹状体颞侧靠近大脑皮质下的边缘部分;脑缺血2d梗死灶几乎累及缺血侧大脑半球额顶叶的全部及其纹状体的大部分;脑缺血3d梗死灶累及缺血侧的全部脑组织,甚至累及部分对侧脑组织;脑缺血再灌注显示梗死灶主要累及缺血侧大脑皮质颞侧及纹状体的颞侧部分。③尼氏染色结果显示脑缺血30min,脑组织结构无明显变化;脑缺血24h,脑损伤侧梗死区内广泛细胞坏死,部分细胞自溶;脑缺血30min再灌注24h,脑损伤侧呈现点状坏死灶;脑缺血2d,脑损伤侧呈现较多片状坏死灶;脑缺血30min再灌注2d脑细胞边界呈现毛刺�
- 张秋玲孙远标李金国陈小娱白波
- 关键词：脑缺血再灌注损伤凋亡细胞疾病模型
- 脑缺血后脑血流量的变化被引量：2
- 2009年
- 王晓哲白波张秋玲
- 关键词：脑缺血血流量微循环
- pRluc-KOR真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
- 2009年
- 目的:构建与海肾萤光素酶(Rluc)融合的κ型阿片受体(KOR)真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法(BRET)检测apelin受体和KOR之间的相互作用.方法:以质粒pcDNA3.1-KOR为模板,PCR方法扩增KOR.扩增的KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pRluc.将这两种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10.挑取菌落培养,提取质粒,行酶切鉴定及测序.将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(HEK293)细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察.结果:扩增出了1条1143 bp的片段,与预期的KOR大小相符,质粒酶切结果显示pRluc-KOR被切成2条片段,其中一条为pRluc载体大小,另一条为目的片段大小.经测序鉴定,序列与GenBank(NM_000912)中的序列高度同源.共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上.结论:构建成功了pRluc-KOR重组表达载体,此表达载体可用于检测KOR与apelin受体或与其他受体之间的相互作用.
- 李雅林白波陈京刘有旺刘海青于鹏丽
- 关键词：真核表达载体
- 吗啡对大鼠尾壳核神经元阿片受体基因表达的影响被引量：5
- 2005年
- 目的探讨较长时间给予吗啡对体外培养大鼠尾壳核神经元的μ、δ型阿片受体mRNA表达的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。结果吗啡可使μ、δ型阿片受体的mRNA水平显著降低(P<0.01),吗啡作用12h、24h和48h可使μ型阿片受体mRNA由0h时的94.8%分别降至50%、42.7%和67.2%;而对δ型阿片受体,则只有在24h和48h有明显的抑制作用(P<0.01),由0h时的95.8%分别降至59.5%和84.5%;吗啡在10-8mol/L时即可引起μ型阿片受体的mRNA水平显著降低,且该抑制效应在10-8mol/L^10-5mol/L浓度范围内呈明显的剂量依赖性,但对δ型阿片受体则在10-6mol/L时才有效。结论吗啡较长时间作用于原代培养大鼠尾壳核神经元,可明显抑制μ、δ型阿片受体的基因表达。
- 刘海青刘玉红陈京白波
- 关键词：吗啡Μ型阿片受体阿片受体核神经元基因表达
- 雌激素对去卵巢大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的探讨雌激素对去卵巢大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法将大鼠切除双侧卵巢后30d给予肌肉注射苯甲酸雌二醇100μg/(kg·d)连续14d,然后制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;制模12h后取脑组织行免疫组化染色,检测细胞间黏附分子(CD54)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;TUNEL法检测脑组织凋亡细胞数;电镜观察脑细胞膜超微结构的变化。结果与缺血再灌注组及去卵巢组比较,雌激素组脑组织CD54、TNF-α表达明显降低,凋亡细胞数明显减少(均P<0.05);脑细胞膜结构非特异性损伤减轻。结论雌激素通过减少缺血再灌注大鼠脑组织炎性细胞因子表达、减轻炎症反应、降低脑组织细胞凋亡而发挥脑保护作用。
- 张秋玲孙远标王晓哲李鸣白波
- 关键词：雌激素缺血再灌注凋亡细胞
- 首乌补肾方对脑缺血再灌注沙土鼠学习记忆能力和脑内氧化损伤影响的研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究首乌补肾方对脑缺血再灌注沙土鼠学习记忆能力和脑内氧化损伤的影响。方法采用夹闭双侧颈动脉法制备沙土鼠脑缺血再灌注模型,造模成功后,将实验动物随机分为5组,即缺血再灌注模型组、首乌补肾方高剂量组、首乌补肾方低剂量组、尼莫地平组和假手术对照组,观察用药后沙土鼠学习记忆能力的改变,检测血清及脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果与模型组相比,首乌补肾方两组沙土鼠学习记忆能力明显提高(P<0.01),脑和血清中SOD活力明显升高(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.01);且高剂量组与低剂量组之间存在量效关系。结论首乌补肾方可以明显改善脑缺血再灌注沙土鼠的学习记忆能力,其作用机制与减轻自由基脑内氧化损伤有关。
- 张强梁慧燕张秋玲
- 关键词：沙土鼠脑缺血再灌注丙二醛学习记忆
- 中缝大核内神经降压素对大鼠痛和电针镇痛作用的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨大鼠中缝大核 (NRM )内神经降压素 (NT)在电针镇痛中的作用 ,分析内源性NT和 5 HT在电针镇痛中作用的相互关系。方法 以钾离子透入法引起大鼠甩尾反应的电流强度 (mA)为痛反应指标 ,测定动物痛阈 ,观察中缝大核内神经降压素对痛和电针镇痛的影响。结果 大鼠中缝大核内微量注射神经降压素后 ,大鼠电针镇痛的效应明显增加 ;注入抗神经降压素血清或NT拮抗剂后 ,大鼠电针镇痛效应则明显降低。大鼠中缝大核内注入噻庚啶后 ,可阻断NT电针镇痛的效应。结论 大鼠中缝大核内的神经降压素在电针镇痛复杂病理生理过程中发挥着重要作用 ,至少其部分效应可能是通过内源性 5 HT系统中介的。
- 白波刘文彦魏然王宏刘玉红
- 关键词：神经降压素电针镇痛中缝大核
- μ型阿片受体的克隆及序列分析
- 2005年
- 目的 为实现人μ型阿片受体在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性、下游基因表达及功能研究,克隆了人全长μ型受体cDNA。方法 从人脑组织中提取总RNA ,通过逆转录巢式PCR ,扩增μ受体全长cDNA。克隆至pMD1 8 -T载体中,并进行了酶切、PCR鉴定及测序分析。结果 获得大小1 2 2 9bp大小的μ受体全长cDNA基因,并构建到载体中,为研究受体信号转导下游基因的表达奠定理论基础。结论 利用巢式RT PCR法成功克隆了的μ受体全长cDNA序列,构建了pT -MD/hμR质粒。
- 孙巧玲陈京白波
- 关键词：巢式PCR
